Efek hepatoprotektif jangka pendek ekstrak metanol biji persea americana mill. terhadap tikus terinduksi karbon tetraklorida - USD Repository

Gratis

0
0
128
6 months ago
Preview
Full text

  

EFEK HEPATOPROTEKTIF JANGKA PENDEK EKSTRAK

METANOL BIJI Persea americana Mill. TERHADAP TIKUS

TERINDUKSI KARBON TETRAKLORIDA

  Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm)

  Program Studi Farmasi

  

Diajukan oleh :

Maria Malida Vernandes Sasadara

NIM : 108114102

FAKULTAS FARMASI

  

UNIVERSITAS SANATA DHARMA

YOGYAKARTA

2013

  HALAMAN PERSEMBAHAN “Dan apa saja yang kamu minta dalam doa dengan penuh kepercayaan, kamu akan menerimanya” Matius 21:22 Dengan penuh syukur, saya mempersembahkan segala keberhasilan di setiap lembar kertas ini kepada Yesus dan Bunda Maria tercinta kepada Ayah Bunda dan saudara - saudari terkasih kepada sahabat - sahabat terbaik serta kepada semua orang yang diikatkan Tuhan dalam kehidupan saya

  Maria Malida Vernandes Sasadara “Jadilah garam dan terang dunia”

  

PRAKATA

  Puji dan syukur penulis panjatkan ke hadirat Tuhan Yang Maha Esa atas berkat dan rahmat-Nya, sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi dengan judul “Efek Hepatoprotektif Jangka Pendek Ekstrak Metanol Biji Persea

americana Mill. Terhadap Tikus Terinduksi Karbon Tetraklorida” ini dengan baik.

  Skripsi ini disusun untuk memenuhi salah satu syarat untuk memperoleh gelar Sarjana Farmasi Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta.

  Penyelesaian skripsi ini tentunya tidak lepas dari bantuan berbagai pihak, baik secara langsung maupun secara tidak langsung. Oleh karena itu penulis hendak mengucapkan terima kasih kepada : 1.

  Bapak Ipang Djunarko,M.Sc.,Apt., selaku Dekan Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma.

  2. Ibu Phebe Hendra, M.Si., Ph.D., Apt., selaku Dosen Pembimbing skripsi ini atas segala kesabaran untuk selalu membimbing, memberi motivasi, dan memberi masukan kepada penulis dalam menyusun skripsi ini.

  3. dr.Fenty,M.Kes.,Sp.PK dan Bapak Yohanes Dwiatmaka, M.Si selaku

  Dosen Penguji skripsi atas bantuan dan masukkan kepada penulis demi kemajuan skripsi ini.

  4. Ibu Rini Dwiastuti, M.Si., Apt., selaku Kepala Penanggung Jawab Laboratorium Fakultas Farmasi yang telah memberi izin dalam penggunaan fasilitas laboratorium Farmakologi-Toksikologi,

  Farmakognosi-Fitokimia dan Farmasi Fisika demi terselesaikannya skripsi ini.

  5. Pak Parjiman selaku laboran Laboratorium Farmakologi-Toksikologi, Pak Heru selaku laboran Laboratorium Biofarmasetika-Farmakokinetika, Pak Kayat selaku laboran Laboratorium Biokimia, dan Pak Wagiran selaku laboran Laboratorium Farmakognosi-Fitokimia, serta Pak Andri selaku laboran di kebun obat, atas segala bantuan dan kerja sama selama di laboratorium.

  6. Ayah, Bunda, Saudara-saudariku Mbak Dede dan Sasa yang telah mendukung dari awal sampai akhir penelitian ini, terima kasih atas doa, dukungan semangat dan perhatiannya, juga Fluffy serta Naruto atas eksistensinya yang menjaga semangatku tetap menyala.

  7. Rekan – rekan penelitian tim biji alpukat Yudhytha Anggarhani Quraisyin, Angelia Rosari, Robert Dwijantara Putra, Liana Risha Gunawan, Priscilla Diana Vivi Vionita, Rotua Winata Nopelia Silitonga, Komang Ayu Nopitasari, Inneke Devi Permatasari, Adrienne Roma Alphayovita, Gideon Krisnadi Yoseph, Ni Luh Putu Dian Prawita Putri, Lydia Setiawan, Irene dan Ike Kumalasari.

  8. Teman – teman seperjuangan dan teman-teman terbaik Ribka Alvianita, Brigitta Lynda, Maria Dyah Kartika, Anastasia Ika, Arellia Oktaviori, Yudhytha Anggarhani, Angelia Rosari, Agriva Devaly, Evan Gunawan, Stefanus Indra, Anggun Indah, Lukas Surya, Cornelia Melinda, Juana Merianti, Desi Irwanta, Theresia Nurida, Sherly Damima, Antonio

  Leonardo, Suryo Halim, Christian Januari Pratama, Djanuar Davidzon Pah, Reza Pahlevi Adisaputra dan semua teman – teman FKK B 2010, terima kasih untuk kebersamaan kita.

  9. Teman-teman anggota Badan Eksekutif Mahasiswa Fakultas Farmasi periode 2013-2014 dan Wakil Gubernur Maria Gabriela Roswita dan Febianta Octora Bangun yang juga adalah sahabat-sahabat baik yang selalu bersedia menjadi tempat curahan hati.

  10. Pihak-Pihak lain yang turut membantu penulis namun tidak dapat disebutkan satu persatu.

  Penulis menyadari bahwa setiap manusia tidak ada yang sempurna. Oleh karena itu, penulis mengharapkan adanya kritik, saran dan masukan demi kemajuan di masa yang akan datang. Semoga tulisan ini dapat memiliki manfaat sekecil apapun bagi perkembangan ilmu pengetahuan khususnya di bidang kefarmasian, serta semua pihak, baik mahasiswa, lingkungan akademis, maupun masyarakat.

  Yogyakarta, Penulis

  DAFTAR ISI HALAMAN JUDUL ..................................................................................................... i HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING ............................................................ ii HALAMAN PENGESAHAN ........................................................................................ iii HALAMAN PERSEMBAHAN .................................................................................... iv LEMBAR PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI KARYA

  ILMIAH ..................................................................................................................... v PERNYATAAN KEASLIAN KARYA .......................................................................... vi PRAKATA ..................................................................................................................... vii DAFTAR ISI .................................................................................................................. x DAFTAR TABEL ........................................................................................................... xiv DAFTAR GAMBAR ..................................................................................................... xvii DAFTAR LAMPIRAN .................................................................................................. xviii

  INTISARI ..................................................................................................................... xix ABSTRACT ................................................................................................................... xx

  BAB I. PENGANTAR A. Latar Belakang Penelitian ................................................................................

  1 B. Rumusan Masalah ............................................................................................

  4 C. Keaslian Penelitian...........................................................................................

  4 D. Manfaat Penelitian ...........................................................................................

  5 E. Tujuan Penelitian .............................................................................................

  5 BAB II. TINJAUAN PUSTAKA A.

  Tanaman Persea americana Mill.

  1.

  7 Sinonim .......................................................................................................

  7 3.

  2. Nama Daerah ...............................................................................................

  7 Klasifikasi....................................................................................................

  4.

  8 Kandungan .................................................................................................

  8 B. Hati 1.

  5. Khasiat dan Kegunaan .................................................................................

  Anatomi dan Fisiologi Hati .........................................................................

  9 2.

  13 Kerusakan Hati ............................................................................................

  C.

  17 Hepatotoksin ......................................................................................................

  D.

  Karbon Tetraklorida ...........................................................................................

  18 E.

  22 Metanol ..............................................................................................................

  F.

  Metode Ekstraksi ................................................................................................

  23 G.

  24 Alanin Aminotransferase dan Aspartate Transaminase .....................................

  H.

  25 Landasan Teori ...................................................................................................

  26 BAB III. METODE PENELITIAN A.

  I. Hipotesis .............................................................................................................

  Jenis dan Rancangan Penelitian .........................................................................

  27 B.

  27 Variabel Penelitian dan Definisi Operasional ....................................................

  1.

  27 Variabel Utama .............................................................................................

  28 3.

  2. Variabel Pengacau ........................................................................................

  28 Definisi Operasional.....................................................................................

  C.

  29 Subjek dan Bahan Penelitian ..............................................................................

  1.

  29 Subjek Penelitian ..........................................................................................

  2.

  29 Bahan Utama ................................................................................................

  29 D.

  3. Bahan Kimia.................................................................................................

  32 Alat Penelitian ....................................................................................................

  E.

  Tata Cara Penelitian ........................................................................................... 32 1.

  Determinasi serbuk biji P.americana ...........................................................

  32 2.

  33 Pengumpulan bahan uji ................................................................................

  33 4.

  3. Pembuatan serbuk biji P.americana .............................................................

  33 Penetapan kadar air pada serbuk kering biji P.americana ...........................

  5.

  34 Pembuatan ekstrak metanol-air biji P.americana .........................................

  6. Pembuatan larutan Natrium-Carboxy Methyl Cellulosa (CMC-Na) 1% ..............................................................................................

  35 7. Pembuatan suspensi ekstrak ekstrak metanol-air biji P.

  americana dalam CMC-Na 1% ....................................................................

  35 8. ) konsentrasi 50% .................

  36 Pembuatan larutan karbon tetraklorida (CCl

  4 9.

  Uji pendahuluan ...........................................................................................

  36 a.

  36 Penetapan dosis hepatotoksik karbon tetraklorida .................................

  b.

  Penetapan waktu pencuplikan darah ......................................................

  37 10.

  37 Pengelompokan dan perlakuan hewan uji ....................................................

  11.

  38 Pembuatan serum .........................................................................................

  38 F.

  12. Pengukuran aktivitas ALT dan AST serum ..................................................

  39 Tata Cara Analisis Hasil .....................................................................................

  BAB IV. HASIL DAN PEMBAHASAN A.

  40 Penyiapan Bahan ................................................................................................

  1. Hasil determinasi tanaman .........................................................................

  52 3. Kontrol hepatotoksin .................................................................................

  65 LAMPIRAN ...................................................................................................................

  64 DAFTAR PUSTAKA .....................................................................................................

  64 B. Saran ...................................................................................................................

  Kesimpulan ........................................................................................................

  61 BAB V. KESIMPULAN DAN SARAN A.

  55 E. Rangkuman Pembahasan .................................................................................

  4. Perlakuan Jangka Pendek Ekstrak Metanol-Air Biji P.americana Terhadap Tikus Terinduksi Karbon Tetraklorida .................

  54

  50 2. Kontrol perlakuan .....................................................................................

  40 2. Pembuatan serbuk biji P.americana ...........................................................

  49 1. Kontrol negatif ..........................................................................................

  45 D. Efek Hepatoprotektif Jangka Pendek Ekstrak Metanol-Air Biji

P.americana Terhadap Tikus Jantan Terinduksi Karbon Tetraklorida ...............

  45 3. Penentuan waktu pencuplikan darah ..........................................................

  44 2. Penentuan dosis ekstrak metanol-air biji P.americana ..............................

  44 1. Penentuan dosis hepatotoksik ....................................................................

  42 C. Uji Pendahuluan .................................................................................................

  42 B. Hasil Penimbangan Bobot Ekstrak Metanol-Air Biji P.americana ....................

  41 3. Penetapan kadar air serbuk biji P.americana .............................................

  71 BIOGRAFI PENULIS ................................................................................................... 108

  DAFTAR TABEL Tabel 1. Aktivitas ALT dan AST serum setelah pemberian karbon tetraklorida dosis 2 ml/kg BB pada selang waktu 0, 24 dan 48 jam ............... 46 Tabel II. Hasil uji statistik aktivitas ALT serum setelah pemberian karbon tetraklorida dosis 2 ml/kg BB pada waktu pencuplikan darah jam ke-0, 24 dan 48 .................................................................................................

  47 Tabel III. Hasil uji statistik aktivitas AST serum setelah pemberian karbon tetraklorida dosis 2 ml/kg BB pada waktu pencuplikan darah jam ke-0, 24 dan 48 .................................................................................................

  48 Tabel IV. Pengaruh perlakuan jangka pendek ekstrak metanol-air biji

  P.americana dosis 350mg/kgBB berdasarkan aktivitas ALT dan

  AST serum pada beberapa variasi waktu terhadap hepatotoksisitas karbon tetraklorida ...........................................................................................

  50 Tabel V. Aktivitas ALT dan AST pada pemberian olive oil 2ml/kgBB pada jam ke-0 dan 24 ................................................................................................

  51 Tabel VI. Hasil uji statistik aktivitas ALT dan AST serum setelah pemberian olive oil dosis 2 ml/kg BB pada pencuplikan darah jam ke-0 dan 24 .......................................................................................................

  51 Tabel VII. Hasil uji statistik perlakuan jangka pendek ekstrak metanol-air biji P.americana dosis 350 mg/kgBB berdasarkan aktivitas serum ALT serum pada beberapa variasi waktu .........................................................

  56

  Tabel VIII. Hasil uji statistik perlakuan jangka pendek ekstrak metanol-air biji P.americana dosis 350 mg/kgBB berdasarkan aktivitas serum AST serum pada beberapa variasi waktu .........................................................

  56 Tabel IX. Data Purata dan Standar Error Aktivitas Serum ALT/AST pada jam 0, 24 dan 48 ............................................................................................

  75 Tabel X. Hasil uji statistik aktivitas ALT serum setelah pemberian karbon tetraklorida dosis 2 ml/kg BB pada waktu pencuplikan darah jam ke-0, 24 dan 48 ..............................................................................................

  80 Tabel XI. Hasil uji statistik aktivitas AST serum setelah pemberian karbon tetraklorida dosis 2 ml/kg BB pada waktu pencuplikan darah jam ke-0, 24 dan 48 ..............................................................................................

  81 Tabel XII. Data Purata dan Standar Error Aktivitas ALT dan AST serum kelompok kontrol negatif (olive oil 2ml/kgBB) pada jam ke-0 dan 24 ...................................................................................................................

  81 Tabel XIII. Data pengaruh perlakuan jangka pendek ekstrak metanol-air biji

  P.americana dosis 350 mg/kgBB berdasarkan aktivitas ALT dan

  AST serum pada variasi waktu 1, 4 dan 6 jam terhadap hepatotoksisitas karbon tetraklorida ..............................................................

  85 Tabel XIV. Hasil uji statistik perlakuan jangka pendek ekstrak metanol-air biji P.americana dosis 350 mg/kgBB berdasarkan aktivitas ALT serum pada beberapa variasi waktu ............................................................... 103

  Tabel XV. Hasil uji statistik perlakuan jangka pendek ekstrak metanol-air biji P.americana dosis 350 mg/kgBB berdasarkan aktivitas serum AST pada beberapa variasi waktu ................................................................. 104

  Tabel XVI. Hasil penetapan kadar air serbuk biji P.americana ..................................... 106 Tabel XVII. Hasil pengukuran validitas dan reabilitas .................................................. 107

  DAFTAR GAMBAR Gambar 1. Anatomi hati .................................................................................................

  9 Gambar 2. Struktur unit fungsional hati (lobulus) .........................................................

  11 Gambar 3. Struktur kimia karbon tetraklorida ...............................................................

  18 Gambar 4. Mekanisme biotransformasi dan oksidasi karbon tetraklorida .....................

  19 Gambar 5. Struktrur kimia metanol ...............................................................................

  22 Gambar 6. Diagram batang rata-rata aktivitas ALT serum sel hati tikus setelah pemberian karbon tetraklorida dosis 2 ml/kg BB pada selang waktu 0, 24 dan 48 jam ....................................................................

  46 Gambar 7. Diagram batang rata-rata aktivitas AST serum sel hati tikus setelah pemberian karbon tetraklorida dosis 2 ml/kg BB pada selang waktu 0, 24 dan 48 jam ....................................................................

  47 Gambar 8. Diagram batang rata-rata pengaruh perlakuan jangka pendek pemberian ekstrak metanol-air terhadap hepatotoksisitas karbon tetraklorida dilihat dari aktivitas serum ALT ..............................................

  57 Gambar 9. Diagram batang rata-rata pengaruh perlakuan jangka pendek pemberian ekstrak metanol-air terhadap hepatotoksisitas karbon tetraklorida dilihat dari aktivitas AST serum ..............................................

  58 Gambar 10. Biji P.americana Mill. ............................................................................... 72 Gambar 11. Ekstrak metanol - air biji P.americana .......................................................

  72

  DAFTAR LAMPIRAN Lampiran 1. Foto biji P.americana. ...............................................................................

  72 Lampiran 2. Foto ekstrak metanol-air biji P.americana ................................................

  72 Lampiran3. Perhitungan Persen Rendemen Ekstrak Metanol-Air biji P.americana ..............................................................................................

  72 Lampiran 4. Surat Determinasi Tanaman Biji P.americana ..........................................

  73 Lampiran 5. Surat Ethical Clearence ............................................................................

  74 Lampiran 6. Hasil Uji Statistik Orientasi Pencuplikan Darah .......................................

  75 Lampiran 7. Hasil Uji Statistik Kelompok Kontrol Negatif ..........................................

  81 Lampiran 8. Hasil Uji Statistik aktivitas ALT serum tikus jantan setelah praperlakuan ekstrak metanol-air biji P.americana pada jam ke-1,4 dan 6 .......................................................................................

  85 Lampiran 9. Perhitungan konversi dosis untuk manusia .............................................. 104 Lampiran 10. Perhitungan Efek Hepatoprotektif .......................................................... 105 Lampiran 11 . Konversi waktu tikus ke manusia .......................................................... 105 Lampiran 12. Perhitungan penetapan kadar air pada serbuk biji P.americana ............. 106 Lampiran 13. Hasil pengukuran validitas dan reablitas ................................................. 107

  

INTISARI

  Penelitian ini bertujuan untuk membuktikan adanya efek hepatoprotektif jangka pendek ekstrak methanol-air biji Persea americana pada tikus jantan galur Wistar terinduksi karbon tetraklorida dan melihat waktu pemberian ekstrak yang paling efektif dengan melihat aktivitas alanine aminotransferase dan aspartate

  transaminase.

  Penelitian merupakan penelitian eksperimental murni dengan rancangan acak lengkap pola searah. Tikus dibagi secara acak dalam 6 kelompok perlakuan. Kelompok I sebagai kontrol negatif diberikan olive oil dosis 2ml/kg BB. Kelompok II sebagai kontrol perlakuan diberikan ekstrak metanol-air biji

  

P.americana dosis 350 mg/kgBB. Kelompok III sebagai kontrol hepatotoksin

  diberikan karbon tetraklorida dosis 2ml/kg BB. Kelompok IV, V dan VI sebagai kelompok perlakuan diberikan ekstrak metanol-air biji Persea americana dosis 350 mg/kg BB secara peroral kemudian secara berturut-turut pada jam ke-1, 4 dan 6 setelah pemberian ekstrak metanol-air dilakukan pemejanan karbon tetraklorida dosis 2 ml/kg BB secara intraperitoneal lalu diambil darahnya pada jam ke-24 melalui sinus orbitalis untuk dilakukan penetapan aktivitas ALT dan AST serum. Data aktivitas ALT dan AST serum dianalisis secara statistik dengan menggunakan ANOVA satu arah dan Scheffe untuk data yang terdistribusi normal dan Kruskall-Wallis dan Mann-Whitney untuk data yang terdistribusi tidak normal.

  Pemberian ekstrak metanol-air biji P.americana pada jam ke-1,4 dan 6 memberikan efek hepatoprotektif yang berbeda signifikan antar kelompok dengan persen hepatoprotektif secara berturut turut adalah sebesar 67,7 ; 92,5 dan 101%. Waktu pemberian paling efektif diberikan pada perlakuan jam ke-6.

  

Kata kunci :Persea americana Mill. , hepatoprotektif, karbon tetraklorida,

alanine aminotransferase (ALT), aspartate transaminasee (AST)

  

ABSTRACT

  The purpose of the research is to prove the hepatoprotective effect of methanol-water extract of Persea Americana Mill. seed in short-term to male Wistar rate induced by carbon tetrachloride and to get the effective time of methanol-water extract use that gives the most effective effect for reducing

  alanine aminotransferase dean aspartate transaminase activity.

  The research is pure experimental study using completely randomized design. Rats divided randomly into six groups. First group (negative control) was given olive oil 2ml/kgBW. Second group (extract control P.americana seed) was given methanol-water extract of P.americana seed 350 mg/kg BW. Third group (hepatotoxin control) was given carbon tetrachloride 2ml/kg BW. Fourth, fifth and sixth group were given methanol-water extract of P.americana seed dose 350 mg/kg BW orally and then 1 hour, 4 and 6 hours after gave the treatment, groups were given suspension of carbon tetrachloride dose 2ml/kg BW intraperitoneally. After 24 hours, blood was taken from sinus orbitalis eyes for measuring ALT-AST serum activity. ALT and AST serum data were statistically analyzed with one way ANOVA and Scheffe for normal distribution data and Kruskall-Wallis and Mann- Whitney for abnormal distribution data.

  The result showed that used of methanol-water extract of P.americana seed for 1,4 and 6 hours were significantly different each other with hepatoprotective effect were 67,7 ; 92,5 and 101% respectively. The most effective time was showed in 6 hours treatment.

  

Keywords: Persea americana Mill. , hepatoprotective, carbon tetrachloride,

alanine aminotransferase (ALT), aspartate transaminase (AST)

BAB I PENGANTAR A. Latar Belakang Penelitian Hati merupakan organ dengan peranan yang penting dalam

  mempertahankan hidup dan dalam hampir setiap proses metabolisme dalam tubuh (Price and Wilson, 2005). Faktor-faktor yang dapat memicu kerusakan pada hati adalah induksi obat, infeksi virus dan reaksi imunologi (Williamson, David, dan Fred 1996).

  Penyakit hati kini telah menjadi salah satu fokus utama WHO dalam meningkatkan kesehatan global. WHO (2009) melaporkan bahwa pada tahun 2004 kanker hati mengakibatkan kematian pada 610.000 orang. Sekitar 1,4 juta kasus kematian di tahun 2010 disebabkan karena penyakit hati. Di Afrika, 90% anak terinfeksi virus hepatitis A pada usia 10 tahun. Di Asia Tenggara, 14 juta penduduk terinfeksi hepatitis E dan 50 juta penduduk terinfeksi hepatitis C kronis (WHO, 2013). Menurut Hasan, Gani, dan Machmud (cit., Farrell, George, Hall dan McCullough, 2005), 30% penduduk Indonesia mengalami perlemakan hati non-alkoholik. Pada tahun 2012, Indonesia tidak menerapkan suatu sistem pengawasan khusus terhadap virus hepatitis dan tidak memiliki kebijakan nasional terkait pemberian vaksin hepatitis A. Kebijakan terkait pencegahan transmisi hepatitis B dari ibu ke anak dan strategi khusus untuk mencegahan hepatitis B dan C belum ditetapkan di Indonesia (WHO, 2013). Survei yang dilakukan pada 975 orang di kota Depok menunjukkan bahwa perlemakan hati memiliki prevalensi yang paling tinggi diantara penyakit tidak menular lainnya seperti diabetes, hipertensi, batu empedu dan lain-lain. Prevalensi yang ditunjukkan memiliki angka lebih tinggi dibandingkan dengan di negara – negara lain seperti Amerika, Kanada, Italia maupun Jepang (Machmud, 2000).

  Tumbuh-tumbuhan dapat menjadi suatu alternatif pengobatan yang dilakukan untuk mencegah bahkan mengobati penyakit (Donatus, 2001).

  Indonesia sebagai negara dengan biodiversitas tinggi memiliki 30.000 jenis tumbuhan dan 7.000 di antaranya merupakan tanaman obat (Sampurno, 2003).

  

Persea americana Mill. atau yang disebut sebagai alpukat di Indonesia adalah

  salah satu tanaman yang berkhasiat dalam pengobatan. Ekstrak metanol buah

  

P.americana diketahui memiliki efek sebagai hepatoprotektor pada kerusakan hati

  yang disebabkan karena toksisitas akut parasetamol. Mekanisme proteksi diperoleh dari aktivitas antioksidan buah P.americana (Yasir, Das, dan Kharya, 2010). P.americana memiliki khasiat sebagai antioksidan yang diperoleh dari kandungan fenolnya. Menurut Williams (cit., Bashandy dan AlWasel, 2011), antioksidan banyak didistribusikan dalam buah-buahan dan bermanfaat dalam memberikan proteksi tubuh terhadap hepatotoksisitas.

  Senyawa fenolik yang banyak diperhatikan yaitu tanin terhidrolisa, flavonoid dan tanin terkondensasi (Subroto dan Saputro, 2006). Pada ekstrak metanol biji P.americana ditemukan kandungan fitokimia berupa flavonoid, tanin terkondensasi, antosianin, alkaloid, dan triterpen (Leite et al., 2009). Yuko dan Jun (2003) melaporkan bahwa aktivitas antioksidan yang potensial ditemukan pada ekstrak metanol biji P.americana.

  Bentuk sediaan yang digunakan pada penelitian ini yaitu ekstrak metanol-air. Yasir, et al. (2010) membuktikan bahwa ekstrak metanol buah

  

P.americana memiliki efek hepatoprotektif. Kandungan fenolik terutama

  flavonoid pada tumbuhan merupakan senyawan poten yang larut dalam air dan memiliki aktivitas antioksidan yang baik. Biji buah P.americana mengandung sekitar 1,90 mg flavonoid pada 100g serbuk biji (Arukwe et al., 2012). Oleh karena itu, dengan penggunaan pelarut penyari metanol-air, diharapkan dapat diperoleh senyawa antioksidan.

  Salah satu senyawa yang dapat digunakan sebagai senyawa model dalam kerusakan hati adalah karbon tetraklorida (CCl

  4 ). Karbon tetraklorida bersifat

  toksik bagi tubuh terutama bagi organ hati, ginjal, dan sistem saraf pusat (United

  

States Environment Protection Agency, 2007). Kerusakan pada hati tikus setelah

  penginduksian karbon tetraklorida pertama kali dilaporkan pada tahun 1936 (Amartya, Parthaa, Upal, dan Shibnath, 2009) dan secara luas telah digunakan dalam penelitian (Handa and Sharma, 1990). Karbon tetraklorida dimetabolisme oleh sitokrom P-450 pada retikulum endoplasma dan mitokondria dengan membentuk radikal bebas oksidatif reaktif CCl

  3 O (Deshwal,Sharma dan Sharma,

  2011). Karbon tetraklorida menyebabkan perubahan pada lemak sebagai manifestasi adanya kerusakan pada hati (Deshwal, et al, 2011).

  Keberadaan antioksidan pada biji P.americana diharapkan dapat memberikan efek proteksi bagi hati pada toksisitas karbon tetraklorida.

  Eksplorasi terhadap tanaman P.americana memang telah banyak dilakukan, namun eksplorasi terhadap biji buah P.americana belum banyak dilakukan terutama di Indonesia. Penelitian dilakukan secara jangka pendek untuk melihat waktu pemberian ekstrak paling efektif. Oleh karena itu, penelitian efek hepatoprotektif jangka pendek ekstrak metanol-air biji P.americana pada tikus jantan terinduksi karbon tetraklorida menarik untuk diteliti.

B. Rumusan Masalah 1.

  Apakah pemberian ekstrak metanol-air biji Persea americana Mill. dalam penggunaan jangka pendek dapat memberikan efek hepatoprotektif pada tikus terinduksi karbon tetraklorida dengan melihat adanya penurunan aktivitas

  alanine aminotransferase (ALT) dan aspartate transaminase (AST) serum ? 2.

  Berapakah waktu paling efektif ekstrak metanol-air biji Persea americana Mill. penggunaan jangka pendek dalam memberi efek hepatoprotektif pada tikus terinduksi karbon tetraklorida ?

C. Kaslian Penelitian

  Penelitian menggunakan biji P.americana pernah dilakukan oleh Arukwe

et al. (2012), melaporkan kandungan fitokimia pada biji P.americana. Leite et al.

  (2009) melaporkan bahwa pada ekstrak metanol-air biji P.americana terdapat kandungan fitokimia berupa flavonoid, antosianin, tanin terkonsendasi, alkaloid dan triterpen. Kate dan Lucky (2009) melaporkan bahwa biji P. americana dapat secara signifikan menurunkan tekanan darah, kadar kolesterol, glukosa, urea, sodium dan memiliki kecenderungan berfungsi sebagai antihipertensi dan penurun kolesterol. Berdasarkan penelusuran pustaka, efek hepatoprotektif jangka pendek ekstrak metanol-air biji P.americana terhadap tikus terinduksi karbon tetraklorida belum pernah dilakukan.

D. Manfaat Penelitian 1.

  Manfaat Teoritis Penelitian ini diharapkan dapat bermanfaat bagi perkembangan ilmu pengetahuan khususnya ilmu kefarmasian dalam penggunaan tanaman obat terutama penggunaannya sebagai hepatoprotektor jangka pendek.

  2. Manfaat Praktis Penelitian ini diharapkan dapat memberikan informasi kepada masyarakat mengenai waktu efektif pemberian ekstrak metanol-air biji

  P.americana sebagai hepatoprotektor.

E. Tujuan Penelitian 1.

  Tujuan Umum Membuktikan adanya efek hepatoprotektif pemberian jangka pendek ekstrak metanol-air biji P.americana pada tikus jantan terinduksi karbon tetraklorida dengan melihat penurunan aktivitas ALT dan AST serum.

  2. Tujuan Khusus a.

  Mengetahui penurunan aktivitas ALT dan AST serum akibat pemberian jangka pendek ekstrak metanol-air biji P.americana pada tikus jantan yang terinduksi karbon tetraklorida. b.

  Mengetahui waktu efektif pemberian ekstrak metanol-air biji P.americana pada penggunaan jangka pendek dalam memberikan efek hepatoprotektif pada tikus jantan yang terinduksi karbon tetraklorida.

BAB II TINJAUAN PUSTAKA A. Tanaman Persea americana Mill 1. Sinonim Laurus persea L, Persea drymifolia Schlecht. and cham, Persea gratissima Gaertn.f., Persea nubigena (Yasir et al., 2010).

  2. Nama Daerah Indonesian: adpukat, avokad, apuket, alpukat ; Malaysia : apukado, avocado ; Thailand : awokado ; Filipino: avocado ; Vietnam : bo,lê dâù

  (Yasir et al., 2010).

  3. Klasifikasi Kingdom : Plantae Subkingdom : Tracheobionta Super Divisi : Spermatophyta Divisi : Magnoliophyta Kelas : Magnoliopsida Sub Kelas : Magnoliidae Ordo : Laurales Famili : Lauraceae Genus : Persea Spesies : Persea americana Mill. (Yasir et al., 2010).

  4. Kandungan Biji P.americana mengandung 13,6% tanin dan 13,25% kanji. Asam amino yang dilaporkan terdapat pada minyak biji yaitu asam kaprik 0,6% ; miristat 1,7% ; palmitat 23,4% ; stearat 8,7% ; oleat 15,1% ; linoleat 24,1% ; dan linolenat 2,5%. Biji kering P.americana mengandung 1,33% lilin kuning yang mengandung sterol dan asam-asam organik. Biji dan akar mengandung antibiotik yang dapat mencegah terjadinya cacat pada makanan (Kate dan Lucky, 2009).

  Kandungan fitokimia lainnya yang dilaporkan terdapat pada biji

  P.americana adalah triterpen, asam lemak, dimer flavonol, proantosianidin

  dan asam absisat, sedangkan ekstrak metanol biji P.americana mengandung flavonoid, antosianin, tanin terkondensasi, alkaloid, dan triterpen (Leite et al., 2009). Arukwe et al. (2012) melaporkan bahwa pada 100 gram biji

  P.americana mengandung 19,21 mg saponin ; 0,24 mg tanin ; 1,90 mg

  flavonoid ; 0,06 mg glikosida sianogenik ; 0,72 mg alkaloid ; 6,14 mg fenol dan 0,09 mg steroid.

  5. Khasiat dan kegunaan Bagi tubuh, secara signifikan P.americana dapat menurunkan tekanan darah pada keadaan hipertensi dan mereduksi kadar kolesterol, glukosa, urea dan sodium (Kate dan Lucky, 2009). Kandungan fitokimia pada P.americana juga dapat digunakan sebagai antifungi dan larvasidal (Leite et al., 2009), antiinflamasi, antikanker, antihipertensi, analgesik, dan antioksidan (Arukwe et al., 2012).

  Dalam penelitiannya, Asaolu et al. (2010) menyatakan bahwa terjadi penurunan level kolesterol, trigliserida, dan low density lipoprotein

  cholesterol yang signifikan setelah pemberian ekstrak metanol biji P.americana pada tikus yang diberikan kolesterol secara akut. Ekstrak

  metanol biji P.americana dapat menjadi suplemen yang efektif bagi pasien hiperglikemi.

  B. Hati 1.

  Anatomi dan Fisiologi Hati Hati merupakan kelenjar terbesar dan salah satu yang terumit dalam tubuh manusia dengan berat rata-rata sekitar 1.500 gram atau sekitar 2% dari berat badan orang dewasa normal. Hati adalah organ lunak dan lentur yang dicetak oleh struktur sekitarnya. Hati terletak di bagian kanan bawah diafragma dan sebagian di sebelah kiri bawah. Organ ini melindungi pankreas, ginjal kanan, lambung dan usus (Price and Wilson, 2005).

  Gambar 1. Anatomi hati (Pearce, 2009) Hati memiliki empat lobus yaitu sebuah lobus kanan yang lebih besar dibandingkan lobus kiri (Gambar 1) dan dua lobus lainnya adalah lobus kaudatus dan kuadratus yang berada di permukaan posterior (Nurachmah dan Angriani, 2011). Permukaan atas hati yang berbentuk cembung terletak di bawah diafragma dan permukaan bawah yang tidak rata memperlihatkan lekukan. Permukaan hati dilintasi oleh pembuluh-pembuluh darah. Belahan kanan dan kiri atas dipisahkan oleh fisura falsiformis (Pearce, 2009).

  Fungsi hati dapat dibagi dalam dua kategori umum. Pertama, hati terlibat dalam proses zat-zat yang diabsorbsi, baik nutrien maupun toksin.

  Dalam hal ini hati bertanggung jawab terhadap metabolisme berbagi zat yang dihasilkan pencernaan dan absorpsi makanan dari usus. Kedua, hati memiliki fungsi eksokrin penting yang terlibat dalam produksi asam empedu dan cairan alkali yang digunakan untuk pencernaan dan absorpsi lemak dan untuk netralisasi asam lambung, pemecahan dan produksi produk-produk buangan metabolisme setelah pencernaan, detoksifikasi zat-zat beracun atau berbahaya, dan ekskresi produk buangan dan detoksifikasi zat-zat di empedu (Ward,Clarke and Linden, 2009).

  Hati menerima 25% dari curah jantung meskipun memiliki berat hanya 2% berat badan. Total aliran darah hepatik sebesar 100 – 300 ml/menit per 100 gram berat hati atau 30 ml/menit per kilogram berat badan. Seperlima hingga sepertiga aliran darah hepatik disuplai oleh arteri hepatika dan sekitar dua pertiga suplai darah hepatik adalah darah vena porta hepatika (Lautt, 2009).

  Hati merupakan suatu kumpulan besar sel reaktan kimia dengan laju metabolisme yang tinggi, saling memberikan substrat dan energi dari satu sistem metabolisme ke sistem yang lain, mengolah dan menyintesis berbagai zat yang diangkut ke daerah tubuh lainnya, dan melakukan berbagai fungsi metabolisme lain. Medium kimia yang aktif dari hati dikenal kemampuannya dalam melakukan detoksifikasi atau ekskresi berbagai obat-obatan (Guyton and Hall, 2007).

  Gambar 2. Struktur unit fungsional hati (lobulus) (Sherwood, 2011).

  Hati tersusun atas unit-unit fungsional yang dikenal sebagai lobulus, yaitu susunan jaringan berbentuk heksagonal yang mengelilingi satu vena sentral (Gambar 2). Di setiap enam sudut luar lobulus terdapat tiga pembuluh cabang arteri hepatika, cabang vena porta hepatika dan duktus biliaris. Darah dari cabang arteri hepatika dan vena porta hepatika mengalir dari perifer lobulus ke ruang kapiler luas yang disebut sinusoid (Sherwood, 2011). Hati manusia memiliki 50.000 sampai 10.000 lobulus silindris dengan panjang beberapa milimeter dan diameter 0,8 sampai 2 milimeter (Guyton dan Hall, 2007).

  Sinusoid dibatasi oleh sel fagositik atau sel Kupffer yang merupakan sistem monosit-makrofag dengan fungsi utama adalah menelan bakteri dan benda asing di dalam darah. Lima puluh persen dari semua makrofag dalam hati merupakan sel Kupffer sehingga hati merupakan salah satu organ penting yang berperan dalam pertahanan melawan invasi bakteri dan agen toksik (Price and Wilson, 2005).

  Lobulus hati terbentuk mengelilingi sebuah vena sentral yang mengalir ke vena hepatika dan kemudian ke vena kava. Lobulus sendiri dibentuk terutama dari banyak lempeng sel hati yang menyebar dari vena sentral seperti jeruji roda. Masing-masing lempeng sel hati tebalnya dua sel, dan diantara sel yang berdekatan terdapat kanalikuli biliaris kecil yang mengalir ke duktus biliaris di dalam septum fibrosa yang memisahkan lobulus hati yang berdekatan (Guyton dan Hall, 2007).

  Sel-sel yang membawa darah menuju hati ini sering bersifat toksik dan tidak membawa oksigen yang memperbesar kemungkinan terjadinya kerusakan hati (Wibowo dan Paryana, 2009). Sekitar sepertiga darah yang masuk adalah darah arteri dan duapertiganya adalah darah vena dari vena porta hepatika. Volume darah total yang melewati hati setiap menitnya adalah 1.500 ml dan dialirkan melalui vena hepatika kanan dan kiri yang selanjutnya bermuara pada vena kava inferior (Price and Wilson, 2005).

  Hati memiliki kemampuan regenerasi yang baik untuk mengembalikan dirinya sendiri setelah kehilangan jaringan hati yang bermakna akibat hepatektomi parsial atau jejas hati akut selama keadaan tersebut tidak menjadi semakin parah oleh adanya infeksi virus atau peradangan. Hepatektomi parsial yang mengambil 70% bagian hati menyebabkan lobulus yang tersisa membesar dan mengembalikan dirinya ke ukuran sebelumnya. Selama regenerasi, hepatosit diperkirakan mengalami replikasi sebanyak satu atau dua kali dan setelah mencapai ukuran dan volume hati sebelumya, hepatosit kembali kepada keadaan semulanya (Guyton dan Hall, 2007).

  2. Kerusakan Hati Hati memiliki kemampuan regenerasi yang baik untuk memperbaiki dirinya pada keadaan hepatektomi parsial yang mengambil 70% bagian hati

  (Guyton dan Hall, 2007). Resiko klinis yang paling parah dari penyakit hati disebabkan oleh kegagalan hati yang dapat terjadi secara tiba-tiba dan menjadi kerusakan hati yang paling besar (Kumar, Contran, Ramzi, Robbins, dan Stanley, 1992).

  Kerusakan sel hati dapat dibagi dalam dua jenis yaitu kerusakan hati akut dan kronik (Zimmerman, 1999).

  a.

  Kerusakan hati akut Kerusakan hati akut umumnya disebabkan karena adanya sel nekrosis massif akut yang dapat disebabkan karena infeksi viral, obat- obatan atau senyawa kimia yang merusak hati. Kerusakan yang terjadi pada kasus nekrosis hati ditandai dengan adanya penyakit kuning, hipoglikemia, gangguan elektrolit dan asam-basa, enselophati hati, sindrom hepatorenal, dan kenaikan serum enzim (ALT, AST, LDH) (Chandrasoma and Taylor, 1995).

  b.

  Kerusakan hati kronik Kerusakan sel hati kronik dapat merupakan manifestasi dari nekrosis, fibrosis dan regenerasi nodular. Efek yang terjadi pada kerusakan sel hati kronik dapat berupa penurunan sintesis albumin yang menimbulkan rendahnya tingkat serum albumin, edema dan efusi, penurunan tingkat protrombin dan faktor VII, IX, dan X yang dihasilkan saat terjadi luka, hipertensi portal, peradangan hati, sindrom hepatorenal dan perubahan sistem endokrin yang disebabkan oleh gangguan metabolisme beberapa hormon dan fetor hepatikum (Chandrasoma and Taylor, 1995).

  Senyawa toksik menyebabkan berbagai jenis efek toksik pada sel hati. Jenis kerusakan yang dapat ditimbulkan antara lain : a.

  Perlemakan Hati (Steatosis) Diagnosis steatosis menjadi positif apabila terjadi kelebihan lipid sebanyak 5 – 10% pada hati (Reddy and Rao, 2006). Masuknya senyawa toksik ke dalam tubuh dalam jumlah yang cukup akan menimbulkan terbentuknya lipid yang terakumulasi dalam hepatosit. Peningkatan jumlah senyawa toksik yang terpapar ke dalam tubuh akan meningkatkan lipid yang terakumulasi sehingga menciptakan gelembung-gelembung besar dan meluas hingga ke tepi hati (Kumar, Abbas, Fausto dan Mitchell, 2007).

  Pada steatosis terjadi akumulasi lipid yang abnormal terutama dalam bentuk trigliserida pada hepatosit yang merupakan akibat berlebihnya suplai asam lemak dari jaringan adiposa. Pada keadaan ini terjadi gangguan pelepasan trigliserida dari hati ke plasma. Gangguan ini dapat disebabkan karena beberapa hal yaitu adanya gangguan pada sintesis protein atau pada konjugasi trigliserida dan lipoprotein, gangguan pada transfer VLDL melalui membran sel, penurunan sintesis fosfolipid, gangguan β-oksidasi lipid di mitokondria, dan energi yang tidak memadai (Hodgson, 2010).

  b.

  Nekrosis Nekrosis hati adalah keadaan terjadinya kematian pada hepatosit dan umumnya merupakan kerusakan akut. Kematian sel hati terjadi bersama dengan pecahnya membran plasma. Nekrosis hati merupakan suatu manifestasi toksik yang berbahaya tetapi tidak selalu kritis karena hati memiliki kapasitas cadangan yang baik (Lu, 1995).

  Nekrosis hati dapat ditandai dengan adanya pembengkakan sel, kebocoran dan hancurnya inti serta masuknya sel – sel radang.

  Komponen zat toksis mempengaruhi lokasi terjadinya nekrosis dan dapat menyebar pada area lain pada hati (Treinen dan Moslen, 2001). Pada nekrosis, enzim terlarut keluar dari sel hepatosit yang rusak dan masuk ke aliran darah (Greim and Snyder, 2008). c.

  Kolestasis Kolestasis terjadi akibat berkurangnya aktivitas sekresi empedu pada membran kanalikulus (Lu,1995). Kolestasis menimbulkan sindroma klinik ikterus seperti gatal, peningkatan transaminase, peningkatan fosfatase alkali (Price dan Wilson, 2005). Banyak jenis bahan kimia termasuk logam, hormon dan obat-obatan menyebabkan keloestasis (Gregus dan Klaaseen, 2001).

  d.

  Sirosis Sirosis ditandai oleh adanya septa kolagen yang tersebar di sebagian besar hati. Sirosis hati berasal dari nekrosis sel tunggal karena kurangnya mekanisme perbaikan dari sel hati yang menyebabkan aktivitas fibroblastik dan pembentukan jaringan parut fibrotik (Lu, 1995).

  Jaringan parut fibrotik membagi massa hati yang masih baik menjadi nodul–nodul dengan hepatosit yang masih beregenerasi. Fibrosis dapat berkembang menjadi sirosis yang bersifat irreversible dan biasanya merupakan hasil paparan berulang zat kimia beracun seperti alkohol (Gregus dan Klaaseen, 2001)

C. Hepatotoksin

  Obat dan senyawa yang dapat menimbulkan kerusakan hati diklasifikasikan dalam dua tipe, yaitu : a.

  Hepatotoksin teramalkan (tipe A) Pada tipe ini, obat atau senyawa dalam jumlah yang cukup dapat menimbulkan efek toksik pada sebagian besar orang yang menelan obat atau senyawa tersebut. Hepatotoksin teramalkan bergantung pada dosis pemberian. Contoh dari hepatotoksin ini adalah parasetamol dan karbon tetraklorida (Forrest, 2006).

  Proses terjadinya toksisitas dikenal sebagai toksisitas-intrinsik, dan aksinya dapat terjadi secara langsung atau tidak langsung. Secara langsung, obat induk atau bentuk metabolitnya langsung berikatan dengan komponen membran sel dan merusak sel hati beserta seluruh organelnya, seperti ditunjukkan oleh karbon tetraklorida dan parasetamol. Secara tidak langsung, obat induk atau bentuk metabolitnya dapat menimbulkan luka hepatik dengan cara mengganggu jalur metabolik- khas atau mengganggu jalur ekskresi hepatik (Donatus,1992).

  b.

  Hepatotoksin tak teramalkan (tipe B) Pada tipe ini, obat atau senyawa tidak bersifat toksik pada hati tetapi pemberiannya pada beberapa orang tertentu dapat menimbulkan efek toksik karenanya hepatotoksin ini tidak bergantung pada dosis pemberian. Frekuensi kejadian hanya 1 : 1000 orang. Contoh dari hepatotoksin ini adalah isoniazid dan halotan (Forrest, 2006).

D. Karbon tetraklorida

  Gambar 3. Struktur kimia karbon tetraklorida (U.S. Environmental Protection Agency, 2007).

  Karbon tetraklorida (CCl ) (Gambar 3) merupakan senyawa kimia yang

  4

  dapat menimbulkan perlemakan dan nekrosis pada hati. Pemejanan senyawa ini secara jangka panjang dapat mengakibatkan terjadinya sirosis dan tumor hati juga kerusakan ginjal (Timbrell, 2008). Karbon tetraklorida merupakan hidrokarbon alifatik terhalogenasi dimana sifatnya sangat toksik karena dapat membentuk radikal bebas yang bereaksi dengan banyak asam lemak tak jenuh (Mutschler, 1999).

  Karbon tetraklorida sering digunakan sebagai cairan pembersih, dan bahan yang digunakan untuk pemadam kebakaran (Department of Health and

  

Human Services, 2005). Karbon tetraklorida merupakan cairan bening yang

  sangat mudah menguap dan tidak mudah terbakar. Karbon tetraklorida merupakan senyawa kimia yang dapat menyebabkan karsinogen dan dibuktikan melalui penelitian terhadap hewan uji (Departement of Health and Human Services, 2011). Kerusakan hati pada tikus yang disebabkan oleh karbon tetraklorida pertama kali dipublikasikan pada tahun 1936 (Deshwal et al, 2011) dan secara luas telah banyak digunakan pada berbagai penelitian (Handa and Sharma, 1990).

  Absorpsi karbon tetraklorida dapat terjadi melalui saluran pernapasan, saluran pencernaan dan kulit (Thieness dan Halley, 1972). Efek toksik karbon tetraklorida dapat merusak sistem saraf pusat, hati, ginjal hingga menyebabkan koma dan kematian (Departement of Health and Human Services, 2005).

  

Gambar 4. Mekanisme biotransformasi dan oksidasi karbon tetraklorida

(U.S Environmental Protection Agency, 2010) Senyawa radikal ini juga mengakibatkan kerusakan pada organela tubuh dan akan menyebabkan nekrosis (Zimmerman, 1978). Skema biotransformasi terjadinya reaksi reduksi dehalogenasi dan reaksi oksidasi dari karbon tetraklorida diperlihatkan pada gambar 4.

  Karbon tetraklorida dimetabolisme di dalam tubuh terutama oleh hati. Karbon tetraklorida juga dimetabolisme di organ lainnya dalam tubuh seperti ginjal, paru-paru dan jaringan lainnya yang memiliki sitokrom P-450. Reaksi awal dikatalisasis oleh sitokrom P-450 bergantung nicotinamide adenine

  

dinucleotide phosphate (NADPH) yang dapat diinduksi oleh fenobarbital atau

etanol (Deshwal, et al, 2011).

  • 3

  Radikal triklorometil ( CCl ) bergantung pada ketersediaan oksigen dan

  induksi beberapa jalur alternatif pada kondisi anaerobik atau aerobik. Dalam kondisi anaerobik, radikal triklorometil dapat terdimerisasi membentuk heksakloroetan. Penambahan proton dan elektron pada radikal dapat membentuk kloroform (CHCl

  3 ) Radikal triklorometan secara lebih jauh dapat mengalami

  reduksi dehalogenasi yang dikatalisis oleh sitokrom P-450 membentuk diklorokarben (CCl

  2 ) yang dapat berikatan secara ireversibel pada komponen

  jaringan atau bereaksi dengan air membentuk formyl chloride (HCOCl) yang didekomposisikan menjadi karbon monoksida. Radikal triklorometil dapat berikatan secara langsung pada mikrosomal lipid dan protein (U.S Environmental ).

  Protection Agency, 2010

  Dalam keadaan aerob, radikal triklorometil dapat ditangkap oleh oksigen dan membentuk radikal triklorometil peroksi yang dapat berikatan pada jaringan protein dan didekomposisikan membentuk phosgene (COCl ) dan bentuk

  2

  elektrofilik klorin. Radikal triklorometil peroksi adalah pencetus utama peroksidasi lipid yang terjadi pada pemejanan karbon tetraklorida. Phosgene juga dapat berkonjugasi untuk mereduksi glutation membentuk diglutathionyl

  

dithiocarbonate atau dengan sistein membentuk oxothiazolidine carboxylic acid

, 2010).

  ( U.S Environmental Protection Agency

  Karbon tetraklorida mampu menyebabkan perlemakan hati dan juga nekrosis sentrilobular. Lipid tersimpan di dalam hati dalam bentuk trigliserida dan dapat terjadi akumulasi jika terjadi ketidakseimbangan di dalam pemasokan, sintesis dan sekresi (Reed, 2001). Penghambatan sintesis protein, gangguan metabolisme fosfolipid atau oksidasi asam lemak di dalam mitokondria mampu menyebabkan steatosis. Karbon tetraklorida menyebabkan steatosis dengan menghambat sintesis protein dan sekresi trigliserida keluar dari hati (Timbrell, 2008).

  Mekanisme steatosis diduga terjadi karena adanya pembentukan radikal triklorometil yang menyebabkan terjadinya peroksidasi lemak dimana radikal bebas yang terbentuk berikatan kovalen dengan organela sel kemudian merusak retikulum endoplasma halus yang merupakan tempat aktivitasnya (Timbrell, 2008). Peroksidasi lipid merupakan penyebab utama yang dimulai dengan oksidasi asam lemak tak jenuh yang menghasilkan berbagai macam produk aldehid seperti malondialdehyde (MDA) dan 4-hydroxynoneal (HNE) yang bersifat toksik terhadap sel dan dapat menuju jaringan tubuh lainnya (Romero et

  

al., 1998). Beberapa efek dari peroksidasi lipid antara lain terpengaruhinya integritas struktur lipid pada membran yang menyebabkan kerusakan beberapa struktur, kerusakan membran lisosom hingga pecah dan hilangnya isi organela (Timbrell, 2008).

  Steatosis dan nekrosis hati yang disebabkan oleh karbon tetraklorida dapat terjadi secara bersamaan. Karbon tetraklorida secara langsung dapat merusak membran plasma yang menyebabkan hilangnya enzim-enzim

  • intraseluler, elektrolit, dan juga masuknya ion-ion dari luar seperti ion Ca yang menyebabkan nekrosis. Bersamaan dengan ini terbentuklah metabolit aktif karbon tetraklorida yaitu radikal triklorometil yang terjadi di retikulum endoplasma sehingga dapat mengganggu transport lipoprotein dan mengakibatkan steatosis. Akumulasi radikal triklorometil dan pembentukan radikal bebas yang baru dapat merusak plasma, mitokondria dan juga lisosom yang kemudian menyebabkan nekrosis (Zimmerman, 1978).
  • E.

       Metanol Gambar 5. Struktrur kimia metanol (National Center of Biotechnology Information, 2013).

      Metanol (metil alkohol) (Gambar 5) memiliki struktur molekul CH 3 OH. satu atom karbon. Metanol berupa cairan, tidak berwarna dan memiliki bau khas alkohol (United States Departmen of Energy, 2013). Metanol memiliki nilai polaritas sebesar 5,1 dan termasuk senyawa yang bersifat polar (Byers, 2003). Dalam penyarian, pelarut ini diduga mampu melarutkan hampir semua kompoenen baik polar, semi polar maupun non polar, karenanya metanol banyak digunakan sebagai larutan penyari yang digunakan pada saat maserasi (Al- Ash’ary, Supriyanti, Zackiyah, 2010).

      Efek metanol pada kesehatan manusia dan lingkungan bergantung pada banyaknya metanol yang terpejankan. Manusia dapat mengalami kematian saat terpejan metanol dalam jumlah besar. Dalam jumlah kecil metanol tidak menimbulkan kematian tetapi dapat berefek pada sistem saraf manusia (U.S

      Environmental Protection Agency, 1994).

    F. Metode Ekstraksi

      Ekstrak adalah sediaan kering, kental atau cair yang dibuat dengan penyari simplisia menurut cara yang cocok, di luar pengaruh cahaya matahari langsung (Badan Pengawas Obat dan Makanan, 2010). Ekstrak diperoleh dengan mengekstraksi zat aktif dari simplisia nabati atau hewani dengan menggunakan pelarut yang sesuai, kemudian semua atau hampir semua pelarut diuapkan dan massa atau serbuk yang tersisa diperlakukan sedemikian rupa hingga memenuhi baku yang telah ditetapkan (Departemen Kesehatan RI, 1995).

      Maserasi merupakan cara penyarian sederhana yang dilakukan dengan cara merendam serbuk simplisia dalam cairan penyari. Cairan penyari akan menembus dinding dan masuk ke dalam rongga sel yang mengandung zat aktif. Zat aktif akan larut dan karena adanya perbedaan konsentrasi antara larutan zat aktif di dalam dan di luar sel, maka larutan yang terpekat didesak keluar. Peristiwa tersebut terjadi secara berulang sehingga terjadi keseimbangan konsentrasi antara larutan di luar dan di dalam sel (Departemen Kesehatan RI, 1986).

    G. Alanin Aminotransferase dan Aspartate Transaminase

      Alanin aminotransferase (ALT) dan aspartat transaminase (AST) merupakan serum yang sering digunakan untuk melihat kerusakan sel hati.

      Peningkatan aktivitas ALT serum secara signifikan mendahului terjadinya kenaikan jumlah bilirubin total dan alkaline phosphatase (ALP) (DiPiro, 2008).

      Saat terjadi nekrosis pada hepatosit, kebocoran pada membran plasma dapat dideteksi dengan menganalisis plasma serum untuk melihat enzim sitosol diantaranya alanine aminotransferase dan aspartate transaminase (Hodgson, 2010).

      Alanin aminotransferase (ALT) merupakan enzim yang membantu dalam

      proses metabolisme protein. Pada keadaan hati yang rusak, jumlah enzim ALT mengalami peningkatan di hati dan kemudian akan terlepas ke aliran darah.

      

    Aspartate transaminase (AST) merupakan enzim yang berperan dalam proses

      metabolisme asam amino alanin. AST merupakan enzim mitokondria dan banyak ditemukan pada hati, otot rangka dan ginjal. ALT merupakan enzim sitosolik yang lebih spesifik untuk hati dibandingkan enzim AST. Peningkatan jumlah kedua enzim pada darah dapat mengindikasikan terjadinya kerusakan pada hati atau bahkan nekrosis (Paliwal, Gurjar dan Sharma, 2009).

    H. Landasan Teori

      Hati merupakan organ yang berperan penting dalam proses metabolisme tubuh. Kerusakan hati dapat timbul karena darah yang dialirkan menuju hati sering bersifat toksik (Wibowo dan Paryana, 2009). Hati memiliki fungsi cadangan yang besar, sehingga kegagalan fungsi hati terjadi saat terdapat penyakit hati yang menyerang hingga 80% organ (Chandrasoma and Taylor, 1995). Alanin

      

    aminotransferase (ALT) dan aspartat transaminase (AST) merupakan enzim yang

      sering digunakan untuk melihat kerusakan sel hati (DiPiro, 2008). ALT merupakan enzim yang berperan dalam proses metabolisme protein sedangkan AST berperan dalam proses metabolisme asam amino alanin . Peningkatan jumlah kedua enzim pada darah dapat mengindikasikan terjadinya kerusakan pada hati atau bahkan nekrosis (Paliwal et al., 2009).

      Karbon tetraklorida (CCl ) merupakan senyawa kimia yang dapat

      4

      menimbulkan perlemakan dan nekrosis pada hati (Hodgson, 2010). Lipid tersimpan di dalam hati dalam bentuk trigliserida dan dapat terjadi akumulasi jika terjadi ketidakseimbangan di dalam pemasokan, sintesis dan sekresi (Reed, 2001). Penghambatan sintesis protein, gangguan metabolisme fosfolipid atau oksidasi asam lemak di dalam mitokondria mampu menyebabkan steatosis. Karbon tetraklorida menyebabkan steatosis dengan menghambat sintesis protein dan sekresi trigliserida keluar dari hati (Timbrell, 2008).

      Persea americana Mill. memiliki khasiat sebagai antioksidan yang

      diperoleh dari kandungan fenolnya. Menurut Williams (cit.,Bashandy dan AlWasel, 2011), antioksidan banyak didistribusikan dalam buah-buahan dan bermanfaat dalam memberikan proteksi tubuh terhadap hepatotoksisitas. Yuko dan Jun (2003) melaporkan bahwa aktivitas antioksidan yang potensial ditemukan pada ekstrak metanol biji P.americana.

    I. Hipotesis

      Ekstrak metanol-air biji P.americana dalam penggunaan jangka pendek dapat memberikan efek hepatoprotektif pada tikus jantan galur Wistar terinduksi karbon tetraklorida.

    BAB III METODE PENELITIAN A. Jenis dan Rancangan Penelitian Penelitian mengenai efek hepatoprotektif pemberian jangka pendek ekstrak

      metanol-air biji Persea americana Mil. terhadap tikus jantan galur Wistar merupakan penelitian eksperimental murni dengan memberikan perlakuan terhadap sejumlah variabel penelitian. Rancangan penelitian ini termasuk rancangan acak lengkap pola searah.

    B. Variabel Penelitian dan Definisi Operasional

      Variabel – variabel yang digunakan pada penelitian ini adalah : 1. Variabel Utama a.

      Variabel bebas Variasi waktu pemberian ekstrak metanol-air biji P.americana dengan dosis 350 mg/kgBB pada tikus jantan galur Wistar yang terinduksi karbon tetraklorida yaitu pada jam ke 1,4 dan 6 sebelum penginduksian hepatotoksin karbon tetraklorida.

      b.

      Variabel tergantung Nilai aktivitas ALT dan AST serum tikus jantan galur Wistar yang terinduksi karbon tetraklorida setelah pemberian jangka pendek ekstrak metanol-air biji P.americana. Nilai aktivitas ALT dan AST dinyatakan dalam satuan U/L.

      2. Variabel Pengacau a.

      Variabel pengacau terkendali Kondisi hewan uji yaitu tikus jantan galur Wistar, berat badan 150

    • – 200 gram dan berumur 2 – 3 bulan, frekuensi waktu pemberian ekstrak metanol-air biji P.americana (selama 1, 4, dan 6 jam) dan cara pemberian ekstrak yaitu secara peroral serta bahan biji P.americana diperoleh dari Sumatera Barat pada bulan Januari 2013.

      b.

      Variabel pengacau tak terkendali Kondisi patologis hewan uji.

      3. Definisi Operasional a.

      Ekstrak metanol-air P.americana Ekstrak metanol-air biji P.americana adalah ekstrak kental yang diperoleh dengan mengekstraksi serbuk kering biji P.americana seberat 10,0 g yang dilarutkan dalam 100 ml pelarut metanol 70% secara maserasi selama 120 jam dengan sesekali diaduk, kemudian diremaserasi selama 48 jam lalu disaring dengan kertas saring, dievaporasi dan diuapkan dalam oven selama 24 jam pada suhu 50˚C, hingga peroleh ekstrak kental.

      b.

      Efek hepatoprotektif Efek hepatoprotektif adalah kemampuan ekstrak metanol-air biji

      P.americana pada dosis 350 mg/kgBB melindungi hati dari hepatotoksin karbon tetraklorida. c.

      Variasi waktu Yang dimaksud variasi waktu pemberian adalah pemberian ekstrak metanol-air biji P.americana pada hewan uji secara berturut-turut dengan selang waktu 1,4 dan 6jam sebelum penginduksian hepatotoksin karbon tetraklorida.

    C. Subjek dan Bahan Penelitian 1.

      Subjek penelitian Subjek uji yang digunakan dalam penelitian ini adalah tikus jantan galur Wistar dengan berat badan 150 – 250 gram dan berumur 2 – 3 bulan yang diperoleh dari Laboratorium Hayati Imono Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta.

      2. Bahan utama Bahan uji yang digunakan adalah biji P.americana yang diperoleh dari Padang, Sumatera Barat pada bulan Januari 2013.

      3. Bahan Kimia a.

      Senyawa hepatotoksin yang digunakan adalah karbon tetraklorida E.

      Merck®, Darmstadt, Germany yang diperoleh dari Laboratorium Kimia Analisis Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta. Konsentrasi karbon tetraklorida yang digunakan adalah 50% dengan dosis 2ml/kg BB.

      b.

      Pelarut senyawa hepatotoksin yang digunakan adalah olive oil (Bertolli®). c.

      Kontrol negatif yang digunakan adalah olive oil (Bertolli®) d.

      Bahan pengektrak serbuk biji alpukat yaitu metanol teknis (PT.

      Brataco) dengan konsentrasi 99% yang diencerkan hingga konsentrasi 70% menggunakan pengencer aquadest.

      e.

      Bahan pelarut aquadest diperoleh dari Laboratorium Farmakologi Toksikologi Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma.

      f.

      Natrium-Carboxymethyl Cellulosa (CMC-Na) sebagai pelarut ekstrak kental dari biji P.americana berupa serbuk, berwarna putih yang diperoleh dari Laboratorium Biofarmasetika Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta.

      g.

      Blanko pengukuran aktivitas ALT dan AST serum yang digunakan adalah aqua bidestilata yang diperoleh dari Laboratorium Kimia Analisis dan Instrumental Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma.

      h.

      Reagen DyaSyss untuk mengukur aktivitas serum ALT dan AST berupa reagen SGPT dan SGOT i.

      Serum ALT Reagen serum yang digunakan adalah reagen serum ALT DyaSyss.

      Komposisi dan konsentrasi dari reagen serum ALT adalah sebagai berikut: R1: TRIS pH 7,15 140 mmol/L

      L-Alanine 700 mmol/L LDH (lactatedehydrogenase) 2300 U/L R2: 2-Oxoglutarate 85 mmol/L NADH 1 mmol/L

      Pyridoxal-5-phosphate

      FS: Good’s buffer pH 9,6 100 mmol/L

      Pyridoxal-5-phosphate 13 mmol/L j.

      Serum AST Reagen serum yang digunakan adalah reagen serum AST DyaSyss.

      Komposisi dan konsentrasi dari reagen serum AST adalah sebagai berikut: R1: TRIS pH 7,65 110 mmol/L

      L-Aspartate 320 mmol/L MDH(malatedehydrogenase) 800 U/L LDH(lactatedehydrogenase) 1200 U/L

      R2: 2-Oxoglutarate 65 mmol/L NADH 1mmol/L

      Pyridoxal-5-phosphate

      FS: Good’s buffer pH 9,6 100 mmol/L

      Pyridoxal-5-phosphate 13mmol/L

    D. Alat Penelitian a.

      Alat pembuatan serbuk kering P.americana Alat – alat yang digunakan antara lain oven (Memmert), mesin penyerbuk (Retsch) , timbangan elektrik dan ayakan nomor 40.

      b.

      Alat pembuatan ekstrak metanol biji P.americana Seperangkat alat gelas berupa Bekker glass, erlenmeyer, gelas ukur, labu ukur, cawan porselen, corong Buchner, pipet tetes, batang pengaduk (Pyrex Iwaki Glass®). Mesin penyerbuk Retsch®, ayakan nomor 40, Electric Sieve Shaker Indotest Multi Lab®, timbangan analitik Mettler Toledo®, moisture balance, orbital shaker Optima®, rotary vacuum evaporator IKAVAC®, oven Memmert®.

      c.

      Alat uji hepatoprotektif Seperangkat alat gelas berupa Bekker glass, gelas ukur, tabung reaksi, labu ukur, pipet tetes, batang pengaduk (Pyrex Iwaki Glass®), timbangan analitik Mettler Toledo®, sentrifuge Centurion Scientific®, vortex Genie Wilten®, spuit injeksi per oral dan syringe 3 cc Terumo®, spuit ip. dan syringe 1 cc Terumo®, pipa kapiler, tabung Eppendorf, Microlab 200 Merck®, stopwatch.

    E. Tata Cara Penelitian 1.

      Determinasi serbuk biji P. americana Determinasi dilakukan dengan mencocokkan serbuk biji P. americana yang dilakukan secara makroskopis dan mikroskopis. Determinasi dilakukan oleh Yohanes Dwiatamaka, M.Si yang merupakan dosen Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta.

      2. Pengumpulan bahan uji Bahan uji yang digunakan adalah biji P. americana Mill. yang masih segar dan tidak busuk, diperoleh dari Sumatera Barat pada bulan Januari

      2013.

      3. Pembuatan serbuk biji P. americana Biji P. americana dicuci bersih dan dipisahkan dari kulitnya. Setelah itu biji dirajang tipis lalu diangin-anginkan kemudian dikeringkan dalam oven pada suhu 50ºC selama 24 jam untuk mengoptimalkan proses pengeringan.

      Setelah biji benar-benar kering, biji dihaluskan dan diayak dengan ayakan nomor 40. Pengayakan dilakukan agar kandungan fitokimia yang terkandung dalam biji Persea americana Mill. lebih mudah tersekstrak karena luas permukaan spesifik yang kontak dengan pelarut semakin besar.

      4. Penetapan kadar air pada serbuk kering biji P. americana Serbuk kering biji P. americana yang sudah diayak, dimasukkan sebanyak ± 5 gram ke dalam alat moisture balance kemudian diratakan.

      Bobot serbuk kering biji tersebut ditetapkan sebagai bobot sebelum pemanasan (bobot A), setelah itu dipanaskan pada suhu 110 C. Serbuk kering biji P.americana yang sudah dipanaskan ditimbang kembali dan dihitung sebagai bobot setelah pemanasan (bobot B). Kemudian dilakukan perhitungan terhadap selisih bobot A terhadap bobot B yang merupakan kadar air serbuk biji P. americana.

      5. Pembuatan ekstrak metanol-air biji P.americana Ekstrak metanol-air biji P.americana adalah ekstrak kental yang diperoleh dengan mengekstraksi serbuk kering biji P.americana seberat 10,0 g yang dilarutkan dalam 100 ml pelarut metanol 70% secara maserasi selama 120 jam (5 hari) dengan sesekali diaduk, kemudian diremaserasi selama 48 jam (2 hari). Maserasi dilakukan dalam erlenmeyer bersumbar kaca dan dilakukan pada suhu kamar. Perbandingan jumlah serbuk dan pelarut adalah 1 : 10. Selama proses maserasi, campuran serbuk dan pelarut digojog selama 1 menit setiap harinya dan didiamkan dalam ruangan gelap dan ditutup. Setelah dilakukan perendaman, hasil maserasi kemudian disaring menggunakan corong Buchner yang dilapisi kertas saring sehingga diperoleh filtrat dengan bantuan pompa vakum. Filtrat hasil saringan dipindahkan dalam labu alas bulat untuk dievaporasi dengan mengunakan vacuum rotary evaporator pada suhu 70 – 90 C untuk menguapkan cairan penyari pada proses maserasi. Hasil evaporasi dituangkan dalam cawan porselen yang telah ditimbang sebelumnya agar mempermudah perhitungan rendemen ekstrak yang akan diperoleh kemudian dipekatkan dengan menggunakan penangas air pada suhu 70 – 80

      C. Penimbangan terhadap ekstrak dilakukan setiap harinya hingga diperoleh bobot ekstrak tetap. Ekstrak kental disimpan di dalam desikator hingga saat akan digunakan. Rendemen ekstrak = berat cawan ekstrak kental

    • – berat cawan kosong Rata-rata rendemen = Konsentrasi ekstrak didapat dari hasil rata-rata bobot ekstrak.

      Konsentrasi yang digunakan adalah konsentrasi pekat yang dapat dibuat. Pada konsentrasi yang digunakan tersebut ekstrak dapat dimasukkan dan dikeluarkan dari spuit oral. Cara pembuatannya adalah dengan melarutkan ekstrak setiap cawan dalam labu ukur 5 ml dengan pelarut yang sesuai (CMC Na 1%). Sehingga konsentrasi ekstrak dapat ditetapkan 6. Pembuatan larutan Natrium-Carboxy Methyl Cellulosa (CMC-Na) 1%

      Larutan CMC-Na 1% dibuat dengan cara menimbang 5 gram CMC-Na serbuk yang telah digerus dalam mortar dan stamper terlebih dahulu. Serbuk kemudian ditaburkan secara merata di permukaan 200 mL aquadest di dalam gelas kimia dan ditunggu hingga semua serbuk terbasahi, tanpa pengadukan.

      Setelah semua serbuk CMC-Na terbasahi maka dilakukan pengadukan hingga seluruh CMC-Na larut. Larutan CMC-Na kemudian dimasukkan ke dalam labu takar 500 ml dan ditambahkan aquadest hingga batas tanda.

      7. Pembuatan suspensi ekstrak metanol-air biji P.americana dalam CMC-Na 1%

      Suspensi ekstrak metanol-air biji P. americana dibuat dengan konsentrasi 7%. Sebanyak 3,5 g ekstrak metanol-air biji P. americana ditimbang secara seksama. Kemudian dilarutkan dengan menggunakan larutan CMC-Na 1% hingga terlarut keseluruhan dan dimasukkan ke dalam labu takar 50 mL dan ditambah dengan larutan CMC-Na 1% hingga batas tanda, selanjutnya digojog hingga homogen.

      8.

      ) konsentrasi 50% Pembuatan larutan karbon tetraklorida (CCl

      4 Larutan CCl 4 dalam olive oil dibuat dengan cara melarutkan 25 ml CCl

      4

      dalam labu takar 50 ml kemudian ditambahkan dengan olive oil hingga tanda, lalu digojog hingga homogen. Pengambilan CCl dilakukan dengan

      4 menggunakan pipet gondok 25 ml.

      9. Uji pendahuluan a.

      Penetapan dosis hepatotoksin karbon tetraklorida Pemilihan dosis CCl

      4 dilakukan untuk mengetahui dosis CCl

      4

      yang mampu menyebabkan kerusakan pada hati tikus yang ditandai dengan peningkatan aktivitas ALT dan AST serum. Dosis hepatotoksin yang digunakan dalam penelitian ini didasarkan pada hasil orientasi yang telah dilakukan. Dosis hepatotoksin yang digunakan memberikan peningkatan aktivitas ALT dan AST serum paling tinggi pada hasil orientasi.

      Menurut Janakat dan Al-Merie (2002) dosis karbon tetraklorida sebesar 2 ml/kg BB menginduksi kerusakan hati pada tikus jantan galur Wistar. Dosis tersebut mampu merusak sel-sel hati pada tikus jantan yang ditunjukkan melalui peningkatan aktivitas ALT dan AST tetapi tidak menimbulkan kematian pada hewan uji. b.

      Penetapan waktu pencuplikan darah Penetapan waktu pencuplikan darah ditentukan melalui orientasi pada tiga kelompok perlakuan waktu, yaitu pada jam ke-0 sebelum pemejanan karbon tetraklorida, jam ke-24 dan 48 setelah pemejanan karbon tetraklorida. Setiap kelompok perlakuan terdiri dari 5 hewan uji yang pengambilan darahnya dilakukan melalui pembuluh sinus orbitalis mata.

      Pada tikus yang terinduksi karbon tetraklorida yang dilarutkan dalam olive oil dengan perbandingan 1 : 1 pada dosis 2 ml/kgBB mencapai aktivitas ALT serum maksimal pada jam ke-24 setelah pemberian dan mulai menurun pada jam ke-48 (Janakat dan Al-Merie, 2002).

      10. Pengelompokkan dan perlakuan hewan uji Hewan uji tikus jantan galur Wistar sejumlah 30 ekor dibagi secara acak dalam 6 kelompok sama banyak. Kelompok I (kelompok kontrol negatif) diberi olive oil dosis 2ml/kgBB secara intraperitoneal, Kelompok II (kontrol perlakuan) diberikan ekstrak metanol-air biji P.americana dosis 350 mg/kgBB secara peroral kemudian diambil darahnya pada jam ke-6 setelah pemberian ekstrak. Kelompok III (kontrol hepatotosin) diberi karbon tertraklorida yang dilarutkan dalam olive oil (1:1) dengan dosis 2 ml/kgBB secara intraperitoneal. Kelompok IV, V dan VI (kelompok perlakuan) diberi ekstrak metanol-air biji P. americana dosis 350 mg/kgBB, kemudian secara berturut-turut pada jam ke-1, 4 dan 6 setelah pemberian ekstrak metanol-air dilakukan pemberian hepatotoksin karbon tetraklorida dosis 2 ml/kgBB. Pada jam ke-24 setelah pemberian karbon tetraklorida, semua kelompok diambil darahnya pada daerah sinus orbitalis mata untuk penetapan aktivitas ALT dan AST serum.

      11. Pembuatan serum Darah diambil melalui sinus orbitalis mata hewan uji dan ditampung dalam tabung eppendrof dan didiamkan selama 15 menit, lalu disentrifugasi dengan kecepatan 10.000 rpm selama 15 menit, lalu dipisahkan dari bagian supernatannya.

      12. Pengukuran aktivitas ALT dan AST serum Micro vitalab 200 adalah alat yang digunakan untuk mengukur aktivitas

      ALT dan AST serum pada serum hewan uji. Sebelum melakukan pengukuran sampel, alat divalidasi dengan menggunakan serum kontrol kontrol Roche/Hitachi Cobas C series. Kisaran nilai ALT serum kontrol Roche/Hitachi Cobas C series adalah 26,2-41,8 U/L dan AST 35,4-56,6 U/L.

      Aktivitas enzim diukur pada panjang gelombang 340 nm, suhu 37 C. Aktivitas serum ALT dinyatakan dalam U/L. Pengukuran aktivitas serum ALT dilakukan di laboratorium Biokimia , Universitas Sanata Dharma Yogyakarta.

      Pengukuran aktivitas ALT dan AST serum dilakukan dengan mencampur 100 μl serum dengan 1000 μl reagen I, kemudian divortex selama 5 detik, didiamkan selama 2 menit, setelah itu dicampur dengan 250 μl reagen II, kemudian divortex selama 5 detik dan dibaca serapan setelah 1 menit.

    F. Tata Cara Analisis Hasil

      Data aktivitas ALT dan AST serum diuji dengan Kolmogorov-Smirnov untuk mengetahui distribusi data tiap kelompok hewan uji. Apabila didapat distribusi data yang normal maka analisis dilanjutkan dengan analisis pola searah (One Way ANOVA) dengan taraf kepercayaan 95% untuk mengetahui perbedaan masing-masing kelompok. Sebelum dilakukan uji one way ANOVA data diuji homogenitasnya dengan Levene Test. Apabila memenuhi syarat maka uji hipotesis

      

    one way ANOVA dapat dilakukan, sedangkan apabila tidak memenuhi syarat,

      hipotesis diuji dengan menggunakan Kruskall Wallis. Uji hipotesis one way

      

    ANOVA yang telah dilakukan kemudian dilanjutkan dengan uji Scheffe untuk

      melihat perbedaan masing-masing antar kelompok bermakna (signifikan) (p<0,05) atau tidak bermakna (tidak signifikan) (p>0,05).Bila didapatkan distribusi tidak normal, maka dilakukan analisis dengan uji Kruskal Wallis untuk mengetahui perbedaan aktivitas ALT dan AST antar kelompok. Setelah itu dilanjutkkan dengan uji Mann Whitney untuk mengetahui perbedaan tiap kelompok.

      Perhitungan persen efek hepatoprotektif terhadap hepatotoksin karbon tetraklorida diperoleh dengan rumus:

      (purata ALT − purata ALT ) − (purata ALT perlakuan − purata ALT ) × 100% (purata ALT − purata ALT )

    BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui dan membuktikan

      khasiat ekstrak metanol-air biji Persea americana Mill. sebagai hepatoprotektor tikus yang terinduksi hepatotoksin karbon tetrakloridan (CCl

      4 ) dengan pemberian

      jangka pendek. Agar tujuan tersebut dapat tercapai, maka dilakukan serangkaian pengujian. Aktivitas alamin aminotransferase (ALT) dan aspartate transaminase (AST) serum tikus yang diteliti dijadikan tolak ukur kuantitatif pengujian tersebut. A. 1. Penyiapan Bahan Hasil determinasi tanaman

      Determinasi tanaman ini dilakukan untuk membuktikan kebenarannya bahwa tanaman yang digunakan sebagai hepatoprotektor dalam penelitian ini adalah benar biji P.americana Mill. sehingga tidak terjadi kesalahan dalam penyiapan bahan. Determinasi dilakukan pada serbuk biji buah P. americana yang diperoleh dari Padang, Sumatera Barat pada bulan Januari 2013.

      Determinasi dilakukan di Laboratorium Farmakognosi-Fitokimia Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta. Determinasi dilakukan dengan mencocokkan serbuk biji P. americana dari sampel yang diperoleh dari Padang, Sumatera Barat dengan serbuk biji P. americana yang diperoleh dari Jawa, dilakukan secara makroskopis dan mikroskopis. Determinasi secara makroskopis dilakukan dengan membandingkan warna, rasa dan aroma, sedangkan secara mikroskopis dilakukan dengan membandingkan amilum dan parenkim endosperm.

      Pada determinasi makroskopis, terdapat sedikit variasi warna pada kedua bahan yang dibandingkan, sedangkan rasa, aroma dan ciri-ciri lain yang ditemukan dari kedua bahan menunjukkan adanya kesamaan. Berdasarkan determinasi mikroskopis, kedua bahan dinyatakan sama meskipun diduga ada penambahan amilum jangung atau singkong pada sampel. Hasil determinasi yang diperoleh menyatakan bahwa serbuk biji P. americana yang diperoleh dari 2. Padang, Sumatera Barat adalah benar merupakan serbuk P. americana.

      Pembuatan serbuk biji P. americana

      Pembuatan serbuk biji P. americana diawali dengan pengambilan biji

      

    P.americana, kemudian dilakuan pencucian dan pensortiran biji sesuai dengan

      langkah-langkah pembuatan simplisia. Pencucian bertujuan supaya biji yang diperoleh bebas dari kotoran dan debu. Penyortiran dilakukan supaya biji yang digunakan adalah biji yang masih segar dan tidak busuk. Biji P. americana kemudian dipisahkan dari kulitnya lalu dirajang tipis dan diangin-anginkan. Biji kemudian dikeringkan dalam oven pada suhu 50ºC selama 24 jam untuk mengoptimalkan pengeringan. Setelah biji kering kemudian dihaluskan dengan blender dan diayak dengan ayakan nomor 40. Pengayakan dilakukan agar kandungan fitokimia yang terkandung dalam biji P. americana lebih mudah tersekstrak karena luas permukaan spesifik yang kontak dengan pelarut semakin besar. Ukuran partikel serbuk tidak boleh terlalu kecil karena akan mengganggu proses filtrasi. Ukuran serbuk yang terlalu kecil kemungkinan dapat menembus 3. filter dan bercampur dengan filtrate sehingga filtrate tidak murni.

      Penetapan kadar air serbuk biji P. americana

      Penetapan kadar air dari serbuk biji P. americana bertujuan untuk mengetahui kandungan air dalam serbuk sehingga diketahui apakah serbuk yang dihasilkan memenuhi salah satu persyaratan serbuk yang baik, yakni kadar air kurang dari 10% (Departemen Kesehatan RI, 1995). Serbuk biji P,americana tidak mengandung senyawa volati dan mudah menguap sehingga pengujian yang dilakukan adalah penetapan kadar air. Penetapan kadar air serbuk biji P.

      

    americana dilakukan dengan metode Gravimetri dengan menggunakan alat

    moisture balance. Serbuk kering biji P. americana sebanyak 5 gram dipanaskan

      pada suhu 105°C selama 15 menit. Penetapan suhu sebesar 105°C dimaksudkan agar kandungan air telah menguap dan dalam waktu 15 menit dianggap bahwa kadar air telah memenuhi persyaratan parameter standarisasi non spesifik. Dari hasil pengujian penetapan kadar air menunjukkan bahwa serbuk biji P.americana memiliki rata-rata kadar air sebesar 7,4 %. Hasil pengujian ini, menunjukkan bahwa sebuk biji P. americana telah memenuhi persyaratan yang ditetapkan (Departemen Kesehatan RI, 1995).

    B. Hasil Penimbangan Bobot Ekstrak Metanol Biji P. americana

      Pembuatan ekstrak metanol dilakukan dengan metode penyarian yaitu dengan maserasi. Maserasi merupakan metode penyarian yang dilakukan dengan dituangi dengan cairan penyari berupa metanol 70% lalu ditutup dan dibiarkan selama 120 jam terlindung dari cahaya sambil diaduk sesekali lalu dilakukan remaserasi selama 48 jam.

      Metode ini dipilih dalam metode penyarian karena selain menggunakan peralatan yang sederhana dan cara pengerjaan serta pengoperasian alat yang mudah, metode ini cocok digunakan bila kandungan senyawa yang hendak dicari terdapat dalam jumlah banyak dan mudah diperoleh. Metode ini dilakukan untuk menyari simplisia yang dilarutkan menggunakan pelarut tertentu. Pemilihan pelarut ini didasarkan pada jenis kandungan zat aktif yang digunakan, agar ada kecocokan antara zat akif dengan larutan penyari sehingga zat aktif akan larut dan bercampur dengan cairan penyari. Dalam biji P.americana mengandung senyawa golongan fenolik yang dapat larut di dalam air sehingga dalam larutan penyari juga menggunakan air.

      Ekstrak yang diperoleh adalah berupa ekstrak kental yang dilihat dari bobot pengeringan tetap sebagai parameter. Tujuan dilakukannya pengukuran parameter adalah untuk menghitung sisa zat setelah pengeringan pada suhu ± 70ºC. Ekstrak yang diperoleh ditimbang setiap 1 jam hingga diperoleh berat konstan yang bertujuan untuk menentukan batasan atau rentang mengenai seberapa banyak senyawa yang hilang selama proses pengeringan yang akan berpengaruh terhadap konsentrasi dan dosis ekstrak. Rata-rata rendemen yang diperoleh adalah 53,1 g dengan persen rendemen sebesar 26,55 %.

      C. 1. Uji Pendahuluan Penentuan dosis hepatotoksin

      Pada penelitian ini digunakan karbon tetraklorida sebagai hepatotoksin. Pemilihan dosis karbon tetraklorida dilakukan untuk mengetahui dosis karbon tetraklorida yang dapat menyebabkan kerusakan pada hati tikus yang ditandai dengan peningkatan aktivitas ALT dan AST serum sebagai respon hati tikus terhadap karbon tetralorida.

      Karbon tetraklorida merupakan hepatotoksin yang dapat menyebabkan terjadinya perlemakan hati. Rajendran et al., (2009) dalam penelitiannya menyatakan bahwa peningkatan 2 kali aktivitas ALT serum dibandingkan dengan kontrol sudah mampu menyatakan terjadinya kerusakan pada hati. Dosis yang digunakan pada penelitian ini, yaitu 2 ml/kgBB, dengan pelarut yang digunakan adalah olive oil dalam perbandingan 1:1 yang diberikan secara intraperitoneal.

      Penetapan dosis ini didasarkan pada penelitian yang telah dilakukan sebelumnya oleh Janakat dan Al-Merie (2002). Deshwal et al. (2011) melaporkan bahwa dosis karbon tetraklorida yang dapat menginduksi kerusakan pada hati adalah sekitar 0,1 – 3ml/kg berat badan dengan pemberian secara intraperitoneal. Penelitian oleh Talia (2013), pada penggunaan hepatotoksin karbon tetraklorida 50% dengan dosis 2 ml/kgBB, memberikan peningkatan aktivitas ALT serum sebesar 3 kali lipat dibandingkan dengan keadaan normal tanpa induksi hepatotoksin.

      Pada penelitian ini diperoleh peningkatan aktivitas ALT serum pada pemberian dosis hepatotoksin 2 ml/kgBB sebesar 2,6 kali lipat dibandingkan dengan kontrol sebelum diinduksi hepatotoksin.

    2. Penentuan dosis ekstrak metanol biji P. americana

      Pada penelitian ini digunakan ekstrak metanol-air biji P.americana. Dosis yang digunakan pada penelitian ini diperoleh dari penelitian efek hepatoprotektif jangka panjang ekstrak metanol-air biji P.americana yang menunjukkan bahwa dosis yang paling efektif adalah sebesar 350 mg/kgBB yang diberikan secara 3. peroral dengan pelarut yang digunakan adalah CMC-Na.

      Penentuan waktu pencuplikan darah

      Penentuan waktu maksimal kehepatotoksikan karbon tetraklorida bertujuan untuk mengetahui waktu dimana karbon tetraklorida dosis 2 ml/kgBB memberikan efek hepatotoksik paling maksimal yang ditunjukkan dengan peningkatan tertinggi aktivitas ALT dan AST serum pada rentang waktu 24 dan 48 jam.

      Karbon tetraklorida diujikan pada tikus dengan dosis 2 ml/kgBB dengan waktu pencuplikan darah pada jam ke-24 dan 48. Sebelum hepatotoksin diujikan, serum darah tikus diambil terlebih dahulu sebagai jam ke-0 lalu diukur aktivitas ALT dan AST serum dan digunakan sebagai pembanding nilai aktivitas ALT dan AST serum terhadap aktivitas ALT dan AST setelah pemberian hepatotoksin.

      Hasil aktivitas ALT serum yang diperoleh dapat dilihat pada tabel I serta gambar 6 sedangkan aktivitas AST serum dapat dilihat pada tabel I serta gambar 7.

      Dari data tabel I dan gambar 6 diagram batang tersebut, diketahui bahwa aktivitas ALT serum pada jam ke 0 sebelum perlakuan, jam ke-24 dan 48 secara berturut-turut adalah 72,4 ± 6,2 ; 190,8 ± 11,7 dan 55,2 ± 3,7 U/L. Berdasarkan ke-24 dengan pemberian perlakuan karbon tetraklorida dosis 2 ml/kg BB lebih tinggi dibandingkan dengan pencuplikan darah pada jam ke 0 dan 48.

      

    Tabel I. Aktivitas ALT dan AST serum setelah pemberian karbon tetraklorida dosis

    2 ml/kg BB pada selang waktu 0, 24 dan 48 jam

      Selang Waktu Purata Aktivitas serum Purata Aktivitas serum (jam) ALT ± SE (U/L) AST ± SE (U/L)

      72,4 ± 6,2 85,2 ± 3,3 24 190,8 ± 11,7 460,2± 18,6 48 55,2 ± 3,7 141,2 ± 5,9

      

    Keterangan: SE = Standard Error

    Gambar 6. Diagram batang rata-rata aktivitas ALT serum sel hati tikus setelah pemberian

    karbon tetraklorida dosis 2 ml/kg BB pada selang waktu 0, 24 dan 48 jam

      Pada pencuplikan darah jam ke-24 didapatkan peningkatan aktivitas ALT serum 2-3 kali dari nilai normal yang dibandingkan terhadap jam ke-0 (72,4 ± 6,2 U/L). Pencuplikan darah pada jam ke-48 mengalami penurunan aktivitas ALT serum. Karena peningkatan aktivitas ALT serum tertinggi sudah memenuhi aktivitas ALT dan maka tidak dilakukan lagi pengukuran pencuplikan darah pada jam ke-72. Rajendran et al., (2009) dalam penelitiannya menyatakan bahwa peningkatan 2 kali aktivitas ALT serum dibandingkan dengan kontrol sudah mampu menyatakan terjadinya kerusakan pada hati. Selain itu dari uji statistik, dapat diketahui bahwa kenaikan ALT serum pada jam ke-24, menunjukkan perbedaan yang bermakna dibandingkan dengan aktivitas ALT serum pada jam ke-0 dan 48 yang dapat dilihat pada tabel II.

      

    Tabel II. Hasil uji statistik aktivitas ALT serum setelah pemberian karbon

    tetraklorida dosis 2 ml/kg BB pada waktu pencuplikan darah jam ke-0, 24 dan 48

      Perlakuan Jam ke-0 Jam ke-24 Jam ke-48 Jam ke-0 BB TB

      Jam ke-24 BB BB Jam ke-48 TB BB

      

    BB= berbeda bermakna (p<0,05); TB = berbeda tidak bermakna (p>0,05)

    Gambar 7. Diagram batang rata-rata aktivitas AST serum sel hati tikus setelah pemberian Tabel I dan gambar 7 menunjukkan adanya peningkatan aktivitas AST serum pada pencuplikan darah jam ke-24 dibandingkan dengan pencuplikan darah pada jam ke-0 dan 48. Dapat diketahui bahwa aktivitas AST serum pada jam ke-0, 24 dan 48 secara berturut-turut adalah 85,2 ± 3,3 ; 460,2± 18,6 dan 141,2 ± 5,9 U/L. Data menunjukkan adanya kenaikan aktivitas AST serum pada jam ke-24 sebesar 5-6 kali dari nilai normal AST serum yang dibandingkan terhadap jam ke- 0 (85,2 ± 3,3 U/L) sehingga sudah dapat dikategorikan terjadi hepatotoksisitas, sedangkan pada jam ke-48, kenaikan aktivitas serum sebesar 1-2 kali dari jam ke-

      0. Pada jam ke-48 sudah terjadi penurunan aktivitas serum. Dari data tersebut, kenaikan serum yang paling tinggi adalah pada jam ke-24. Hasil uji statistik akivitas AST serum pada waktu pencuplikan darah jam ke-0, 24 dan 48 disajikan pada tabel III.

      

    Tabel III. Hasil uji statistik aktivitas AST serum setelah pemberian karbon

    tetraklorida dosis 2 ml/kg BB pada waktu pencuplikan darah jam ke-0, 24 dan 48

      Perlakuan Jam ke-0 Jam ke-24 Jam ke-48 Jam ke-0 BB BB

      Jam ke-24 BB BB Jam ke-48 BB BB

      

    BB= berbeda bermakna (p<0,05); TB = berbeda tidak bermakna (p>0,05)

      Terdapat kenaikan aktivitas AST serum yang menunjukkan perbedaan yang bermakna (p<0,5) pada waktu pencuplikan darah jam ke-24 bila dibandingkan dengan jam ke-0 dan 48.

      Dari data tersebut, aktivitas ALT dan AST serum secara statistik

      0,05) dibandingkan dengan pencuplikan darah jam ke-0 dan 48. Oleh sebab itu, pada penelitian jangka pendek dipilih waktu pencuplikan darah hewan uji pada jam ke-24 setelah induksi CCl dengan dosis 2 ml/kgBB.

    4 D.

       Efek Hepatoprotektif Jangka Pendek Ekstrak Metanol-Air biji P.americana Terhadap Tikus Jantan Terinduksi Karbon Tetraklorida

      Penelitian ini dilakukan untuk membuktikan adanya efek hepatoprotektif ekstrak metanol-air biji P.americana dengan perlakuan jangka pendek. Dalam hal ini, jangka pendek diartikan bahwa pemberian antihepatotoksin dilakukan dalam rentang waktu tertentu, yaitu pemberian ekstrak metanol-air pada jam ke 1, 4 dan 6 sebelum penginduksian CCl .

    4 Dosis karbon tetraklorida dan olive oil yang digunakan dalam penelitian

      ini adalah sebesar 2 ml/kgBB. Karbon tetraklorida diberikan secara intraperitoneal dengan konsentrasi 50% dalam olive oil. Semua dosis yang digunakan diperoleh berdasarkan hasil orientasi.

      Dosis ekstrak metanol-air biji P.americana yang digunakan pada penelitian ini diperoleh dari penelitian yang dilakukan sebelumnya pada pengujian efek hepatoprotektif jangka panjang ekstrak metanol-air biji P.americana yang menunjukkan bahwa dosis efektif adalah sebesar 350 mg/kgBB, dengan pencuplikan darah yang dilakukan pada jam ke-24 setelah penginduksian CCl 4 .

      Berikut ini hasil penelitian dalam bentuk tabel :

      

    Tabel IV. Pengaruh perlakuan jangka pendek ekstrak metanol-air biji

    P.americana dosis 350 mg/kgBB berdasarkan aktivitas ALT dan AST serum pada beberapa variasi waktu terhadap hepatotoksisitas karbon tetraklorida

      Kel. Purata ± SE (U/L) Purata ± SE (U/L) Efek Hepatoprotektif Aktivitas serum ALT Aktivitas serum AST (%)

      I 47,6 ± 2,0 60,2 ± 2,4

    • II 46,0 ± 2,1 94,6 ± 0,7
    • III 183,2 ± 5,1 476,8 ± 14,3
    • IV 91,4± 2,7 231,2 ± 3,5 67,7 %

      V 57,8 ± 0,6 172,0 ± 2,2 92,5 %

      VI 46,2 ±1,3 96,0 ± 1,5 101,0 %

      Keterangan : I : kelompok kontrol negatif olive oil dosis 2 ml/kgBB

      II : kelompok kontrol perlakuan ekstrak metanol biji P.americana dosis 350 mg/kgBB

      III : kelompok kontrol hepatotoksin CCL dosis 200 ml/kgBB

    4

    IV : kelompok kontrol perlakuan ekstrak metanol biji P.americana dosis 350 mg/kgBB 1 jam + CCl 4 2ml/kg BB V : kelompok kontrol perlakuan ekstrak metanol biji P.americana dosis 350 mg/kgBB 4 jam + CCl 2ml/kg BB 4 VI : kelompok kontrol perlakuan ekstrak metanol biji P.americana dosis 350 mg/kgBB 6 jam + CCl 2ml/kg BB 4 SE = Standard Error Persen efek hepatoprotektif dihitung berdasarkan aktivitas ALT serum. 1. Kontrol negatif

      Kontrol negatif ini bertujuan untuk memastikan bahwa peningkatan aktivitas ALT dan AST serum pada tikus tidak disebabkan karena pelarut dari senyawa hepatotoksin melainkan berasal dari senyawa hepatotoksin yang diinduksikan yaitu CCl . Pada penelitian ini, digunakan kontrol negatif yaitu olive

      4 oil sebagai pelarut dari CCl 4 .

      Pada penelitian ini digunakan olive oil dengan dosis 2 ml/kg BB. Dosis yang digunakan sama dengan dosis hepatotoksin yang digunakan. Penelitian dilakukan dengan membandingkan aktivitas ALT dan AST serum sebelum dan setelah pemberian olive oil (tabel V).

      

    Tabel V. Aktivitas ALT dan AST pada pemberian olive oil 2ml/kgBB pada jam ke-0

    dan 24.

      Selang Waktu Purata Aktivitas serum Purata Aktivitas serum (jam) ALT ± SE (U/L) AST ± SE (U/L

      50,2 ± 2,2 41,6 ± 1,1

      60,2 ± 2,4 24 47,6 ± 1,9 Pencuplikan darah jam ke-0 dilakukan sebelum tikus diberikan perlakuan

      

    olive oil. Dalam keadaan tersebut diasumsikan bahwa tikus berada dalam keadaan

    normal. Hasil uji statistik aktivitas ALT dan AST disajikan pada tabel VI.

      

    Tabel VI. Hasil uji statistik aktivitas ALT dan AST serum setelah pemberian olive

    oil dosis 2 ml/kg BB pada pencuplikan darah jam ke-0 dan 24

      Aktivitas ALT serum Aktivitas AST serum Perlakuan

      Jam ke-0 Jam ke-24 Jam ke-0 Jam ke-24 Jam ke-0 BB BB

      Jam ke-24 BB BB

      

    BB= berbeda bermakna (p<0,05); TB = berbeda tidak bermakna (p>0,05)

      Hasil uji statistik (tabel VI) menunjukkan terdapat perbedaan bermakna aktivitas ALT dan AST serum pada jam ke-0 dan 24, namun perbedaan yang diberikan masih berada dalam rentang normal (lampiran 7) sehingga dapat dinyatakan bahwa olive oil dengan dosis 2 ml/kgBB tidak menyebabkan kerusakan hati pada 24 jam setelah pemberian.

      Pada penelitian ini, dilakukan pengukuran terhadap enzim alanin

      

    aminotransferase (ALT) dan aspartat transaminase (AST) pada serum darah tikus

      karena kedua enzim tersebut dapat mengalami peningkatan jika terjadi kerusakan pada hati. Enzim ALT secara berlimpah terdapat di sitosol sel parensimal hati (Okuda, 1997) dan nilai aktivitas ALT secara spesifik digunakan sebagai parameter kerusakan hati. Pada penelitian ini, aktivitas ALT serum digunakan sebagai faktor penentu utama sedangkan aktivitas AST serum sebagai faktor pendukung adanya kerusakan hati. AST merupakan enzim yang dapat ditemukan di sitosol dan mitokondria hepatosit. Enzim AST juga didistribusikan pada otot jantung, otot rangka, pankreas dan ginjal (Shyamal, Latha, Shine, Suja, Rajasekharan dan Devi, 2006). AST masih digunakan pada penelitian – penelitian sebagai parameter kerusakan hati terlebih karena AST merupakan indikator sensitif pada kerusakan mitokondria terutama pada bagian sentribular hati (Panthegini, 1990). Perubahan akivitas AST serum juga dapat disebabkan karena tegangnya tikus saat pengambilan darah, sehingga mempengaruhi kinerja otot dan menaikkan serum AST .

    2. Kontrol perlakuan (ekstrak metanol-air biji P.americana 350mg/kgBB)

      Kontrol perlakuan ekstrak metanol-air biji P.americana dilakukan dengan tujuan untuk melihat pengaruh ekstrak metanol-air biji P. americana terhadap sel hati tikus tanpa induksi karbon tetraklorida. Uji dilakukan dengan memberikan ekstrak metanol-air biji P.americana dosis 350 mg/kgBB secara peroral pada tikus kemudian diambil darahnya 6 jam setelah pemberian ekstrak untuk diukur aktivitas ALT dan AST serumnya.

      Aktivitas ALT serum kontrol ekstrak biji P.americana dosis 350 mg/kg BB ALT serum kontrol negatif olive oil (kelompok I) sebesar 47,6 ± 2,0 U/L maka tidak tampak perbedaan yang besar antara kedua nilai aktivitas ALT serum. Secara statistik, aktivitas ALT serum kontrol ekstrak metanol-air biji P.americana (kelompok II) terhadap kontrol negatif olive oil (kelompok I) tersebut adalah berbeda tidak bermakna (p > 0,05) (tabel VII). Hal ini menggambarkan bahwa ekstrak metanol-air biji P.americana tidak memberikan pengaruh hepatotoksik pada sel hati tikus karena aktivitas ALT serum masih berada dalam rentang normal.

      Aktivitas AST serum kontrol ekstrak metanol-air biji P.americana dosis 350 mg/kgBB (kelompok II) adalah sebesar 94,6 ± 0,7 U/L. Bila dibandingkan dengan aktivitas AST serum kontrol negatif olive oil (kelompok I) sebesar 60,2 ± 2,4 U/L maka dapat dilihat adanya perbedaan aktivitas AST serum yang cukup besar. Secara statistik, nilai aktivitas AST serum kontrol ekstrak metanol-air biji

      

    P.americana (kelompok II) terhadap kontrol negatif olive oil (kelompok I)

      tersebut adalah berbeda bermakna (p < 0,05) (tabel VIII). Meskipun aktivitas AST serum pada kontrol perlakuan lebih tinggi dibandingkan aktivitas AST serum pada kontrol negatif, tetapi angka ini tidak dapat menjadi patokan bahwa terjadi kerusakan sel hati pada pemberian ekstrak metanol-air biji P.american dosis 350mg/kg BB karena enzim AST di dalam tubuh tidak hanya terdapat di hati tetapi juga didistribusikan di otot jantung, otot rangka, pankreas dan ginjal sehingga tidak dapat digunakan sebagai parameter spesifik dari kerusakan sel hati. Hasil uji statistik aktivitas ALT dan AST serum pada kontrol perlakuan ekstrak metanol biji P.americana dan kontrol negatif olive oil disajikan pada tabel VII dan VIII.

    3. Kontrol hepatotoksin (karbon tetraklorida 2 ml/kgBB)

      Pengujian kontrol hepatotoksin karbon tetraklorida 2 ml/kgBB (kelompok

      III) dibuat untuk mengetahui pengaruh induksi karbon tetraklorida 2 ml/kgBB terhadap sel hati tikus melalui pengujian aktivitas ALT dan AST serum sekaligus digunakan untuk menganalisis efek hepatoprotektif ekstrak metanol-air biji P.americana.

      Aktivitas ALT serum kontrol hepatotoksin karbon tetraklorida 2 ml/kgBB adalah sebesar 183,2 ± 5,1U/L. Apabila dibandingkan dengan aktivitas ALT serum kontrol negatif olive oil 2ml/kgBB (kelompok I) sebesar 47,6 ± 2,0 U/L maka terlihat adanya kenaikan aktivitas ALT serum yang besar yaitu lebih kurang 3,8 kalinya. Secara statistik, kenaikan aktivitas ALT serum kontrol hepatotoksin (kelompok III) terhadap kontrol negatif (kelompok I) tersebut adalah berbeda bermakna (p < 0,05) (tabel VII).

      Aktivitas AST serum kontrol hepatotoksin karbon tetraklorida 2ml/kgBB (kelompok III) adalah sebesar 476,8 ± 14,3 U/L. Apabila dibandingkan dengan aktivitas AST serum kontrol negatif olive oil sebesar 60,2 ± 2,4 U/L maka terlihat adanya kenaikan aktivitas AST serum yaitu kurang lebih 7,9 kalinya. Secara statistik, kenaikan aktivitas AST serum kontrol hepatotoksin (kelompok III) terhadap kontrol negatif (kelompok I) tersebut adalah berbeda bermakna (p < 0,05) (tabel VIII).

      Berdasarkan hasil pengukuran aktivitas ALT dan AST serum, telah terjadi kerusakan sel hati tikus. Peningkatan aktivitas ALT dan AST serum pada kelompok kontrol hepatotoksin CCl dosis 2 ml/kgBB pada penelitian ini akan

      4

      digunakan sebagai dasar dalam melihat besarnya efek hepatoprotektif yang dimiliki oleh ekstrak metanol-air biji P.americana pada kelompok perlakuan 4. jangka pendek pada jam ke-1, 4 dan 6.

      

    Perlakuan Jangka Pendek Ekstrak Metanol-Air Biji P.americana

    Terhadap Tikus Terinduksi Karbon Tetraklorida

      Pada penelitian ini, dilakukan pengujian efek hepatoprotektif ekstrak metanol-air biji P.americana jangka pendek. Oleh karena itu penulis membatasi waktu perlakuan jangka pendek ekstrak metanol-air biji P.americana sebelum pemejanan CCl

      4 adalah rentang waktu antara 1 sampai 6 jam. Dari rentang waktu

      tersebut, ditentukan waktu sebagai perlakuan ekstrak metanol-air biji P.americana yaitu 1, 4 dan 6 jam.

      Evaluasi terhadap efek hepatoprotektif ekstrak metanol-air biji

      

    P.americana pada tikus jantan terinduksi karbon tetraklorida didasarkan pada ada

      tidaknya penurunan aktivitas ALT dan AST serum akibat praperlakuan ekstrak metanol-air biji P.americana terhadap aktivitas ALT dan AST serum kontrol hepatotoksin karbon tetraklorida.

      Hasil uji statistik dari masing-masing kelompok dapat dilihat pada tabel VII, gambar 8 untuk data ALT dan tabel VIII dan gambar 9 untuk data AST.

      

    Tabel VII. Hasil uji statistik perlakuan jangka pendek ekstrak metanol-air biji

    P.americana dosis 350 mg/kgBB berdasarkan aktivitas ALT serum pada beberapa variasi waktu

      

    I BB BB BB BB BB

      IV : kelompok kontrol perlakuan ekstrak metanol biji P.americana dosis 350 mg/kgBB 1 jam + CCl 4 200mg/kg BB V : kelompok kontrol perlakuan ekstrak metanol biji P.americana dosis 350 mg/kgBB 4 jam + CCl 4 200mg/kg BB

      III : kelompok kontrol hepatotoksin CCL 4 dosis 2 ml/kgBB

      II : kelompok kontrol perlakuan ekstrak metanol biji P.americana dosis 350 mg/kgBB

      VI BB TB BB BB BB

    BB= berbeda bermakna (p<0,05); TB = berbeda tidak bermakna (p>0,05)

    Keterangan tabel VII dan VIII : I : kelompok kontrol negatif olive oil dosis 2 ml/kgBB

      

    V BB BB BB BB BB

      

    IV BB BB BB BB BB

      

    III BB BB BB BB BB

      

    II BB BB BB BB TB

      Kontrol Ekstrak Kontrol CCl 4 Jam 1 Jam 4 Jam 6

      Perlakuan Kontrol Olive oil

      Perlakuan Kontrol Olive oil

      P.americana dosis 350 mg/kgBB berdasarkan aktivitas serum AST pada beberapa variasi waktu

      VI TB TB BB BB BB

    BB= berbeda bermakna (p<0,05); TB = berbeda tidak bermakna (p>0,05)

    Tabel VIII. Hasil uji statistik perlakuan jangka pendek ekstrak metanol-air biji

      

    V BB BB BB BB BB

      

    IV BB BB BB BB BB

      

    III BB BB BB BB BB

      

    II TB BB BB BB TB

      

    I TB BB BB BB TB

      Kontrol Ekstrak Kontrol CCl 4 Jam 1 Jam 4 Jam 6

      VI : kelompok kontrol perlakuan ekstrak metanol biji P.americana dosis 350 mg/kgBB 6 jam + CCl 4 200mg/kg BB

      Nilai aktivitas ALT serum menunjukan bahwa semakin lama praperlakuan ekstrak metanol-air biji P.americana yang diberikan, semakin besar pula perlindungan yang diberikan pada sel hati yang ditunjukkan dengan penurunan aktivitas ALT serum tikus dibandingkan dengan nilai aktivitas ALT serum pada pemberian hepatotoksin karbon tetraklorida. Berdasarkan hasil uji statistik pada hasil ketiga perlakuan, menunjukkan hasil yang berbeda bermakna antar kelompok perlakuan (tabel VII, gambar 8).

      

    Gambar 8. Diagram batang rata-rata pengaruh perlakuan jangka pendek pemberian

    ekstrak metanol-air biji P.americana terhadap hepatotoksisitas karbon tetraklorida dilihat

    dari aktivitas ALT serum

      Keterangan : 1 : kelompok kontrol negatif olive oil dosis 2 ml/kgBB 2 : kelompok kontrol perlakuan ekstrak metanol biji P.americana dosis 350 mg/kgBB 3 : kelompok kontrol hepatotoksin CCL 4 dosis 2 ml/kgBB 4 : kelompok kontrol perlakuan ekstrak metanol biji P.americana dosis 350 mg/kgBB 1 jam + CCl 200mg/kg BB 4 5 : kelompok kontrol perlakuan ekstrak metanol biji P.americana dosis 350 mg/kgBB 4 jam + CCl 200mg/kg BB 4 6 : kelompok kontrol perlakuan ekstrak metanol biji P.americana dosis 350 mg/kgBB 6 jam + CCl 4 200mg/kg BB

      Nilai aktivitas AST serum (tabel VIII, gambar 9) menunjukan bahwa terjadi hepatotoksin seiring dengan semakin lamanya waktu praperlakuan ekstrak metanol-air biji P.americana yang diberikan. Berdasarkan uji statistik, nilai aktivitas AST serum pada ketiga kelompok perlakuan adalah berbeda bermakna (p<0,05).

      

    Gambar 9. Diagram batang rata-rata pengaruh perlakuan jangka pendek pemberian

    ekstrak metanol-air biji P.americana terhadap hepatotoksisitas karbon tetraklorida dilihat

    dari aktivitas AST serum

      Keterangan : 1 : kelompok kontrol negatif olive oil dosis 2 ml/kgBB 2 : kelompok kontrol perlakuan ekstrak metanol biji P.americana dosis 350 mg/kgBB 3 : kelompok kontrol hepatotoksin CCL

    4

    dosis 2 ml/kgBB 4 : kelompok kontrol perlakuan ekstrak metanol biji P.americana dosis 350 mg/kgBB 1 jam + CCl 4 200mg/kg BB 5 : kelompok kontrol perlakuan ekstrak metanol biji P.americana dosis 350 mg/kgBB 4 jam + CCl 4 200mg/kg BB 6 : kelompok kontrol perlakuan ekstrak metanol biji P.americana dosis 350 mg/kgBB 6 jam + CCl 4 200mg/kg BB

      Pada pemberian perlakuan jam ke-1 ekstrak metanol-air biji P.americana

      2,7 U/L. Pengukuran data aktivitas ALT serum tersebut didukung dengan pengukuran aktivitas AST serum sebesar 231,2 ± 3,5 U/L. Hasil analisis menunjukkan efek hepatoprotektif berdasarkan aktivitas ALT serum adalah sebesar 67,7 %. Perbandingkan dengan kontrol hepatotoksin CCl

      4 menunjukkan

      adanya perbedaan yang bermakna, yang menyatakan bahwa pemberian ekstrak

      

    P.americana pada jam ke-1 dapat menurunkan aktivitas ALT dan AST serum

      sedangkan pembandingan secara statistik terhadap kontrol negatif olive oil menunjukkan nilai yang berbeda bermakna. Hal ini menunjukkan bahwa pemberian ekstrak metanol air biji P.americana pada jam ke-1 memberikan efek hepatoprotektif dilihat dari adanya penurunan aktivitas ALT dan AST serum yang mengindikasikan adanya pemulihan pada jaringan hati yang mengalami kerusakan (Devaraj et al., 2010), meskipun efek hepatoprotektif yang diberikan belum mampu memulihkan keadaan hati seperti keadaan normal.

      Kelompok perlakuan jam ke-4 ekstrak metanol-air biji P.americana 350 mg/kg BB (kelompok V) dari tabel V menunjukkan hasil aktivitas ALT serum sebesar 57,8 ± 0,6 U/L dan aktivitas AST serum sebesar 172,0 ± 2,3 U/L dengan efek hepatoprotektif sebesar 92,5 %. Pembandingan dengan kontrol hepatotoksin CCl menunjukkan perbedaan yang bermakna (p<0,05), hal ini membuktikan

      4

      bahwa ekstrak metanol-air biji P.americana 350 mg/kg BB memiliki efek hepatoprotekif. Apabila aktivitas ALT dan AST serum pada kelompok perlakuan jam ke-4 dibandingkan dengan kontrol negatif olive oil, menunjukkan adanya perbedaan yang bermakna. Dari data tersebut dapat dilihat bahwa ekstrak metanol-air biji P.americana 350 mg/kg BB memiliki efek hepatoprotektif akibat kerusakan di hati yang ditimbulkan oleh CCl , tetapi belum bisa mengembalikan

      4 keadaan hati seperti dalam keadaan normal.

      Pada perlakuan efek hepatoprotektif jangka pendek ekstrak metanol-air biji

      

    P.americana 350 mg/kg BB dengan perlakuan jam ke-6 (kelompok VI) dari tabel

      V menunjukkan hasil aktivitas ALT serum sebesar 46,2 ±1,3 U/L dan aktivitas AST serum sebesar 96,0 ± 1,5 U/L dengan efek hepatoprotektif sebesar 101,0 %.

      Hasil ini menunjukkan perbedaan yang bermakna (p<0,05) dibandingkan dengan kontrol hepatotoksin CCl . Dengan adanya perbedaan aktivitas serum yang

      4

      bermakna antara kelompok perlakuan jam ke-6 dengan kelompok kontrol hepatotoksin dapat dinyatakan bahwa ekstrak metanol-air biji P.americana memiliki efek hepatoprotektif. Perlakuan jangka pendek jam ke-6 memberikan efek hepatoprotektif paling tinggi bila dibandingkan dengan jam ke-1 dan 4.

      Pembandingan aktivitas ALT serum pada perlakuan ekstrak metanol-air biji

      

    P.americana jam ke-6 dengan kontrol negatif olive oil dan kontrol perlakuan jam

      ke-0 menunjukkan perbedaan yang tidak bermakna yang berarti bahwa ekstrak metanol air biji P.americana memiliki efek hepatoprotektif yang dapat mengembalikan keadaan hati yang rusak akibat pemberian karbon tetraklorida hingga mendekati keadaan normal.

      Data penelitian ini, secara keseluruhan diketahui bahwa, ekstrak metanol-air biji P.americana dapat digunakan sebagai hepatoprotektor, dengan senyawa penginduksi karbon tetraklorida yang menyebabkan steatosis.

      Pada perlakuan jangka pendek yang dilakukan pada jam ke-1, 4 dan 6 didapatkan hasil aktivitas ALT serum secara berurutan yaitu 91,4 ± 2,7 ; 57,8 ±

      0,6 ; 46,2 ±1,3 U/L dan aktivitas AST secara berurutan yaitu 231,2 ± 3,5 ; 172,0 ± 2,3 ; 96,0 ± 1,5 U/L. Dari data tersebut, diketahui bahwa efek hepatoprotektif tertinggi yang mencapai 101,0 % diperoleh dari perlakuan jam ke-6. Berdasarkan uji statistik, aktivitas ALT dan AST serum pada perlakuan jam ke-6 menunjukkan hasil yang berbeda bermakna dibandingkan dengan aktivitas ALT dan AST serum pada perlakuan jam ke-1 dan 4.

      Ekstrak metanol-air biji P.americana pada perlakuan jam ke-6 merupakan waktu yang paling efektif karena memiliki efek hepatoprotektif yang paling tinggi dibandingkan waktu perlakuan lainnya. Efek hepatoprotektif yang ditunjukkan pada perlakuan jam ke-6 menunjukkan hasil yang berbeda bermakna dengan efek hepatoprotektif pada perlakuan di jam ke-1 dan 4.

    E. Rangkuman Pembahasan

      Pada penelitian ini, nilai aktivitas ALT serum digunakan sebagai parameter utama untuk melihat apakah ekstrak metanol-air biji P.americana memiliki efek hepatoprotektif pada tikus terinduksi karbon tetraklorida sedangkan nilai aktivitas AST serum digunakan sebagai parameter pendukung karena aktivitas AST serum tidak secara spesifik menggambarkan keadaan sel hati.

      Hasil yang diperoleh dalam penelitian ini adalah perlakuan jangka pendek ekstrak metanol-air biji P.americana 350 mg/kg BB mampu menghasilkan efek hepatoprotektif pada waktu 1, 4, dan 6 jam, dengan persen efek hepatoprotektif untuk serum ALT secara berturut-turut adalah 67,6 ; 92,5 dan 101,0 %. Hasil ini sesuai dengan hipotesis bahwa ekstrak metanol air biji P.americana 350 mg/kg BB memiliki efek hepatoprotektif jangka pendek pada tikus jantan terinduksi karbon tetraklorida.

      Pada kelompok kontrol perlakuan ekstrak metanol-air biji P.americana menunjukkan aktivitas ALT serum yang berbeda tidak bermakna dibandingkan dengan kontrol negatif olive oil. Hal ini menujukkan bahwa ekstrak metanol-air biji P.americana tidak memiliki pengaruh terhadap kenaikan aktivitas ALT serum yang menandakan bahwa ekstrak metanol-air biji P.americana tidak memberikan kerusakan pada sel-sel hati tikus jantan, sehingga kenaikkan serum ALT pada penelitian ini diakibatkan oleh induksi hepatotoksin karbon tetraklorida pada tikus jantan.

      Pada penelitian ini dipilih pada waktu perlakuan ekstrak metanol-air biji

      

    P.americana jam ke-6 sebagai waktu paling efektif karena pada perlakuan tersebut

      memberikan efek hepatoprotektif yang paling tinggi dibandingkan perlakuan pada jam ke-1 dan 4. Perbedaan aktivitas ALT dan AST serum pada ketiga kelompok perlakuan menunjukkan perbedaan yang bermakna satu sama lain. Pada jam ke-6, ekstrak metanol-air biji P.americana memberikan efek hepatoprotektif sebesar 101,0 %.

      Ekstrak metanol-air biji P.americana memberikan efek hepatoprotektif yang baik pada toksisitas yang diinduksi karbon tetraklorida. Pengembangan formulanya menjadi bentuk sediaan obat yang mudah dikonsumsi masyarakat akan memberikan manfaat yang lebih besar bagi masyarakat.

      Senyawa kimia lain yang dapat digunakan sebagai senyawa model hepatotoksisitas adalah parasetamol. Parasetamol dikenal cukup baik di masyarakat sebagai antipiretik dan analgesik. Umumnya, parasetamol aman jika diberikan pada dosis terapetik yaitu 1 - 4 g / hari, tetapi jika diberikan pada dosis yang berlebih akan menyebabkan hepatotoksik (Forrest, 2006). N-acetyl p-

      

    benzoquinone imine (NAPQI) adalah metabolit parasetamol yang dihasilkan dari

    oksidasi oleh enzim sitokrom P-450 dan bersifat sangat toksik (Olson, 2006).

      Pada keadaan overdosis, parasetamol akan dioksidasi dan menghasilkan NAPQI yang dapat mengakibatkan nekrosis hati (Williamson et al., 1996).

      Efek hepatoprotektif ekstrak metanol-air biji P.americana pada toksisitas karbon tetraklorida dengan manifestasi toksisitas berupa steatosis terbukti memberikan efek yang baik. Penelitian efek hepatoprotektif ekstrak metanol-air biji P.americana pada toksisitas senyawa lain seperti parasetamol baik untuk dilakukan terutama karena manifestasi toksisitas parasetamol berupa nekrosis. Hasil penelitian efek hepatoprotektif pada parasetamol dapat mengembangkan dan melengkapi informasi yang telah diperoleh pada penelitian ini.

    BAB V KESIMPULAN DAN SARAN A. Kesimpulan Berdasarkan hasil yang diperoleh dari hasil penelitian berdasarkan dan

      analisis statistik yang telah dilakukan, maka dapat disimpulkan: 1.

      Pemberian ekstrak metanol-air biji P.americana dosis 350 mg/kgBB terbukti mampu menghasilkan efek hepatoprotektif jangka pendek pada tikus yang terinduksi karbon tetraklorida dengan dosis 2 ml/kgBB dengan waktu jam ke-1,4 dan 6 jam.

      2. Perlakuan jam ke-6 ekstrak metanol-air biji P.americana 350 mg/kg BB merupakan waktu pemberian perlakuan yang paling efektif untuk menghasilkan efek hepatoprotektif pada tikus jantan teriduksi karbon tetraklorida 2 ml/kgBB. B.

       Saran

      Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut tentang:

      1. Uji hepatoprotektif dengan ekstrak metanol-air biji P.americana untuk induksi hepatotoksin lain seperti parasetamol.

      2. Perlu dilakukan formulasi menjadi bentuk sediaan obat dengan bahan baku ekstrak metanol-air biji P.americana.

    DAFTAR PUSTAKA

      Arukwe, U., Amadi, B.A., Duru, M. K.C., Agomuo,E.N., Adindu, E. A., Odika, P.C., Lele, K.C., Egejuru, L., and Anudike, J., 2012, Chemical Composition Of Persea Americana Leaf, Fruit And Seed., International Journal of Research and Reviews in Applied Sciences, 11(2),346– 349.

      Al-Ash’ary, M.N., Supriyanti, T.F.M., Zackiyah., 2010, Penentuan Pelarut terbaik dalam mengekstraksi senyawa bioaktif dari kulit batang Artocarpus

      heterophyllus, Universitas Pendidikan Indonesia AlWasel,A.H., and

      Bashandy,S,A, 2011, Carbon Tetrachloride-induced Hepatotoxicty and Nephrotoxicity in Rats : Protective Role Vitamin C, Journal of Pharmacology and Toxicology., 6(3), 283 – 292.

      Amarthya, G.K., Partha, G., Upal, M.K., Shibnath, G., 2009, Hepatoprotective & antioxidant effect & stereoidal saponins of solanum of Solanum

      xanthocarpum & Solanum nigrum in paracetamol induce hepatotoxicity in

      rats, Pharmacologyonline, 757 – 768. Asaolu,M.F., Asaolu,S.S., Fakunle,J.B., Emman- Okun, B.O., Ajay,E.O., Togun,

      R.A., 2010, Evaluation on in-vitro Antioxidant Activities of Methanol Extracts of Persea Americana and Cnidosculuc aconitifolius, Pakistan Journal of Nutrition.,9(11), 1074-1077.

      Badan Pengawas Obat dan Makanan, 2010, Acuan Sediaan Herbal, Badan Pengawas Obat dan Makanan Republik Indonesia, Jakarta, pp. 7. Bashandy, S.A., AlWasel, S.H., 2011, Carbon Tetrachloride-induced

      Hepatotoxicity and Nephrotoxicity in Rats: Protective Role of Vitamin C,

    Journal of Pharmacology amd Toxicology, Vol 6(3), pp. 283 – 292. Byers, J.A., 2003, Solvent Polarity and Miscibility, http://www.chemical- ecology.net/java/solvents.htm, diakses tanggal 15 Juli 2013. Chandrasoma dan Taylor, 1995,Concise Pathology, Edisi Kedua, FRC Parh Prentice Hall International, USA, pp. 621 – 628. Departemen Kesehatan Republik Indonesia, 1986, Sediaan Galenik, Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta, pp. 6-7, 20. Departemen Kesehatan Republik Indonesia, 1995, Farmakope Indonesia, jilid IV, Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta, pp. 7, 410. Departement of Health and Human Services, 2005, Public Health Statement: Carbon Tetracloride, http://www.atsdr.cdc.gov/phs/phs. asp?id=194&tid=35, diakses tanggal 15 Juli 2013. Departement of Health and Human Services, 2011, National Toxicology

      Program, Public Health Statement: Carbon Tetracloride, Edisi 12, http://ntp.niehs.nih.gov/go/roc12, diakses tanggal 15 Juli 2013.

      Deshwal N., Sharma A.K., Sharma P., 2011, Review of Hepatoprotective Plant, International Journal of Pharmaceutical Science Review and Research, 7 (1), 15 – 26.

      Devaraj, S., Ismail, S., Ramanathan, S., Marimuthu, S., Fei, Y.M., 2010, Evaluation of the hepatoprotective activity of standardized ethanolic extract of Curcuma xanthorrhiza Roxb, Journal of Medicinal Plants

      Research, Vol 4(23), pp. 2512 – 2517.

      DiPiro, 2008, Pharmacotherapy A Pathophisiologic Approach, Edisi Ketujuh, McGrraw Hill, USA, pp. 636. Donatus, I.A., 1992, Fitofarmaka Penyakit Hati, Kumpulan Naskah Lengkap Simposium National Hepatitis, Jakarta, pp. 23. Donatus, I., 2001, Toksikologi Dasar, Laboratorium Farmakologi dan Toksikologi Fakultas Farmasi Universitas Gadjah Mada, Yogyakarya, pp. 121. Farrell, George,Hall, dan McCullough, 2005, Fatty Liver Disease, NASH and

      Related Disorders, Blackwell Publishing Ltd., Massachusetts, United States of America, pp. 266.

      Forrest, E., 2006, Hepatic Disorders, Edisi Kedua, Pharmaceutical Press, London, pp. 193, 201-202. Gregus dan Klaaseen, C.D., 2001, Mechanism of Toxicity, in Klaaseen, C.D.,

      th Cassarett and Doull’s Toxicology : the Basic Science Poisons, 6 edition, McGraw-Hill, New York, pp. 57-64.

      Greim, H., and Snyder, R., 2008, Toxicology and Risk Assessment : A

      Comprehensive Introduction, John Wiley & Sons,Inc., England, pp. 216-

      226 Guyton, A.C., 1983, Review of Medical Physiology, diterjemahkan oleh Adji Dharma, Penerbit Buku Kedokteran EGC, Jakarta, pp. 392 -400.

      Guyton, A.C., dan Hall, J.E., 1997, Buku Ajar Fisiologi Kedokteran, Edisi 9,

      Guyton, A.C., dan Hall, J.E., 2007, Buku Ajar Fisiologi Kedokteran, Edisi 11, Penerbit EGC, Jakarta, pp. 902-904.

      

    Handa SS, Sharma A, 1990, Hepatoprotective activity of Andrographolide from

    Andrographis paniculata against carbon tetrachloride, Ind. J. Med. Res, 92, 276-92.

      Hodgson, E., 2010, A Textbook of Modern Toxicology, Edisi Keempat, John Wiley & Sons Inc., New Jersey, pp. 281, 282. Janakat, S., and Al-Merie, H., 2002, Optimization of The Dose and Route of

      Injection, and Characterization of The Time Course of Carbon Tetrachloride-Induced Hepatotoxicity In The Rat, J. Pharm. Tox. Methods, 48, 41-44.

      Kate, I.E., and Lucky,O.O., 2009, Biochemical Evaluation of The Tradomedicinal Uses of The Seeds of Persea Americana. Mill., (Family : Lauraceae), World Journal of Medicinal Science., 4(2), 143 – 146.

      Kumar, V., Abbas, A.K., Fausto, N., Mitchell, R.N., 2007, Robbins&Cortan Basic Pathology, Edisi 7, Philadelphia, USA, pp. 649. Kumar,V.M.D., Contran, Ramzi,S.M.D., Robbins, Stanley, L.M.D., 1992, Basic

      Pathology, sixth edition, W.B Saunders Company, Philadelphia, pp. 517 – 519, 534.

      Lautt, W.W., 2009. Hepatic Circulation , Physiology and Pathophysiology , University of Manitoba, California, http://www.ncbi.nlm. nih.gov/books/NBK53073/, diakses pada tanggal 15 September 2013. Leite, J.J.G., Brito, E.H.S., Cordeiro, R.A., Brilhante, R.S.N., Sidrim, J.J.C.,

      Bertini, L.M. , Morais, S.M., and Rocha, M.F.G., 2009, Chemical Composition, Toxicity And Larvicidal And Antifungal Activities Of Persea

      americana(Avocado) Seed Extracts.,Revista da Sociedade Brasileira de Medicina Tropical, 42 (2), 110 – 113.

      Lu, F.C., 1995, Toksikologi dasar, Asas, Organ Sasaran dan Penilaian Resiko, Edisi kedua, UI press, Jakarta, Indonesia, 209-215. Machmud, R., 2000, Pencegahan Penyakit dan Promosi Kesehatan Untuk

      Penyakit Perlemakan Hati Melalui Penganganan Kegemukan, Majalah Kedokteran Andalas, 2 (24), 47. Mutschler, E., 1999, Dinamika Obat, diterjemakan oleh Widianto, M.B., dan National Center of Biotechnology Information, 2013, Methanol-Compound

      Summary, http://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/summary/summary.cgi?cid= 887, diakses pada 3 Maret 2013.

      Nurachmah,E., Angriani,R., 2011, Dasar-Dasar Anatomi dan Fisiologi, Penerbit Salemba Medika, Jakarta., pp. 192 – 193. Okuda, K., 1997, Hepatocellular carcinoma : clinical pathological aspects, J.Gastroenterol Hepatol, Vol 2 (9-10), pp. 314-318.

      th

      Olson, K.R., 2006, Poisoning & Drug Overdose, 5 edition, Mc Graw Hill, California, pp.128. Paliwal A., Gurjar R.K., Sharma H.N., 2009, Analysis of liver enzymes in albino rat under stress of λ-cyhalothrin and nuvan toxicity, Biology and Medicine,

      1 (2), pp. 70-73. Pantheghini, M., 1990, Aspartate aminotransferase Isoenzyme, Clinical Bipchemistry, Vol23 (4), pp. 311-319.

      Pearce, E.C., Anatomi dan Fisiologi Untuk Paramedis, Gramedia Pustaka Utama, Jakarta, pp. 243 – 248. Price, S.A., Wilson, L.M., 2005, Patofisiologi : Konsep Klinik Proses – Proses Penyakit, Edisi 6, Penerbit Buku Kedokteran EGC, Jakarta, pp.472 – 476. Rajendran, R., Hemalatha, S., Akasakalai, K., MadhuKrishna, C.H., Sohil, B.,

      Vittal., Sundaram, R.M., 2009, Hepatoprotective Activity of Mimosa

      pudica Leaves Against Carbontetrachloride Induced Toxicity, Journal of Natural Products, India, Vol 2 , pp. 116 – 122.

      Reddy, J.K., Rao,M.S., 2006, Lipid Methabolism and Liver Inflammation. II Fatty Liver Disease and Fatty Acid Oxidation, Am J Physiol Gastrointestinal Liver Physiol, Vol 290, pp. G852 – G858.

      Reed, D.J.,2001, Mechanism of Chemical Induced Cell Injury and Cellular Protection Mechanism, in Hodgson, E., Smart, R.C., (Eds.), Introduction

      to Biochemical Toxicology, Thord Edition, John Wiley & Sons Inc., Canada, pp. 493 – 497.

      Romero, F.J., Bosch-Morell., Romero, M.J., Jareno, E.J., Romero, B., Marin, N., Roma, J., 1998, Lipid Peroxidation Products and Antioxidants in Human Disease, Environ Health Perspects , Vol 106(5), pp. 1229 – 1234.

      Sampurno, 2003, Obat Herbal dalam Prespektif Medik dan Bisnis, http://mot.farm asi.ugm.ac.id/files/13OBAT%20HERBAL_Sampurno.pdf , diunduh pada tanggal 5 Mei 2013. Sherwood, L., 2011, Fisiologi Manusia dari Sel ke Sistem, Penerbit Buku Kedokteran ECG, Jakarta, pp. 670 – 672.

      Shyamal, S., Latha, P.G., Shine, V.J., Suja, S.R., Rajasekharan, S., Devi, T.G., 2006, Hepatoprotective Effects of Pittosporum neelgherrense Wight & Arn,A Popular Indian Ethnomedicine, J.Ethnopharmacol, Vol (107), pp.

      151-155. Subroto, M.A., dan Saputro, H, 2006, Gempur Penyakit Dengan Sarang Semut, Penebar Swadaya, Depok, pp. 27.

      Talia, B.K., 2013, Efek Hepatprotektif Jangka Pendek Ekstrak Metanol-Air Daun

      Macaranga tanarius L. Terhadap Tikus Terinduksi Karbon Tetraklorida, Skripsi, 40,43, Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta.

      Thieness,C.H., Halley, T.J., 1972, Clinical Toxicology, Fifth Edition, Lea and Febiger, Philadelphia, pp. 147 – 149. Timbrell J. A., 2008, Principles of Biochemical Toxicology, Informa Healthcare USA, New York, pp. 308 – 309. Treinen, M., dan Moslen, 2001, Toxic Responses of The Liver, in Klaassen, C.D.,

      th Cassarett and Doull’s Toxicology : The Basic Science of Poisons, 6 edition, Mc. Graw Hill Companies, Inc., New York, pp. 467-481.

      United States Department of Energy, 2013, Methanol, http://www.afdc.energy.gov/fuels/emerging_methanol.html, diakses pada

      10 Septermber 2013. United States Department of Energy, 2010, Toxicological Review of Carbon

      Tetrachloride, U.S. Environment Protection Agency, Washington, pp. 12 – 13.

      United States Environment Protection Agency, 2007, Carbon Tetrachloride, http://www.epa.gov/ttnatw01/hlthef/carbonte.html, diakses pada 3 Maret 2013. Unites States Environmental Protection Agency, 1994, Methanol Basic, www.epa.gov/oms/ consumer/07-meoh.pdf, 15 Agustus 2013.

      Ward,J., Clarke,R.,Linden,R., 2009, At a Glance Fisiologi, Penerbit Erlangga, Jakarta, pp.81. Wibowo dan Paryana, 2009, Anatomi Tubuh Manusia, Graha Ilmu, Indonesia, pp.

      347,348,351, 352. Williamson, E.M., Davis,T.O., and Fred,J.E, 1996, Pharmacological Methods in

      Phytotherapy Research Vol.1 : Selection, Preparation and Pharmacological Evaluation of Plant Material, John Wiley & Sons,

      Cichester, England, pp. 49. World Health Organization, 2009, Cancer, http://www.who.int/ mediacentre /fact- sheets/fs297/en/, diakses tanggal 3 Maret 2013.

      World Health Organization, 2013, Global Policy Report on The Prevention and Control of Viral Hepatitis, World Health Organization, Swiss, pp. 148, 158. Yasir,M., Das,S., and Kharya,M.D., 2010, The Phytochemical and

      Pharmacological Profile of Persea americana Mill, NCBI, http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3249906/, diakses pada 3 Maret 2013. Yuko, M., Jun, K, 2003, Antioxidative Constituents in Avocado (Persea

      americana Mill.) Seeds, Journal of the Japanese Society for Food Science and Technology., 5(11), 550 – 552.

      Zimmerman, H. J., 1978, Hepatotoxicity, Appleton Century Crofts, NewYork, pp.

      167-171, 179.

      

    LAMPIRAN

      Lampiran 1. Foto biji P.americana Mill Gambar 10. Biji P.americana Mill. Lampiran 2. Foto ekstrak metanol-air biji P.americana

    Gambar 11.Ekstrak metanol - air biji P.americana

    Lampiran 3. Perhitungan Persen Rendemen Ekstrak Metanol-Air Biji

      P.americana

      % = x 100% 13,9 + 39,2

      = x 100% 200

      = 26, 55 %

      Lampiran 4. Surat Determinasi Tanaman Biji P.americana

       Lampiran 5. Surat Ethical Clearence

      Lampiran 6. Hasil Uji Statistik Orientasi Pencuplikan Darah

    Tabel IX. Data Purata dan Standar Error Aktivitas Serum ALT/AST pada jam 0, 24

    dan 48

      Jam Serum Purata ± SE (U/L) Aktivitas Serum

      Pencuplikan 72,4 ± 6,2

      ALT 24 190,8 ± 11,7 48 55,2 ± 3,7 85,2 ± 3,3

      AST 24 460,2± 18,6 48 141,2 ± 5,9 Keterangan : SE = Standard Error

    AKTIVITAS ALT SERUM

      Hasil uji normalitas Kolmogorov-Smirnov aktivitas ALT serum menunjukkan distribusi data normal (p > 0,05). Selanjutnya homogenitas data diuji dengan Levene test.

      Levene test menunjukkan nilai p = 0,325 (p>0,05) yang menunjukkan

      varians data yang sama sehingga uji hipotesis dapat dilakukan dengan one way ANOVA dengan uji post hoc dengan menggunakan Scheffe.

      Nilai signifikansi yang diperoleh adalah : Jam ke-0 dan 24 p = 0,000 (p < 0,05) menunjukan bahwa ada perbedaan

    • bermakna antara kedua kelompok.

      Jam ke-0 dan 48 p = 0,342 (p > 0,05) menunjukan bahwa ada perbedaan

    • tidak bermakna antara kedua kelompok.

      Jam ke-24 dan 48 p = 0,000 (p < 0,05) menunjukan bahwa ada perbedaan

    • bermakna antara kedua kelompok.

    AKTIVITAS AST SERUM

      Hasil uji normalitas Kolmogorov-Smirnov aktivitas ALT serum menunjukkan distribusi data normal (p > 0,05). Selanjutnya homogenitas data diuji dengan Levene test.

      Levene test menunjukkan nilai p = 0,036 (p < 0,05) yang menunjukkan

      varians data yang tidak sama sehingga uji hipotesis dilakukan dengan Kruskall- Wallis dengan uji post hoc dengan menggunakan Mann-Whitney.

      Dengan uji Kruskall-Wallis, diperoleh nilai p = 0,004 (p < 0,05) yang menunjukkan bahwa paling tidak terdapat perbedaan aktivitas AST antar kelompok. Analisis Pos Hoc dilakukan dengan uji Mann-Whitney.

       Uji Mann-Whitney pada kelompok orientasi AST jam ke-0 dan 24

      Nilai signifikansi yang diperoleh adalah 0,009 (p < 0,05) yang menunjukan bahwa ada perbedaan bermakna antara kedua kelompok.

       Uji Mann-Whitney pada kelompok orientasi AST jam ke-0 dan 48 Nilai signifikansi yang diperoleh adalah 0,047 (p < 0,05) yang menunjukan bahwa ada perbedaan bermakna antara kedua kelompok.

       Uji Mann-Whitney pada kelompok orientasi AST jam ke-24 dan 48

      Nilai signifikansi yang diperoleh adalah 0,009 (p < 0,05) yang menunjukan bahwa ada perbedaan bermakna antara kedua kelompok.

      

    Tabel X. Hasil uji statistik aktivitas ALT serum setelah pemberian karbon

    tetraklorida dosis 2 ml/kg BB pada waktu pencuplikan darah jam ke-0, 24 dan 48

      

    BB= berbeda bermakna (p<0,05); TB = berbeda tidak bermakna (p>0,05)

      Perlakuan Jam ke-0 Jam ke-24 Jam ke-48 Jam ke-0 BB TB

      Jam ke-24 BB BB Jam ke-48 TB BB

      

    Tabel XI. Hasil uji statistik aktivitas AST serum setelah pemberian karbon

    tetraklorida dosis 2 ml/kg BB pada waktu pencuplikan darah jam ke-0, 24 dan 48

      Perlakuan Jam ke-0 Jam ke-24 Jam ke-48 Jam ke-0 BB BB

      Jam ke-24 BB BB Jam ke-48 BB BB

      

    BB= berbeda bermakna (p<0,05); TB = berbeda tidak bermakna (p>0,05)

    Lampiran 7. Hasil Uji Statistik Kelompok Kontrol Negatif

    Tabel XII. Data Purata dan Standar Error Aktivitas ALT dan AST serum kelompok

    kontrol negatif (olive oil 2ml/kgBB) pada jam ke-0 dan 24

      Jam Serum Purata ± SE (U/L) Aktivitas Serum

      Pencuplikan 41,6 ± 1,2

      ALT 24 47,9 ± 1,9 50,2 ± 2,2

      AST 24 60,2 ± 2,4 Keterangan : SE = Standar Error

    AKTIVITAS ALT SERUM

Dokumen baru

Tags

Dokumen yang terkait

Efek hepatoprotektif jangka pendek infusa biji atung (Parinarium glaberimum Hassk) pada tikus jantan galur wistar terinduksi karbon tetraklorida
0
2
66
Efek nefroprotektif jangka pendek ekstrak metanol-air biji persea americana mill. terhadap kadar kreatinin dan gambaran histologis ginjal tikus jantan wistar terinduksi karbon tetraklorida.
0
3
121
Efek hepatoprotektif pemberian jangka panjang ekstrak etanol biji persea americana mill. terhadap aktivitas alt dan ast serum pada tikus terinduksi karbon tetraklorida.
1
2
117
Efek hepatoprotektif jangka panjang ekstrak metanol-air biji persea americana mill. terhadap aktivitas alt-ast serum pada tikus jantan wistar terinduksi karbon tetraklorida.
0
1
155
Efek hepatoprotektif jangka pendek dekok biji persea americana mill. terhadap aktivitas ALT-AST pada tikus terinduksi karbon tetraklorida.
0
0
115
Efek hepatoprotektif jangka pendek ekstrak metanol biji persea americana mill. terhadap tikus terinduksi karbon tetraklorida.
0
12
130
Efek nefroprotektif pemberian jangka panjang ekstrak metanol-air biji persea americana mill. terhadap kadar kreatinin dan gambaran histologis ginjal pada tikus terinduksi karbon tetraklorida.
0
13
122
Efek nefroprotektif pemberian jangka panjang infusa biji persea americana mill. terhadap kadar kreatinin dan gambaran histologi ginjal tikus terinduksi karbon tetraklorida.
0
1
8
Efek hepatoprotektif jangka pendek ekstrak etanol 70% biji atung (Parinarium glaberimum Hassk.) pada tikus jantan galur wistar terinduksi karbon tetraklorida
0
0
47
Efek nefroprotektif jangka pendek ekstrak metanol air biji persea americana mill. terhadap kadar kreatinin dan gambaran histologis ginjal tikus jantan wistar terinduksi karbon tetraklorida
2
13
119
Efek nefroprotektif pemberian jangka panjang ekstrak metanol-air biji persea americana mill. terhadap kadar kreatinin dan gambaran histologis ginjal pada tikus terinduksi karbon tetraklorida - USD Repository
0
0
120
Efek hepatoprotektif jangka pendek ekstrak metanol-air daun macaranga tanarius L. terhadap tikus terinduksi karbon tetraklorida - USD Repository
0
0
104
Efek hepatoprotektif ekstrak etanol-air daun Macaranga tanarius L. pada tikus terinduksi karbon tetraklorida : kajian terhadap praperlakuan jangka pendek - USD Repository
0
0
109
Efek nefroprotektif pemberian jangka panjang ekstrak etanol biji persea americana mill. terhadap kadar kreatinin dan gambaran histologis ginjal pada tikus terinduksi karbon tetraklorida - USD Repository
0
0
115
Pengaruh waktu protektif pemberian infusa biji persea americana mill. secara akut terhadap kadar kreatinin dan gambaran histologis ginjal tikus terinduksi karbon tetraklorida - USD Repository
0
0
5
Show more