Penetapan kadar guaifenesin yang tercampur dengan salbutamol sulfat dalam sediaan sirup merek ``x`` menggunakan kromatografi cair kinerja tinggi fase terbalik - USD Repository

Gratis

0
1
130
7 months ago
Preview
Full text
(1)PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI PENETAPAN KAD ADARGUAIFENESIN YANG TERCAMPU PUR DENGAN SALBUTAMOL OL SULFAT DALAM SEDIAAN SIRUP ME MEREK “X” MENGGUNAK AKAN KROMATOGRAFI CAIR KINERJA JA TINGGI FASE TERBALIK SKRIPSI Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat Dia Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.) Me Program Studi Farmasi Oleh: Priscilla Novelia Sari NIM : 108114016 FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS SANATA DHARMA U YOGYAKARTA 2014 i

(2) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI PENETAPAN KAD ADAR GUAIFENESIN YANG TERCAMPU PUR DENGAN SALBUTAMOL OL SULFAT DALAM SEDIAAN SIRUP ME MEREK “X” MENGGUNAK AKAN KROMATOGRAFI CAIR KINERJA JA TINGGI FASE TERBALIK SKRIPSI Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat Dia Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.) Me Program Studi Farmasi Oleh: Priscilla Novelia Sari NIM : 108114016 FAKULTAS FARMASI U UNIVERSITAS SANATA DHARMA YOGYAKARTA 2014 ii

(3) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI iii

(4) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI PENGESATIAN SKRIPSI BERJUDUL PENETAPAN KADAR GUAIFENESIN YANG TERCAMPUR DENGAN SALBUTAMOL SULFAT DALAM SEDIAAN SIRUP MEREK "X" MENGGUNAKAN KROMATOGRAFI CAIR KINERJA TINGGI FASE TERBALIK Oleh: Priscilla Novelia Sari NIM : 108114016 Dipertahankan di hadapan panitia penguji skripsi Fakultas Farmast Universitas Sanata Dharma Pada tanggal: 4Agustus 2014 Mengetahui akultas Famasi 4?E'ffi;k {dh ( anata Dharma kan t',g;*trs} (Aris Wida Panitia Penguji Skripsi 1. Prof. Dr. Sudibyo Martono, M.S., Apt. 2. Jeffry Julianus, M.Si. 3. Florentinus Dika Octa Riswanto, M.Sc. IV .Si., Ph.D., Apt.)

(5) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI PERSEMBAHAN Bagi Dialah, yang dapat melakukan jauh lebih banyak dari pada yang kita doakan atau pikirkan, seperti yang ternyata dari kuasa yang bekerja didalam kita Efesus 3 : 20 “The sooner you step away from your comfort zone, The sooner You’ll realize that it really wasn’t all that comfortable.” Eddie Harris Jr. v

(6) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI vi

(7) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI vii

(8) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI PRAKATA Puji syukur penulis hanturkan kepada Tuhan atas segala kasih karunia yang telah diberikan sehingga skripsi berjudul “Penetapan Kadar Guaifenesin yang Tercampur dengan Salbutamol Sulfat dalam Sediaan sirup Merek “X” Menggunakan Kromatografi Cair Kinerja Tinggi Fase Terbalik” yang disusun untuk kepentingan memenuhi persyaratan dalam memperoleh gelar Sarjana Strata Satu Program Studi Farmasi (S. Farm.) dapat diselesaikan dengan baik. Penulis menyadari bahwa dalam penulisan skripsi ini banyak berbagai pihakpihak yang telah memberikan kontribusi. Oleh karena itu, pada kesempatan ini penulis mengucapkan terimakasih kepada: 1. Dekan Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma yang telah mengijinkan penulis menjalankan pembelajaran selama masa studi. 2. Prof. Dr. Sudibyo Martono, M.S., Apt. selaku Dosen Pembimbing Skripsi yang telah membimbing, selalu mendampingi, dan memberikan saran selama penyusunan skripsi. 3. Jeffry Julianus, M.Si. selaku Dosen Penguji yang telah memberikan kritik dan saran selama penyusunan skripsi. 4. Florentinus Dika Octa Riswanto, M.Sc. selaku Dosen Penguji yang telah memberikan kritik dan saran selama penyusunan skripsi. 5. Dr. Sri Yuliani, M.Si., Apt.selaku Kepala Penanggungjawab Laboratorium Fakultas Farmasi yang telah memberikan ijin dalam penggunaan fasilitas laboratorium untuk kepentingan penelitian ini. viii

(9) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 6. Phebe Hendra M.Si., Apt., Ph.D. selaku dosen pendamping akademik yang telah membimbing penulis selama studi di Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma. 7. Seluruh Dosen Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma atas ilmu, nasihat, dan bimbingan yang telah diberikan. 8. Laboran laboratorium Fakultas Farmasi yang telah membantu penulis dalam proses pelaksanaan penelitian di laboratorium. 9. Mamaku tersayang yang selalu memberikan doa, perhatian dan motivasi dalam studi dan penyusunan skripsi. 10. Teman-teman skripsi yang berjuang bersama penulis Agustinus Hendy Larsen dan Aries Mulyawanatas doa, kerjasama, bantuan, kesabaran, dan semangat dalam penyusunan skripsi. 11. Kenny Ricardo atas masukan ilmu, dan waktu yang telah diberikan saat penelitian dalam penyusunan skripsi 12. Sahabat sekaligus keluarga Juliana, Olivia Christie, Daniel Pradipta, Enggar Nugraheni P., Priscilla Diana Vivi Vionita, Angelia Rosari, Christian Gunawan, Gabriela Indri, Brigitta Rosalia, dan Raisa Ruga atas doa, kebersamaan dalam suka dan duka, motivasi, nasihat dan semangat yang diberikan. 13. Teman-teman sekelas FST A 2010 dan seluruh angkatan Farmasi 2010 atas setiap cerita kebersamaan yang telah terjadi. ix

(10) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 14. Semua pihak yang tidak dapat penulis sebutkan satu persatu atas kontribusinya sehingga penulis dapat menyelesaikan studi dan skripsi dengan baik. x

(11) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI DAFTAR ISI HALAMAN SAMPUL ............................................................................................ i HALAMAN JUDUL .............................................................................................. ii HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING ................................................... iii HALAMAN PENGESAHAN................................................................................ iv HALAMAN PERSEMBAHAN ..............................................................................v HALAMAN PERNYATAAN KEASLIAN KARYA ........................................... vi LEMBAR PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI KARYA ILMIAH UNTUK KEPENTINGAN AKADEMIS ............................................................. vii PRAKATA........................................................................................................... viii DAFTAR ISI ......................................................................................................... xi DAFTAR TABEL..................................................................................................xv DAFTAR GAMBAR .......................................................................................... xvi DAFTAR LAMPIRAN...................................................................................... xviii INTISARI...............................................................................................................xx ABSTRACT........................................................................................................... xxi BAB I PENDAHULUAN .......................................................................................1 A. Latar Belakang ..................................................................................................... 1 1. Perumusan Masalah ...................................................................................... 3 2. Keaslian Penelitian ....................................................................................... 3 3. Manfaat Penelitian ........................................................................... ............4 B. Tujuan Penelitian ................................................................................................ 4 xi

(12) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI BAB II PENELAAHAN PUSTAKA......................................................................5 A. Batuk ..................................................................................................................... 5 B. Asma .................................................................................................................... 5 C. Sirup ..................................................................................................................... 6 D. Salbutamol Sulfat .........................................................................................7 E. Guaifenesin ..................................................................................................9 F. Spektrofotometer UV-Vis ..........................................................................10 G. Penyiapan Sampel ......................................................................................13 H. Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT) ................................................. 14 1. Definisi dan Instrumentasi ......................................................................... 14 a. Wadah Fase Gerak dan Fase Gerak ................................................... 15 b. Pompa.............................................................................................16 c. Tempat Penyuntikan Sampel..........................................................16 d. Kolom.............................................................................................17 e. Fase Diam ......................................................................................19 f. Detektor .........................................................................................20 2. Analisis Kualitatif dan Kuantitatif............................................................ 21 I. Larutan Bufer ..................................................................................................... 22 J. Landasan Teori .................................................................................................. 22 K. Hipotesis.....................................................................................................23 BAB III METODOLOGI PENELITIAN...............................................................24 A. Jenis dan Rancangan Penelitian .................................................................24 B. Variabel Penelitian ....................................................................................24 C. Definisi Operasional ..................................................................................24 D. Bahan Penelitian.........................................................................................25 E. Alat Penelitian ...........................................................................................25 F. Tata Cara Penelitian ..................................................................................26 1. Pembuatan Asam Fosfat 0,1 M ................................................................. 26 2. Pembuatan Bufer Kalium Dihidrogen Fosfat 0,01 M ..........................26 xii

(13) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 3. Pembuatan Fase Gerak.........................................................................26 4. Pembuatan Larutan Baku Salbutamol Sulfat dan Guaifenesin untuk Penentuan Panjang Gelombang............................................................27 a. Pembuatan Larutan Baku Salbutamol Sulfat ............................. 27 b. Pembuatan Larutan BakuGuaifenesin......................................27 5. Penetapan λ Maksimum Salbutamol Sulfat dan Guaifenesin Menggunakan Spektrofotometer UV-Vis ................................................ 27 6. Pembuatan Larutan Baku Salbutamol Sulfat .......................................28 a. Pembuatan Larutan Stok Salbutamol Sulfat .............................. 28 b. Pembuatan Larutan Intermediet Salbutamol Sulfat .................28 7. Pembuatan Larutan Baku Guaifenesin.................................................28 8. Pembuatan Seri Larutan Baku Campuran Salbutamol Sulfat dan Guaifenesin ..........................................................................................28 9. Pengujian Stabilitas Baku Pembanding ...............................................29 10. Pembuatan Kurva Baku Salbutamol Sulfat dan Guaifenesin...............29 11. Pengambilan Sampel............................................................................30 12. Keseragaman Volume ..........................................................................30 13. Preparasi Sampel..................................................................................30 a. Pembuatan Larutan Stok Sampel .............................................30 b. Pembuatan Larutan Sampel......................................................31 14. Penetapan Kadar Sampel......................................................................31 G. Analisis Hasil .................................................................................................... 31 BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN .................................................................... 33 A. Pembuatan Fase Gerak ..................................................................................... 33 B. Penentuan Panjang Gelombang (λ) Maksimum Salbutamol Sulfat dan Guaifenesin ........................................................................................................ 34 C. Pengukuran Stabilitas Baku Pembanding ...................................................... 37 D. Pembuatan Kurva Baku Guaifenesin .............................................................. 39 E. Pengambilan Sampel......................................................................................... 40 F. Analisis Kualitatif ................................................................................................ 42 xiii

(14) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI G. Analisis Kuantitatif .............................................................................................. 47 BAB V KESIMPULAN DAN SARAN ...................................................................... 49 A. Kesimpulan ........................................................................................................ 48 B. Saran .................................................................................................................... 48 DAFTAR PUSTAKA ...........................................................................................50 LAMPIRAN...........................................................................................................52 BIOGRAFI PENULIS .........................................................................................109 xiv

(15) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI DAFTAR TABEL Tabel 1Hasil Pengukuran Stabilitas Baku Pembanding Guaifenesin ...................... 38 Tabel 2. Hasil Pengukuran Stabilitas Baku PembandingSalbutamol Sulfat .......... 38 Tabel 3. Hasil Pengukuran Persamaan Kurva Baku Guaifenesin ............................ 39 Tabel 4. Data Keseragaman Volum Sampel Sirup merek “X” ................................ 41 Tabel 5. Data Waktu Retensi Baku Salbutamol Sulfat, Baku Guaifenesin danSampel ........................................................................................................ 44 Tabel 6. Hasil Pengukuran Kadar Sampel Sirup Merek “X” ................................... 47 xv

(16) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI DAFTAR GAMBAR Gambar 1. Struktur Salbutamol Sulfat .......................................................................... 7 Gambar 2. Struktur Guaifenesin ..................................................................................... 9 Gambar 3. Diagram Skematik Alat Spektrofotometer ............................................. 10 Gambar 4 . Monokromator............................................................................................ 11 Gambar 5 . Spektrum Elektromagnetik ....................................................................... 13 Gambar 6. Diagram Skematik Alat KCKT ................................................................ 15 Gambar 7. Diagram Kolom KCKT .............................................................................. 17 Gambar 8. Pemisahan Sampel ...................................................................................... 18 Gambar 9. Interaksi Silika dengan Fase Diam ........................................................... 19 Gambar 10. Gugus Kromofor dan Auksokrom Salbutamol Sulfat .......................... 34 Gambar 11. Gugus Kromofor dan Auksokrom Guaifenesin .................................... 35 Gambar 12. Spektra Salbutamol Sulfat pada 3 Seri Konsentrasi dalam Pelarut Metanol................................................................................................35 Gambar 13. Spektra Guaifenesin pada 3 Seri Konsentrasi dalam Pelarut Metanol...............................................................................................36 Gambar 14. Spektra Overlapping Salbutamol Sulfat dan Guaifenesin dalam Pelarut Metanol ...................................................................................36 Gambar 15. Kurva Baku Guaifenesin .......................................................................... 40 Gambar 16. Kromatogram Baku Salbutamol Sulfat Konsentrasi 1,2 µg/mL ........ 42 Gambar 17. Kromatogram Baku Guaifenesin Konsentrasi 54,0 µg/mL................. 43 Gambar 18. Kromatogram Sampel .............................................................................. 44 xvi

(17) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI Gambar 19. Interaksi Salbutamol Sulfat dengan Fase Diam .................................... 44 Gambar 20. Interaksi Guaifenesin dengan Fase Diam .............................................. 45 Gambar 21. Interaksi Salbutamol Sulfat dengan Fase Gerak ................................... 45 Gambar 22. Interaksi Guaifenesin dengan Fase Gerak ............................................. 46 xvii

(18) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI DAFTAR LAMPIRAN Lampiran 1. Certificate of Analysis (CoA) Baku Salbutamol Sulfat ...................... 53 Lampiran 2. Certificate of Analysis (CoA) Guaifenesin ........................................... 55 Lampiran 3. Spektra Panjang Gelombang Pengamatan ............................................ 58 Lampiran 4. Kromatogram Stabilitas Baku Pembanding Salbutamol Sulfat 5 Maret 2014 ...................................................................................................... 61 Lampiran 5. Kromatogram Stabilitas Baku Pembannding Salbutamol Sulfat 6 Maret 2014 ...................................................................................................... 64 Lampiran 6. Kromatogram Stabilitas Baku Pembanding Salbutamol Sulfat 7 Maret 2014 ...................................................................................................... 67 Lampiran 7. Kromatogram Stabilitas Baku Pembanding Guaifenesin 6 Maret 2014 ...................................................................................................... 70 Lampiran 8. Kromatogram Stabilitas Baku Pembanding Guaifenesin 7 Maret 2014 ..................................................................................................... 73 Lampiran 9. Kromatogram Stabilitas Baku Pembanding Guaifenesin 8 Maret 2014 ...................................................................................................... 76 Lampiran 10. Data Penimbangan Baku Guaifenesin ................................................. 78 Lampiran 11. Kromatogram Seri Larutan Baku Guaifnesin Replikasi 1................ 79 Lampiran 12. Kromatogram Seri Larutan Baku Guaifenesin Replikasi 2 .............. 84 Lampiran 13. Kromatogram Seri Larutan Baku Guaifnesin Replikasi 3 ................ 89 Lampiran 14. Perhitungan Kadar Teoritis Larutan Baku Guaifenesin .................... 94 xviii

(19) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI Lampiran 15. Kurva Baku Guaifenesin ....................................................................... 96 Lampiran 16. Data Persamaan Kurva Baku Guaifenesin.......................................... 96 Lampiran 17. Data Pengukuran Berat Jenis Sampel ................................................. 98 Lampiran 18. Data Hasil Keseragaman Volume........................................................ 99 Lampiran 19. Data Perhitungan Keseragaman Volume ............................................ 99 Lampiran 20. Kromatogram Sampel Replikasi 1 ..................................................... 100 Lampiran 21. Kromatogram Sampel Replikasi 2 ..................................................... 101 Lampiran 22. Kromatogram Sampel Replikasi 3 ..................................................... 102 Lampiran 23. Kromatogram Sampel Replikasi 4 ..................................................... 103 Lampiran 24. Kromatogram Sampel Replikasi 5 ..................................................... 104 Lampiran 25. Kromatogram Sampel Replikasi 6 ..................................................... 105 Lampiran 26. Perhitungan Kadar Sampel dengan Persamaan Kurva Baku ......... 106 Lampiran 27. Data Perhitungan Penetapan Kadar ................................................... 106 Lampiran 28. Perhitungan RSD Guaifenesin dalam Sampel ................................. 107 Lampiran 29. Perhitungan Rentang Guaifenesin ..................................................... 108 xix

(20) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI INTISARI Batuk kronik merupakan jenis batuk yang terjadi dengan disertai asma. Angka kejadiantimbulnya asma pada batuk kronik sekitar 24 – 29%. Sediaan sirup merek “X” adalah salah satu obat untuk terapi batukdisertai asma yang mengandung kombinasi salbutamol sulfat dan guaifenesin. Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui kesesuaian kadar salbutaol sulfat dan guaifenesin yang terukur dengan kadar yang tertera pada etiket dalam rangka penjaminan mutu suatu produk obat. Penelitian bersifat non eksperimental deskriptif karena tidak dilakukan manipulasi dan perlakuan terhadap subjek uji. Penetapan kadar guaifenesin yang tercampur dengan salbutamol sulfat dalam sediaan sirup merek “X”dilakukan menggunakan metode Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT) fase terbalik. Fase diam yang digunakan adalah C18dimensi 250 x 4,6 mm, 5µm Shimadzu column Shimpack dan fase gerak yang digunakan adalah campuran metanol : 0,01 M bufer kalium dihidrogen fosfat pH 3,0 (40:60) dengan kecepatan alir 1,0 mL/menit. Hasil pengujian stabilitas baku pembanding salbutamol sulfat memiliki % perbedaan ≥ 2% (tidak stabil) dan pengujian stabilitas baku pembanding guaifenesin memiliki % perbedaan ≤2% (stabil), sehingga penetapan kadar hanya dilakukan untuk guaifenesin. Kadarguaifenesin yang tertera pada etiket adalah50 mg/5mL (1 %b/v) dengan rentang keberterimaan 90-110% (45-55mg/5mL) dan kadar terukur yang diperoleh adalah 48,44 mg/5mL dengan RSD 0,70%. Kadar Guaifenesin yang terukur sesuai dengan kadar guaifensin yang tertera pada label. Kata Kunci : salbutamol sulfat, guaifenesin, sirup ekpektoran merek “X”, KCKT, penetapan kadar xx

(21) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI ABSTRACT Chronic cough is one kind of cough occuring accompanied with asthma. The number of the occurance of asthma in chronic cough is about 24 – 29%. The preparation of syrup brand “X” is one kind of medicine for cough with asthma therapy which contains a combination of salbutamol sulfate and guaiphenesin. The objective of this research is to find out the suitability of the content of salbutamol sulfate and guaifenesinmeasuredwiththe contentindicated onthe labelin order toguaranteethe quality of adrugproduct. The research is non-experimental descriptive because it does not do the manipulation and treatment toward the test subjects. The assay of guaifenesin mixed with salbutamol sulphate in the solution dosage form merk “X” is done using a method of reversed phase High PerformanceLiquid Chromatography (HPLC). Stationary phase used is C18dimension 250 x 4.6 mm, 5µm Shimadzu column Shimpack and mobile phase used is a mixed methanol: 0.01 M potassiumdihydrogenphosphatebufferpH3.0(40:60)with the flow speed 1.0 mL/minute. The result of stability test for working standard of salbutamo sulfate have % of difference ≥ 2 % (unstable) and stability test for working standard of guaiphenesin have % of difference ≤2 % (stable), with the result that the assay do for guaiphenesin only. The content of guaifenesin printed on the label is 50 mg/5mL (1 %b/v)with the range of acceptance is 90-110 % (45-55 mg/5mL) and the content measuredis 48.44 mg/5mL with RSD 0.70%. The content of guaifenesin measured is appropriate with the content of guaifenesin printed on the label. Keywords : salbutamolsulfate, guaifenesin, an expectorantsyrupbrand “X”, HPLC, assay xxi

(22) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI BAB I PENDAHULUAN A. Latar Belakang Batuk adalah salah satu respon tubuh yang terjadi apabila terdapat iritan yang masuk dalam tenggorokan dan saluran pernafasan (Djunarko dan Hendrawati, 2011). Pada batuk kronik sering disertai timbulnya asma, angka kejadian timbulnya asma pada batuk kronik sekitar 24 – 29% (Dicpinigaitis, Peter V., 2014).Asma adalah gangguan inflamasi kronik pada saluran pernafasan. Asma termasuk lima besar penyakit penyebab kematian di dunia yang bervariasi antara 5-30% (Oemiati dkk., 2010).Batuk yang disertai asma terjadi karena pengentalan lendir pada lapisan epitel di saluran pernafasan, sehingga jalannya udara terhambat (Dicpinigaitis, Peter V., 2014). Penggunaan ekspektoran dan antiasma merupakan penanganan pilihan untuk terapi batuk disertai asma, karena pemberian ekspektoran membantu mengencerkan dahak sehingga mudah dikeluarkan dan penggunaan antiasma dapat meningkatkan bronkoselektivitas. Sediaan sirup merek “X” adalah salah satu obat untuk terapi batukdisertai asma yang mengandung kombinasi salbutamol sulfat dan guaifenesin. Salbutamol sulfat adalah agonis β2 yang merupakan bronkodilator. Mekanisme kerja agonis β2 adalah menstimulasi reseptor β2-adregenik untuk mengaktifkan adenil siklase, sehingga AMP (asam 3,5 adenilat) siklik intrasel meningkat dan menyebabkan relaksasi otot polos pada saluran pernafasan (Jyothi dkk., 2012). Guaifenesin adalah ekspektoran yang bekerja dengan merangsang batuk sehingga dahak dapat 1

(23) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 2 dikeluarkan (Djunarko dan Hendrawati, 2011). Untuk menjamin keamanan dan efektivitas sediaan sirup sebagai obat batuk ekspektoran yang frekuensi penggunaannya dalam terapi cukup sering, perlu dilakukan penetapan kadar salbutamol sulfat dan guaifenesin yang merupakan zat aktif dari sediaan sirup tersebut dengan metode analisis yang valid. Penelitian mengenai salbutamol sulfat dan guaifenesin sudah pernah dilakukan oleh Walode dkk. (2013) dalam pengembangan dan validasi metode kromatografi cair kinerja tinggi(KCKT) untuk salbutamol sulfat dan guaifenesin dalam sediaan sirup. Metode yang digunakan adalah kromatografi cair kinerja tinggi (KCKT) sistem fase terbalik dengan fase diam C18 dan fase gerak asetonitril : 0,05M bufer fosfat pH 3,0 dengan triethylamine 0,1 % (36:64) pada kecepatan alir 0,8 mL/menit dan panjang gelombang 225 nm dengan kondisi suhu konstan 18oC. Pada penelitian tersebut dihasilkan pemisahan yang baik antara salbutamol sulfat dan guaifenesin. Penelitian yang akan dilakukan adalah menetapkan kadar guaifenesin yang tercanpur dengan salbutamol sulfat dalam sediaan sirup merek “X” menggunakan metode kromatografi cair kinerja tinggi (KCKT) fase terbalik. Metode tersebut dipilih untuk analisisguaifenesin dan salbutamol sulfat, karena metode ini merupakan metode yang selektif dan memberikan hasil yang baik dalam memisahkan senyawa-senyawa multikomponen. KCKT yang digunakan merupakan sistem fase terbalik karena fase diam C18 yang digunakan bersifat non polar dan fase gerak campuran metanol : 0,01 M bufer kalium dihidrogen fosfat pH 3,0 (40:60)yang digunakan bersifat polar dengan kecepatan alir 1,0 mL/menit

(24) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 3 hasil optimasi dan telah divalidasi. Analisis guaifenesin dan salbutamol sulfat dilakukan untuk menjamin keamanan dan efektivitas dari sediaan sirup merek“X” dengan melihat kesesuaian kadar yang terukur dengan kadar yang tertera pada etiket. 1. Perumusan Masalah Berdasarkan latar belakang di atas, maka dapat disusun permasalahan sebagai berikut: a. Berapakah kadarguaifenesin yang tercampur dengan salbutamol sulfat dalam sediaan sirup merek “X” ? b. Apakah kadarguaifenesin yang terukur dengan metode kromatografi cair kinerja tinggi fase terbalik sesuai dengan guaifenesin yang tertera pada kemasan sediaan sirup merek “X” ? 2. Keaslian Penelitian Berdasarkan penelusuran literatur yang telah dilakukan, telah diperoleh jurnal berjudul “Stability Indicating RP-HPLC Method For Simultaneous Estimation Of Salbutamol Sulphate and Guaifenesin” oleh Walode dkk. (2013). Metode kuantifikasi salbutamol sulfat dan guaifenesin ini menggunakan metode KCKT. Pada penelitian tersebut digunakan fase gerak campuran asetonitril : 0,05M bufer fosfat pH 3,0 dengan 0,1 % triethylamine (36:64 v/v) dan laju alir fase gerak 0,8 mL/menit dengan panjang gelombang 225 nm dalam kondisi suhu konstan 180C.

(25) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 4 3. Manfaat Penelitian a. Manfaat Metodologis Hasil penelitian ini diharapkan dapat memberikan sumbangan ilmiah berupa metode analisis guaifenesin dan salbutamol sulfatpada sediaan sirup menggunakan kromatografi cair kinerja tinggi fase terbalik. b. Manfaat Praktis Hasil penelitan diharapkan dapat menambah informasi mengenai kadar guaifenesin yang tercampur dengan salbutamol sulfat dalam sediaan sirup menggunakan metode kromatografi cair kinerja tinggi fase terbalik. B. Tujuan Penelitian Tujuan penelitian ini adalah untuk: a. Mengetahui kadar guaifenesin yang tercampur dengan salbutamol sulfat dalam sediaan sirupmerek “X” menggunakan metode kromatografi cair kinerja tinggi fase terbalik. b. Mengetahui kesesuaian antara kadar terukur guaifenesin dengan kadar guaifenesin yang tertera pada kemasan sediaan sirup merek “X”.

(26) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI BAB II PENELAAH PUSTAKA A. Batuk Batuk adalah mekanisme tubuh dalam mengeluarkan benda asing yang ada dalam saluran pernafasan bagian atas. Batuk yang biasanya disebabkan oleh adanya alergi dan pengeluran lendir disebut batuk berdahak, sementara batuk yang disebabkan oleh adanya benda asing yang mengiritasi tenggorokan disebut batuk kering (Puspitasari, 2010). Pengobatan untuk setiap jenis batuk berbeda. Obat untuk batuk berdahak adalah ekspektoran yang merupakan pengencer dahak sehingga dahak dapat dengan mudah dikeluarkan. Obat untuk batuk kering adalah antitusif yang menekan rangsang batuk sehingga frekuensi batuk berkurang (Puspitasari, 2010). B. Asma Asma merupakan gangguan inflamasi pada saluran jalannya udara yang melibatkan banyak sel dan komponennya. Serangan asma bersifat mendadak dan disebabkan oleh faktor yang tidak diketahui atau yang diketahui seperti paparan alergen, virus, atau polutan. Keparahan penyakit asma ditentukan oleh fungsi paru. Pada individu yang rentan terhadap inflamasi dapat menyebabkan episode berulang dari bengek, sesak nafas, sempit dada, dan batuk. Proses inflamasi yang terjadi adalah degradasi dari sel mast akibat respon dari alergen, dan 5

(27) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 6 mengakibatkan pembebasan mediator inflamasi seperti histamin, faktor kemotaksis eosinofil dan neutrofil, prostaglandin, dan faktor pengaktivasi platelet (PAF). Mediator inflamasi akan menginduksi konstriksi otot polos dan bronkospasme dan berperan dalam edema mukosa dengan meningkatkan produksi mukus yang viskositasnya cenderung tinggi sehingga menghambat jalannya udara yang tersusun oleh syaraf parasimpatik, simpatik, dan syaraf inhibisi nonadergenik. Otot polos pada jalan udara dipelihara oleh aktivitas eferen vagal dengan memperantarai brokokonstriksi. Otot polos pada jalan udara mengandung reseptor β-adregernik yang menyebabkan bronkodilatasi (Sukandar dkk., 2009). C. Sirup Menurut Farmakope Indonesia edisi III, sediaan sirup merupakan sediaan cair yang berupa larutan yang mengandung sakarosa, kecuali dinyatakan lain, kadar sakarosa, C12H22O11, tidak kurang dari 64,0% dan tidak lebih dari 66,0% (Dirjen POM RI, 1979). Rasa manis dari sakarosa dalam sirup dapat menutupi rasa tidak enak dari obat, sehingga sirup sangat efektif untuk sistem penghantaran obat bagi anak-anak. Sakarosa merupakan gula yang banyak digunakan pada sirup, tetapi pada beberapa kasus dapat digantikan dengan pemanis lainnya yang bukan gula seperti sorbitol, gliserin, dan propilen glikol (Ansel dan Popovich, 1990).

(28) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 7 D. Salbutamol Sulfat Gambar copeia, 2009). ar 1. Struktur Salbutamol Sulfat (British Pharmacop Salbutamol etil]-4-hidroksi-mol su sulfat atau garam α‫ ׳‬-[(tert-butilamino)metil xilena-α,α‫ ׳‬-diol sulfat fat memiliki rumus molekul (C13H21NO3)2.H2SO4 dengan berat molekul576,70 g/mol kurang dari 98,5% ol. Salbutamol sulfat mengandung tidak kura dan tidak lebih darii 101, hadap zat anhidrat. 101,0% (C13H21NO3)2.H2SO4 dihitung terhada Pemerian salbutamol ol sulfat merupakan serbuk putih atauu hampir putih, kelarutannya mudahh larut dalam air, sukar larut dalam etanol,, da dalam kloroform dan dalam eter (Dirje lam suasana asam irjen POM RI, 1995).Salbutamol sulfat dalam memiliki λ maksimum um 276nm dengan nilai lam suasana basa = 71a dan dalam memiliki λ maksimum um 245nm dengan nilai = 510a. Nilai log P salbutamol sulfat (oktanol/air) = 0,6 serta nilai pKa 9,3 dan 10,3 (Moffat dkk., 2011 2011). Salbutamol onkodilator paling ol sul sulfat merupakan agonis β2 yang adalah bronkodi kuat yang bekerja ppada reseptor β2-adregenik. Salbutamol sul sulfat (albuterol) merupakan agonis β2 aksi pendek yang digunakan jika terjadi di ggejala (Sukandar dkk., 2009). gan mengunakan mengenai analisis salbutamol sulfat denga Penelitiann m beberapa peneliti. Kinerja Tinggi (KCKT) dilakukan oleh be Kromatografi Cair K

(29) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 8 Martis dan Gangrade (2011) melakukan analisis salbutamol sulfat dan beklometason dipropionat dalam formulasi sediaan Rotacapsdengan metode Kromatografi Cair Kinerja Tinggi fase terbalik dengan deteksi pada panjang gelombang 230nm menggunakan fase diam C18 dan fas gerak air : asetonitril (40:60). Muraldhiran dan Kumar (2012) pengembangan metode dan validasi untuk salbutamol dengan KCKT fase terbalik dengan deteksi pada panjang gelombang 276nm menggunakan fase diam C18 dan fase gerak asetonitril : 50mm amonium asetat pH 7,0 (80:20) dengan kecepatan alir 1,0 mL/min. Jyothi, VenuGopal, dan Rao (2012) pengembangan dan validasi metode KCKT untuk analisis salbutamol sulfat dan ipratropium bromida dalam sediaan inhalasi yang menggunakan fase diam C18 dan fase gerak 0,05 M buffer fosfat pH 3,5 : metanol (40:60) dengan deteksi pada panjang gelombang 226 nm dan kecepatan alir 0,6 mL/min. Walode, Deshpande dan Deshpande (2013) melakukan analisis salbutamol sulfat dan guaifenesin dengan metode KCKT fase terbalik menggunakan fase diam C18 dan fase gerak campuran asetonitril : 0,05M bufer fosfat pH 3,0 dengan 0,1 % triethylamine (36:64 v/v) dan laju alir fase gerak 0,8 mL/menit dengan deteksi pada panjang gelombang 225 nm dalam kondisi suhu konstan 180C.

(30) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 9 E. Guaifenesin Gambar 2. Struktur Guaifenesin (British Pharmacopeia, 2009). Guaifenesin atau3-(o-Metoksifenoksi)-1,2-propanadiol memiliki rumus molekul C10H14O4 dengan bobot molekul 198,22 g/mol. Guaifenesin mengandung tidak kurang dari 98,0% dan tidak lebih dari 102,0% C10H14O4, dihitung terhadap zat yang telah dikeringkan. Pemerian guaifenesin adalah serbuk hablur, putih sampai agak kelabu, bau khas lemah dan rasa pahit, kelarutanya dalam air, dalam etanol, dalam kloroform, dan dalam propilen glikol, agak sukar larut dalam gliserin (Dirjen POM RI, 1995).Guaifenesin memiliki bobot molekul 198,2; titik lebur 78-82oC; nilai log P (oktanol/air)= 1,4; dalam suasana asam memiliki λ maksimum 273 nm dengan nilai Mekanisme kerja =125a (Moffat dkk., 2011). guaifenesin adalah sebagai ekspektoran yang menstimulasi reseptor yang mengatur sekresi cairan pada saluran pernafasan (Walode dkk., 2013). Penelitian mengenai analisis guaifenesin dengan mengunakan Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT) dilakukan oleh beberapa peneliti. Korany, Fahmy, Mahgoub, dan Maher (2011) melakukan analisis guaifenesin dalam kombinasi obat batuk dan demam dengan metode KCKT menggunakan fase diam C18 dan fase gerak metanol : 0,01M bufer fosfat dalam tiga

(31) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 10 perbandingan pada pH 3,2, 6,2, dan 3,8. Walode, Deshpande dan Deshpande (2013) melakukan analisis salbutamol sulfat dan guaifenesin dengan metode KCKT fase terbalik menggunakan fase diam C18 dan fase gerak campuran asetonitril : 0,05M bufer fosfat pH 3,0 dengan 0,1 % trietilamin (36:64 v/v) dan laju alir fase gerak 0,8 mL/menit dengan deteksi pada panjang gelombang 225 nm dalam kondisi suhu konstan 180C. F. Spektrofotometri UV-Vis Instumentasi yang digunakan untuk mempelajari serapan atau emisi radiasi elektromagnetik “spektrometer” atau sebagai fungsi spektrofotometer. panjang gelombang disebut Komponen-komponen pokok spektrofotometer meliputi sumber tenaga radiasi yang stabil, sistem yang terdiri atas lensa-lensa, cermin, dan celah-celah, monokromator untuk mengubah radiasi menjadi komponen-komponen panjang gelombang tunggal; tempat cuplikan yang transparan; dan detektor radiasi yang dihubungkan dengan pencatat (Sastrohamidjojo, 2001). Gambar 3. Diagram Skematik Alat Spektrofotometer (Gandjar dan Rohman, 2007)

(32) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 11 Sumber energi pada spektrofotometer harus dapat memberikan intensitas radiasi elektromagnetik secara stabil pada daerah spektrum elektromagnetik. Sumber energi dibagi menjadi dua yaitu sumber energi continuum dan sumber energi line. Sumber energi continuum merupakan sumber energi yang memancarkan lebih dari satu panjang gelombang dengan intensitas bervariasi dari masing-masing panjang gelombang. Pada sumber energi line merupakan sumber energi yang memancarkan satu panjang gelombang yang selektif. Pada spektrofotometer UV-Vis menggunakan sumber energi continuum, sehingga membutuhkan monokromator sebagai selektor filter untuk membatasi jumlah panjang gelombang radiasi elektromagnetik yang akan masuk (Harvey, 2000). Gambar 4 . Monokromator (Harvey, 2000)

(33) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 12 Panjang gelombang radiasi yang masuk melalui monokromator akan melewati sampel. Pada saat panjang gelombang radiasi melewati sampel akan terjadi pengurangan sejumlah radiasi, sehingga panjang gelombang radiasi yang keluar dan ditangkap oleh detektor akan lebih kecil dari panjang gelombang radiasi yang masuk. Banyaknya jumlah radiasi yang berkurang berbanding lurus dengan konsentrasi analit dalam sampel (Harvey, 2000). Serapan sinar UV dan sinar tampak (visibel) pada umumnya mengakibatkan eksitasi elektron-elektron, akibatnya panjang gelombang pita yang terserap dapat dihubungkan dengan elektron yang mungkin ada dalam suatu molekul (Gandjar dan Rohman, 2007). Serapan cahaya oleh molekul pada daerah spektrum ultraviolet dan sinar tampak tergantung pada struktur elektronik molekul. Spektrum ultraviolet dan sinar tampak senyawa-senyawa organik berkaitan erat dengan transisi-transisi diantara tingaktan-tingkatan energi elektronik, karena hal ini serapan radiasi ultraviolet/terlihat sering dikenal sebagai spektroskopi elektronik. Panjang gelombang serapan merupakan ukuran pemisahan tingkatan-tingkatan tenaga orbital-orbital yang bersangkutan. Energi yang paling tinggi diperoleh bila elektron-elektron dalam ikatan σ tereksitasi yang menimbulkan serapan dalam daerah dari 120 hingga 200 nm. Daerah ini dikenal sebagai daerah ultraviolet vakum dan relatif tidak banyak memberikan keterangan (Sastrohamidjojo, 2001).

(34) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 13 Gambar 5 . Spektrum Elektromagnetik (Harvey, 2000). G. Penyiapan Sampel Penyiapan sampel dalam analisis sangat penting karena untuk mengetahui kadar atau konsentrasi suatu senyawa tertentu dalam sampel hanya dilakukan terhadap sejumlah kecil sampel. Berdasarkan prinsipnya dikenal dua macam cara pengambilan sampel dalam analisis yaitu: 1. Pengambilan sampel random (cuplikan random, cuplikan acak) Cara pengambilan sampel ini dilakukan terhadap bahan yang serba sama (homogen) atau dianggap serba sama. Misalnya larutan sejati, batch tablet, dan ampul. 2. Pengambilan sampel representatif

(35) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 14 Cara pengambilan sampel ini dilakukan jika bahan tidak homongen. Dalam hal ini sampel harus diambil dari tiap bagian-bagian yang berbedabeda dari setiap wadah (atas, tengah, bawah, samping kanan, samping kiri, dan sebagainya). Masing-masing sampel harus dicampur homogen kemudian diambil secara random (Gandjar dan Rohman, 2007). H. Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT) 1. Definisi dan Instrumentasi Kromatografi cair kinerja tinggi atau KCKT atau biasa juga disebut dengan HPLC (High Performance Liquid Chromatography) merupakan teknik pemisahan yang diterima secara luas untuk analisis dan pemurnian senyawa tertentu dalam suatu sampel. KCKT merupakan metode yang tidak destruktif dan dapat digunakan baik untuk analisis kuantitatif maupun kualitatif (Ganjar dan Rohman, 2007). Pada sistem KCKT sampel akan dibawa masuk ke dalam kolom oleh fase gerak. Proses pemisahan komponen dalam sampel terjadi karena adanya interaksi yang berbeda antara komponen dalam sampel dengan fase gerak dan fase diam yang berada di dalam kolom (Harvey, 2000). Instrumentasi KCKT pada dasarnya terdiri atas delapan komponen pokok yaitu: wadah fase gerak, sistem penghantaran fase gerak (pompa), alat untuk memasukkan sampel (tempat injeksi), kolom, detektor, wadah penampung buangan fase gerak, tabung penghubung, dan suatu komputer atau integrator atau perekam (Gandjar dan Rohman, 2007).

(36) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 15 Gambar 6. Diagram Skematik Alat KCKT (Ahuja dan Dong, 2005). a. Wadah Fase Gerak dan Fase Gerak Wadah fase gerak harus bersih dan lembam (inert). Wadah pelarut kosong ataupun labu laboratorium dapat digunakan sebagai wadah fase gerak. Larutan fase gerak atau eluent biasanya terdiri atas campuran pelarut yang dapat bercampur dan secara keseluruhan berperan dalam daya elusi dan resolusi. Polaritas keseluruhan pelarut, polaritas fase diam, dan sifat komponen-komponen sampel menentukan daya elusi dan resolusi. Elusi dapat dilakukan dengan cara isokratik (komposisi fase gerak tetap selama elusi) atau dengan cara bergradien (komposisi fase gerak berubah-ubah selama elusi). Elusi bergradien digunakan untuk meningkatkan resolusi campuran yang kompleks terutama jika sampel memiliki kisaran polaritas yang lebar. Fase gerak sebelum digunakan harus disaring terlebih dahulu untuk menghindari partikelpartikel kecil. Fase gerak juga harus diultrasonikasi (penghilangan gas), sebab adanya gas akan berkumpul dengan komponen lain

(37) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 16 terutama di pompa dan detektor sehingga akan mengacaukan analisis. Pada saat menyiapkan pelarut untuk fase gerak sangat dianjurkan menggunakan pelarut, bufer, dan reagen dengan kemurnian yang sangat tinggi. Adanya pengotor dalam fase gerak dapat menyebabkan gangguan pada sistem kromatografi (Gandjar dan Rohman, 2007). b. Pompa Pompa yang cocok digunakan untuk KCKT adalah pompa yang mempunyai syarat sebagaimana syarat wadah pelarut, yaitu: pompa harus inert terhadap fase gerak. Bahan yang umum digunakan untuk pompa adalah gelas, baja tahan karat, teflon, dan batu nilam. Pompa yang digunakan seharusnya mampu memberikan tekanan sampai 5000 psi dan mampu mengalirkan fase gerak dengan kecepatan alir 3 mL/menit. Untuk tujuan preparatif, pompa yang digunakan harus mampu mengalirkan fase gerak dengan kecepatan 20 mL/menit. Tujuan penggunaan pompa adalah unuk menjamin proses penghantaran fase gerak berlangsung secara tepat, reprodusibel, konstan, dan bebas dari gangguan. Ada 2 jenis pompa dalam KCKT yaitu: pompa dengan tekanan konstan, dan pompa dengan aliran fase gerak yang konstan (Gandjar dan Rohman, 2007). c. Tempat Penyuntikan Sampel Sampel-sampel cair dan larutan disuntikkan secara langsung ke dalam fase gerak yang mengalir di bawah tekanan menuju kolom menggunakan alat penyuntik yang terbuat dari tembaga tahan karat dan

(38) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 17 katup teflon yang dilengkapi dengan keluk sampel (sample loop) internal atau eksternal. Pada saat penyuntikkan, katup diputar sehingga fase gerak mengalir melewati keluk sampel dan mengalir sampai ke kolom. Kelebihan penyuntikan sampel akan dikeluarkan ke pembuang (Gandjar dan Rohman, 2007). d. Kolom Kolom pada KCKT berbentuk tabung silinder berisi partikel silika yang ukurannya 1,5-5 µm. Pori-pori pada silika dilapisi oleh fase diam yang berikatan dengan partikel-patikel silika. Fase diam yang biasa digunakan adalah C18 (oktadesilsilan), C8 (oktilsilan), dan C4 (butilsilan). Pada dasarnya pori-pori pada silika adalah ruang yang ada diantara partikel-partikel silika yang beragregasi (Snyder dkk., 2010). Gambar 7. Diagram Kolom KCKT (Snyder dkk., 2010).

(39) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 18 Pada kolom KCKT terjadi proses pemisahan antar komponen dalam sampel. Pemisahan terjadi berdasarkan interaksi yang terjadi antara komponen dalam sampel dengan fase gerak dan fase diam. Pada sistem KCKT fase terbalik, fase diam yang digunakan bersifat lebih nonpolar dari fase gerak yang digunakan. Komponen dalam sampel yang bersifat polar akan terelusi lebih dahulu dari kolom KCKT, sedangkan komponen dalam sampel yang bersifat nonpolar akan terelusi lebih lambat dari kolom KCKT. Hal ini disebabkan karena interaksi antara komponen polar dalam sampel dengan fase diam lemah sehingga lebih terbawa fase gerak dan interaksi antara komponen nonpolar dalam sampel dengan fase diam lebih kuat sehingga lebih sukar terbawa fase gerak (Snyder dkk., 2010). Gambar 8. Pemisahan Sampel (Snyder dkk., 2010).

(40) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 19 e. Fase Diam Fase diam yang banyak digunakan pada KCKT adalah silika yang dimodifikasi secara kimiawi, silika yang tidak dimodifikasi, atau polimer-polimer stiren dan divinil benzen. Permukaan silika adalah polar dan sedikit asam karena adanya residu gugus silanol (Si-OH). Silika dapat dimodifikasi secara kimiawi dengan menggunakan reagen seperti klorosilan. Gugus silanol akan bereaksi dengan klorosilan dan mengganti gugus silanol dengan gugus fungsional. Hasil modifikasi tersebut adalah silika fase terikat yang stabil terhadap hidrolisis, karena adanya ikatan siloksan (Si-O-Si). Interaksi antara silika dengan fase diam stabil pada pH diatas 2. R merupakan gugus metil yang terikat, banyakanya gugus metil yang terikat akan menentukan sifat kepolaran. Fase diam bersifat polar apabila gugus metil yang terikat pendek dan bersifat semakin non polar apabila gugus metil yang terikat semakin panjang (Ahuja dan Dong, 2005). Gambar 9. Interaksi Silika dengan Fase Diam (Ahuja dan Dong, 2005). Oktadesilsilan (ODS atau C18) merupakan fase diam yang paling banyak digunakan karena mampu memisahkan senyawa-senyawa

(41) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 20 dengan kepolaran rendah, sedang, dan tinggi. Oktil atau rantai alkil yang lebih pendek lagi lebih sesuai untuk solut polar (Gandjar dan Rohman, 2007). f. Detektor Detektor KCKT yang ideal memiliki karakteristik sebagai berikut: 1. Memiliki respon terhadap solut yang cepat dan reprodusibel 2. Memiliki sensitivitas yang tinggi, mampu mendeteksi solut pada kadar yang sangat kecil 3. Stabil pada pengoperasiannya 4. Memiliki sel volume yang kecil sehingga mampu meminimalkan pelebaran pita. 5. Signal yang dihasilkan berbanding lurus dengan konsentrasi solut pada kisaran yang luas (kisaran dinamis linier) 6. Tidak peka terhadap perubahan suhu dan kecepatan alir fase gerak (Gandjar dan Rohman, 2007). Pada KCKT ada dua jenis detektor, yaitu: 1. Detektor Pemisahan Teknik pengukuran ini menggunakan detektor universal yang dapat mendeteksi banyak komponen. Detektor akan mengukur setiap komponen yang terbawa oleh fase gerak. Salah satu detektor pemisahan adalah detektor indek bias. Keunggulan detektor pemisahan adalah dapat mendeteksi banyak komponen, dan semua komponen yang keluar dari

(42) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI kolom akan terdeteksi sehingga menjadi 21 kurang selektif(Rohman, 2009). 2. Detektor Spesifik sampel Teknik pengukuran ini didasarkan pada karakter sampel yang unik. Detektor akan mendeteksi keunikan dari karakter sampel, contohnya pengukuran komponen sampel yang mengabsorpsi sinar uv panjang gelombang spesifik(Snyder dkk., 2010). 2. Analisis Kualitatif dan Kuantitatif Analisis kualitatif KCKT dilakukan berdasarkan data wakturetensi (tR) dengan membandingkan antara data retensi solut sampel dengan data retensi baku yang sesuai (senyawa yang diketahui pada kondisi yang sama yaitu dalam kondisi alat yang stabil dengan perbedaan waktu antar keduanya sekecil mungkin (Gandjar dan Rohman, 2007). Analisis kuantitatif KCKT dilakukan dengan data luas puncak atau dengan tinggi puncak. Luas puncak dan tinggi puncak berbanding langsung dengan banyaknya solut yang dianalisis, jika dilakukan pada kisaran detektor yang linier. Pengukuran luas puncak dilakukan dengan mengukur luas sebagai hasil kali tinggi puncak dan lebar pada setengah tinggi (W1/2). Pengukuran tinggi puncak dilakukan dengan mengukur jarak dari garis dasar ke puncak maksimum, penyimpangan dari garis dasar diimbangi dengan interpolasi garis dasar antara awal dan akhir puncak (Gandjar dan Rohman, 2007).

(43) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 22 I. Larutan Bufer Larutan bufer atau larutan penyangga adalah larutan yang memiliki pH konstan yaitu dapat mempertahankan pH dari pengenceran, penambahan sedikit asam atau sedikit basa (Ashari, 2006). Kapasitas bufer merupakan kemampuan suatu bufer untuk mempertahankan pH, tergantung pada nilai pKa, konsentrasi bufer, dan pH fase gerak. Kapasitas bufer akan menurun ketika ada perbedaan nilai pKa bufer dengan pH fase gerak yang diinginkan. Bufer yang digunakan sebaiknya memiliki nilai pKa dalam rentang ±1,0 unit dari pH fase gerak yang diinginkan (Snyder dkk., 2010). J. Landasan Teori Salbutamol sulfat dan guaifenesin merupakan kombinasi obat batuk sirup ekspektoran yang sering digunakan untuk terapi batuk yang disertai asma. Obat batuk sirup ekspektoran ini termasuk golongan obat keras yang penggunaannya harus dengan resep dokter sehingga perlu dilakukan penetapan kadar salbutamol sulfat dan guaifenesin dengan metode analisis yang tepat dan telah divalidasi sebagai kontrol kualitas produk. Metode Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT) merupakan metode analisis dengan selektivitas dan sensitivitas yang tinggi, sehingga mampu memisahkan senyawa-senyawa multikomponen dengan kadar kecil. Metode KCKT yang digunakan dalam penetapan kadar salbutamol sulfat dan guaifenesin telah dioptimasi dan divalidasi agar diperoleh hasil yang

(44) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 23 valid. Salbutamol sulfat dan guaifenesin memiliki gugus kromofor pada rumus bangunnya yang cukup untuk digunakan pada deteksi secara KCKT-UV. K. Hipotesis 1. Sediaan sirup merek “X” mengandung guaifenesin tidak kurang dari 90,0% dan tidak lebih dari 110,0% dari yang tertulis pada label kemasan (USP30-NF25,2007). 2. Kadar guaifenesin yang terukur sesuai dengan kadar guaifenesin yang tertera dalam label kemasan sediaan sirup merek “X”.

(45) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI BAB III METODE PENELITIAN A. Jenis dan Rancangan Penelitian Penelitian ini mengikuti jenis penelitian non eksperimental deskriptif karena tidak ada intervensi terhadap subyek uji. B. Variabel Penelitian 1. Variabel bebas pada penelitian ini adalah sediaan sirup merek “X” yang mengandung salbutamol sulfat dan guaifenesin 2. Variabel tergantung pada penelitian ini adalah kadar salbutamol sulfat dan guaifenesin dalam sediaan sirup merek “X” 3. Variabel pengganggu pada penelitian ini adalah: a. Kemurnian pelarut, sehingga digunakan pelarut pro analysis yang memiliki kemurnian tinggi. b. Kemurnian baku pembanding salbutamol sulfat dan guaifenesin yang digunakan, untuk mengatasinya digunakan baku yang telah terjamin kualitasnya seperti tercantum pada Certificate of Analysis (CoA). C. Definisi Oprasional 1. Sistem Kromatografi Cair Kinerja Tinggi yang digunakan pada penelitian ini menggunakan kolom fase diam C18 dimensi 250 x 4,6 mm,5µm, fase gerak campuran metanol : 0,01 M bufer kalium dihidrogen fosfat pH 3,0 24

(46) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 25 dengan penambahan asam fosfat 0,1M pada komposisi 40:60 dan kecepatan alir 1,0 mL/min hasil optimasi yang telah divalidasi. 2. Sampel obat batuk yang digunakan adalah sediaan sirup merek “X” yang mengandung salbutamol sulfat 1,2 mg dan guaifenesin 50 mg setiap 5 mL dengan no batch RF 2001. 3. Kadar salbutamol sulfat dan guaifenesin dinyatakan dalam satuan % b/v. D. Bahan Penelitian Bahan-bahan yang digunakan dalam penelitian ini memiliki kualitas pro analysis, kecuali dinyatakan lain yakni baku pembanding salbutamol sulfat (Supriya Lifescience, No. batch SSL/SS/0312030, kemurnian 98,83%) (PT. Ifars Pharmaceutical and Lab), baku baku pembanding guaifenesin (No. kontrol 205158, kemurnian 99,88%), metanol kualitas pro analysis (E. Merck), akuabides (laboratorium kimia analisis USD) dan sediaan sirup merek “X”. E. Alat Penelitian Alat yang digunakan adalah seperangkat Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT) fase terbalik yang terdiri: pompa (merek Shimadzu LC-2010C) dengan sistem elusi gradien, detektor ultraviolet (UV) merek Shimadzu LC2010C, kolom C18dimensi 250 x 4,6 mm, 5µm merek Shimadzu column Shimpack (LC-C18 CM) (No. column 4252787 part. 228-17874-92), seperangkat

(47) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 26 komputer (merek Dell B6RDZ1S Connexant system RD01-D850 A03-0382 JP France S.A.S, printer HP Deskjet D2566 HP-024-000 625730),UV/Vis Spectrophotometer SP-3000plus merek OPTIMA dengan detektor silicon photo diode, alat ultrasonikatorRefsch., Tipe : T460 (Schwing.1 PXE, FTZ-Nr. C066/83, HF-Frequ.:35 kHz), membran filter Whatman ukuran pori 0,45 µm dan diameter 47 mm, timbangan analitik Ohaus Carat Series PAJ 1003 (max 60/120 g, min 0,001 g, d=0,01/0,1 mg), millipore, seperangkat alat gelas yang biasa digunakan di laboratorium analisis. F. Tata Cara Penelitian 1. Pembuatan Asam Fosfat 0,1 M Larutan pekat H3PO4 dengan konsentrasi 85% diambil sebanyak 1,2 mL, kemudian diencerkan dengan akuabides 100,0 mL sehingga konsentrasi H3PO4 menjadi 0,1M. 2. Pembuatan Bufer Kalium Dihidrogen Fosfat 0,01M Sebanyak 0,68 g KH2SO4 ditimbang seksama dan dilarutkan dalam akuabides hingga 500,0 mL sehingga konsentrasi menjadi 0,01 M, kemudian pH diatur dengan penambahan asam fosfat 0,1 M hingga mencapai pH 3,0. 3. Pembuatan Fase Gerak Fase gerak dibuat dari campuran metanol : 0,01 M bufer kalium dihidrogen fosfat pH 3,0 sesuai dengan hasil optimasi. Campuran fase

(48) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 27 gerak tersebut disaring dengan kertas saring Whatman dengan bantuan pompa vakum, kemudian diultrasonikasi selama 15 menit. 4. Pembuatan Larutan Baku Salbutamol Sulfat dan Guaifenein untuk Penentuan Panjang Gelombang a. Pembuatan Larutan Baku Salbutamol Sulfat Larutan baku salbutamol sulfat konsentrasi 1000 µg/mL dibuat dengan menimbang secara seksama baku salbutamol sulfat sebanyak 10,0 mg dan dilarutkan dengan metanol ke dalam labu takar 10,0 mL hingga tanda, kemudian dibuat larutan seri dengan 3 konsentrasi berbeda yaitu 100; 300; dan 600 µg/mL dengan mengencerkan 1,0; 3,0; dan 6,0 mL larutan stok tersebut dengan metanol hingga 10,0 mL. b. Pembuatan Larutan BakuGuaifenesin Larutan baku guaifenesin konsentrasi 400µg/mL dibuat dengan menimbang secara seksama baku guaifenesin sebanyak 20,0 mg dan dilarutkan dengan metanol dalam labu ukur 10,0 mL hingga tanda, kemudian dibuat larutan seri dengan 3 konsentrasi berbeda yaitu 20; 60; dan 100 µg/mL dengan mengencerkan 0,5; 1,5; dan 2,5 mL larutan stok tersebut dengan metanol hingga 10,0 mL. 5. Penetapan Panjang Gelombang (λ) Maksimum Salbutamol Sulfat dan Guaifenesin dengan Spektrofotometer UV-Vis Masing-masing konsentrasi larutan seri baku salbutamol sulfat 100; 300; dan 600μg/mL dan guaifenesin 20; 60; dan 100μg/mL dibacaserapannya pada panjang gelombang 200-400 nm dengan

(49) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 28 spektrofotometer UV-Vis. Nilai λ maksimum merupakan λ yang memberikan serapan terbesar dan sama pada tiap konsentrasi dari tiga seri larutan baku salbutamol sulfat dan guaifenesin. 6. Pembuatan Larutan Baku Salbutamol Sulfat a. Pembuatan Larutan Stok Salbutamol Sulfat Larutan stok salbutamol sulfat konsentrasi 200 μg/mL dibuat dengan menimbang secara seksama baku salbutamol sulfat sebanyak 10,0 mg dan diencerkan dengan metanol ke dalam labu takar 50,0 mL hingga tanda. b. Pembuatan Larutan Intermediet Salbutamol Sulfat Larutan intermediet salbutamol sulfat konsentrasi 20μg/mL dibuat dengan mengambil sebanyak 500,0 µL larutan stok salbutamol sulfat dengan micropipet dan dimasukkan ke dalam labu takar 5,0 mL, kemudian diencerkan dengan metanol hingga tanda 7. Pembuatan Larutan Baku Guaifenesin Larutan stok guaifenesin konsentrasi 900 μg/mL dibuat dengan menimbang secara seksama baku guaifenesin sebanyak 22,5 mg dan diencerkan dengan metanol dalam labu takar 25,0 mL hingga tanda. 8. Pembuatan Seri Larutan Baku Campuran Salbutamol Sulfat dan Guaifenesin Seri larutan baku campuran salbutamol sulfat dan guafenesin konsentrasi (0,8 dan 36); (1 dan 45); (1,2 dan 54); (1,4 dan 63); dan (1,6 dan 72) μg/mL dibuat dengan mengambil sebanyak 400,0; 500,0; 600,0;

(50) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 29 700,0; 800,0µL larutan intermediet salbutamol sulfat dan mengambil sebanyak 400,0; 500,0; 600,0; 700,0; 800,0µL larutan baku guaifenesin dengan micropipet dan masing-masing dimasukkan ke dalam labu takar 10,0 mL, kemudian diencerkan dengan metanol hingga tanda. Larutan kemudian disaring dengan millipore dan diultrasonikasi selama 15 menit. 9. Pengujian Stabilitas Baku Pembanding Pengujian stabilitas baku pembanding menggunakan tiga seri larutan baku salbutamol sulfat konsentrasi 0,8; 1,2; 1,6 µg/mL dan guaifenesin konsentrasi 36; 54; 72 µg/mL yang telah disaring dengan milipore dan diultrasonikasi selama 15 menit. Tiga seri larutan baku salbutamol sulfat dan guaifenesin masing-masing konsentrasi diinjeksikan sejumlah 20 µL pada sistem KCKT fase terbalik dengan komposisi fase gerak campuran metanol : 0,01 M bufer kalium dihidrogen fosfat pH 3,0 (40:60) dan kecepatan alir 1,0 mL/menit hasil optimasi. Pengujian stabilitas baku pembanding dilakukan selama tiga hari. 10. Pembuatan Kurva Baku Salbutamol Sulfat dan Guaifenesin Pembuatan kurva baku salbutamol sulfat dan guaifenesin menggunakan seri larutan baku campuan salbutamol sulfat dan guaifenesin konsentrasi (0,8 dan 36); (1 dan 45); (1,2 dan 54); (1,4 dan 63); dan (1,6 dan 72) μg/mL yang telah disaring dengan millipore dan diultrasonikasi selama 15 menit. Seri larutan baku campuran salbutamol sulfat dan guaifenesin masing-masing konsentrasi diinjeksikan sejumlah 20 µL pada sistem KCKT fase terbalik dengan komposisi fase gerak campuran

(51) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 30 metanol : 0,01 M bufer kalium dihidrogen fosfat pH 3,0 (40:60) dan kecepatan alir 1,0 mL/menit hasil optimasi. Berdasarkan kromatogram akan diperoleh luas area salbutamol sulfat dan guaifenesin untuk masingmasing konsentrasi seri larutan baku campuran. Deteksi luas area ini kemudian diplotkan terhadap konsentrasi seri larutan baku campuran salbutamol sulfat dan guaifenesin untuk memperoleh regresi linear dengan persamaan y = bx + a dengan kriteria keberterimaan (r) ≥ 0,998 (Kazakevich dan Lobrutto, 2007). 11. Pengambilan Sampel Pengambilan sampel dilakukan dengan mengambil 10 unit sediaan sirup secara acak yang mewakili satu batch dari produksi sediaan sirup merek “X” kemudian dicampur menjadi satu hingga homogen. 12. Keseragaman volume Keseragaman volume menggunakan piknometer untuk mengetahui berat jenis sampel dengan standar air yang memiliki berat jenis 0,997 g/mL pada suhu 25 0C. Pengukuran berat jenis sampel dikakukan replikasi sebanyak tiga kali. 13. Preparasi Sampel a. Pembuatan Larutan Stok Sampel Sediaan sirup merek “X” mengandung 1,20 mg salbutamol sulfat dan 50,0 mg guaifenesin tiap 5,0 mL.Larutan stok sampel konsentrasi 12 µg/mL salbutamol sulfat dan 500,0 μg/mL guaifenesin dibuat dengan mengambil sampel yang telah dicampur

(52) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 31 homogen menggunakan micropipet sebanyak 250,0 µL kemudian dimasukkan ke dalam labu ukur 5,0 mL dan diencerkan dengan metanol hingga tanda. b. Pembuatan Larutan Sampel Larutan sampel konsentrasi 1,2 µg/mL salbutamol sulfat dan 50,0μg/mL guaifenesin dibuat dengan mengambil larutan stok sampel menggunakan micropipet sebanyak 500,0 µL kemudian dimasukkan ke dalam labu ukur 5,0 mL dan diencerkan dengan metanol hingga tanda. Larutan sampel disaring menggunakan millipore dan diultrasonikasi selama 15 menit. 14. Penetapan Kadar Sampel Larutan sampel yang telah dipreparasi diinjeksikan sejumlah 20 µL ke sistem KCKT yang telah dioptimasi dan divalidasi.Berdasarkan kromatogram sampel akan diperoleh AUC salbutamol sulfat dan guaifenesin dari masing-masing replikasi. Selanjutnya AUC masingmasing sampel di masukkan ke persamaan regresi linear bakusalbutamol sufat dan guaifenesin yang diperoleh dari hasil validasi, sehingga diperoleh kadar salbutamol sulfat dan guaifenesin dalam sampel. G. Analisis Hasil Analisis kualitatif dilakukan dengan membandingkan waktu retensi sampel dengan waktu retensi baku salbutamol sulfat dan guaifenesin. Analisis kuantitatif dilakukan dengan memasukkan AUC sampel sebagai nilai y ke

(53) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 32 persamaan regresi linear y = bx + a yang diperoleh dari kurva baku salbutamol sulfat dan guaifenesin hasil validasidengan kriteria keberterimaan (r) ≥0,998 (Kazakevich dan Lobrutto, 2007). Kadar yang diperoleh dalam satuan % b/v.Selanjutnya dilakukan analisis dengan melihat apakah dalam sediaan sirup merek “X” mengandung salbutamol sulfat dan guaifenesin tidak kurang dari 90,0% dan tidak lebih dari 110,0% dari yang tertulis pada label kemasan (USP30NF25, 2007).

(54) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN Penetapan kadar salbutamol sulfat dan guaifenesin dalam sediaan sirup merek “X” menggunakan metode kromatografi cair kinerja tinggi fase terbalik yang telah dioptimasi dan divalidasi. Pada tahap optimasi diperoleh komposisi fase gerak yang optimal untuk pemisahan salbutamol sulfat dan guaifenesin yaitu campuran metanol : 0,01 M kalium dihidrogen fosfat pH 3,0 (40:60). Fase gerak tersebut menghasilkan pemisahan baku campuran dengan waktu retensi salbutamol sulfat 2,91 menit dan guaifenesin 8,75 menit (Mulyawan, 2014). Pada tahap validasi metode diperoleh hasil guaifenesin memiliki rentang validitas yang memenuhi persyaratan linearitas pada seri 36,0-72,0 µg/mL, akurasi dan presisi pada level 100% yaitu konsentrasi 50 µg/mL (Hendy,2014). A. Pembuatan Fase Gerak Fase gerak yang digunakan dalam penelitian ini adalah fase gerak yang diperoleh dari hasil optimasi yaitu metanol : 0,01M bufer kalium dihidrogen fosfat pH 3,0 (40:60). Pada optimasi fase gerak telah dihasilkan pemisahan salbutamol sulfat dan guaifenesin yang baik dan optimal dengan resolusi 5,87. Sistem kromatografi yang digunakan adalah fase terbalik dimana fase diam C18 bersifat lebih non polar dari fase gerak campuran metanol : 0,01 M bufer kalium dihidrogen fosfat pH 3,0 (40:60) yang bersifat lebih polar. 33

(55) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 34 B. Penentuan Panjang Gelombang (λ) maksimum Salbutamol sulfat dan Guaifenesin Penetapan λ pengamatan bertujuan untuk mengetahui λ yang memberikan serapan optimal untuk salbutamol sulfat dan guaifenesin. Penentuan λ pengamatan dilakukan dengan mengamati λ overlapping antara salbutamol sulfat dan guaifenesin. Pengukuran λ maksimum salbutamol sulfat dan guaifenesin dilakukan dengan tiga seri konsentrasi. Hal ini dilakukan untuk melihat kenaikan respon serapan terhadap kenaikan konsentrasi sehingga dapat dipastikan bahwa panjang gelombang yang diperoleh milik salbutamol sulfat dan gaifenesin. Salbutamol sulfat menggunakan seri konsentrasi 100; 300; dan 600 µg/mL dan guaifenesin menggunakan seri konsentrasi 20; 60; dan 100 µg/mL. Pembacaan serapan dilakukan menggunakan spektofotometer UV-Vis pada λ 200-400 nm karena λ salbutamol sulfat dan guaifenesin berada dalam rentang tersebut. Suatu senyawa dapat diukur serapannya pada daerah UV jika memiliki gugus kromofor dan auksokrom. Berikut adalah gambar gugus kromofor dan auksokrom salbutamol sulfat dan guaifenesin: Gambar 10. Gugus Kromofor dan Auksokrom Salbutamol Sulfat

(56) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 35 Gambar 11. Gugus Kromofor dan Auksokrom Guaifenesin Berikut hasil spektra salbutamol sulfat dan guaifenesin yang diperoleh, serta spektra overlapping salbutamol sulfat dan guifenesin: 278 nm 600 µg/mL 300 µg/mL 100 µg/mL Gambar 12. Spektra Salbutamol Sulfat pada 3 Seri Konsentrasi dalam Pelarut Metanol

(57) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 36 274 nm 100 µg/mL 60 µg/mL 20 µg/mL Gambar 13. Spektra Guaifenesin pada 3 Seri Konsentrasi dalam Pelarut Metanol 275 nm Gambar 14. Spektra Overlapping Salbutamol Sulfat dan Guaifenesin dalam Pelarut Metanol

(58) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 37 Berdasarkan profil spektra yang diperoleh pada penelitian ini, λ maksimum salbutamol sulfat adalah 278 nm dan guaifenesin adalah 274 nm. Hasil λ maksimum ini diperoleh dengan melihat kenaikan respon serapan yang sebanding dengan kenaikan konsentrasi. Secara teoritis pada suasana asam salbutamol sulfat memiliki λ maksimum 276 nm dan guaifenesin memilki λ maksimum 273 nm (Moffat dkk., 2011). Pergeseran λ yang terjadi untuk salbutamol sulfat adalah 2 nm dan guaifenesin adalah 1 nm, sehingga λ maksimum yang diperoleh pada penelitian ini dapat diterima karena pergeseran λ yang terjadi masih memenuhi pesyaratan yaitu tepat pada atau dalam batas 2 nm (Dirjen POM, 1995). Berdasarkan profil spektra overlapping salbutamol sulfat dan guaifenesin dapat diketahui λ overlapping yang digunakan sebagai λ pengamatan yaitu 275 nm. C. Pengukuran Stabilitas Baku Pembanding Pada penelitian ini dilakukan pengukuran stabilitas larutan baku untuk mengetahui stabilitas dari baku yang digunakan. Pengukuran stabilitas larutan baku menggunakan tiga seri konsentrasi yaitu 0,6 ; 1,2 ; 1,6 µg/mL untuk salbutamol sulfat dan 36; 54; 72 µg/mL untuk guaifenesin dan dilakukan selama tiga hari.Pelarut yang digunakan adalah metanol karena dapat melarutkan salbutamol sulfat dan guaifenesin. Metanol memenuhi persyaratan sebagai pelarut yaitu dapat melarutkan analit, tidak bereaksi dengan analit, dapat bercampur dengan fase gerak, dan tidak toksik.Pengukuran stabilitas larutan baku dilakukan dengan melihat persen perbedaan konsentrasi yang diperoleh pada tiga hari

(59) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 38 pegukuran dari masing-masing konsentrasi. Baku pembanding dikatakan stabil apabila persen perbedaan yang diperoleh ≤2% (Ahuja dan Dong, 2005). Berikut hasil pengukuran untuk mengetahui stabilitas larutan: Tabel 1. Hasil Pengukuran Stabilitas baku Guaifenesin Larutan baku guaifenesin Konsentrasi (µg/ mL) Hari 1 Konsentrasi (µg/mL) 35,351 AUC (mV) 428289 Hari 2 Konsentrasi (µg/mL) 35.200 AUC (mV) 432367 Hari 3 Konsentrasi (µg/mL) 35.507 % Perbedaan Konsentrasi Hari 1 Hari 1 dengan dengan Hari 2 Hari 3 0,47 0,48 35,957 AUC (mV) 430299 53,953 674301 53.728 674835 53.769 674079 53.712 0,08 0,03 71,914 913892 71,773 914290 71.820 913048 71.710 0,04 0,09 Tabel 2. Hasil Pengukuran Stabilitas Baku Salbutamol Sulfat Larutan baku salbutamol sulfat Konsentrasi (µg/ mL) 0,79064 1,18596 1,58128 Hari 1 AUC (mV) 12429 14296 16943 Hari 2 AUC (mV) 13008 14288 18411 Hari 3 AUC (mV) 11721 12919 18209 % Perbedaan AUC Hari 1 Hari 1 dengan dengan Hari 2 Hari 3 4,66 5,69 0,06 9,63 8,66 7,47 Berdasarkan hasil pengukuran, pada guaifenesin didapatkan kurva baku dengan nilai koefisien korelasi (r = 0,9997) sehingga persen perbedaan dapat dilihat berdasarkan konsentrasinya. Baku guaifenesin dinyatakan stabil karena memiliki % perbedaan kadar ≤ 2%. Pada salbutamol sulfat tidak dilakukan pembuatan kurva baku karena baku pembanding yang digunakan telah melewati tanggal kadaluwarsa sehingga persen perbedaan dilihat berdasarkan nilai AUC.Baku salbutamol sulfat dinyatakan tidak stabil karena memiliki % perbedaan AUC≥

(60) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 39 2%. Karena ketidakstabilan baku salbutamol sulfat pada penelitian ini analisis kuantitatif hanya dilakukan untuk guaifenesin. D. Pembuatan Kurva Baku Guaifenesin Lautan baku guaifenesin dibuat dalam lima seri konsentrasi. Lima seri konsentrasi larutan baku ini digunakan untuk membuat kurva baku sehingga konsentrasi dengan area dibawah kurva (AUC). Konsentrasi seri larutan baku guaifenesin yang digunakan adalah 36; 45; 54; 63 ; dan 72 µg/mL. Persamaan kurva baku yang diperoleh digunakan untuk menetapkan kadar guaifenesin dalam sampel sirup merek “X”. Parameter yang digunakan untuk menentukan linearitas adalah koefisien korelasi (r) ≥0,998 (Kazakevich dan Lobrutto, 2007). Penentuan persamaan kurva baku guaifenesin dilakukan dengan menggunakan lima seri larutan baku dan tiga kali replikasi, persamaan kurva baku yang diperoleh adalah sebagai berikut: Tabel 3. Hasil Pengukuran Pesamaan Kurva baku Guaifenesin Replikasi 1 Konsentrasi AUC (µg/mL) (mV) 35,940 416750 44,926 542221 53,911 690626 62,896 779459 71,882 903167 A -59598,246 B 13467,384 r 0,99746 Replikasi 2 Konsentrasi AUC (µg/mL) (mV) 35,957 430299 44,946 563166 53,935 674301 62,924 790499 71,914 913892 A -42280,037 B 13288,380 r 0,99963 Replikasi 3 Konsentrasi AUC (µg/mL) (mV) 35,957 434389 44,946 565020 53,935 676218 62,924 791864 71,914 917741 A -39082,532 B 13277,580 r 0,99967 Persamaan kurva baku yang digunnakan untuk penetapan kadar guaifenesin dalam sampel adalah persamaan replikasi ketiga yaitu

(61) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 40 Y = 13277,580x-39082,532 karena memiliki nilai r yang paling besar yaitu 0,9967. Nilai r merupakan koefisien korelasi yang menyatakan hubungan antara respon dengan konsentrasi larutan. Korelaasi yang baik antara respon dengan Konsentrasi dapat dilihat dari kurva dimana dengan bertambahnya konsentrasi maka respon yang dihasilkan juga meningkat dan membentuk garis yang linier. Kurva hubungan antara AUC sebagai respon dengan konsentrasi guaifenesin adalah: Kurva Baku Guaifenesin 1000000 y = 13277,580x-39082,532 AUC (mV) 800000 600000 400000 200000 0 0 10 20 30 40 50 60 70 80 Konsentrasi Guaifenesin (µg/mL) Gambar 15. Kurva Baku Guaifenesin E. Pengambilan Sampel Sampel yang digunakan pada penelitian ini adalah sediaan sirup merek “X” yang mengandung 1, 20 mg salbutamol sulfat dan 50,0 mg guafenesin setiap 5,0 mL. Penelitian ini menggunakan 10 unit sediaan yang diambil secara acak dengan nomor batchRF2001 untuk ditetapkan kadarnya menggunakan metode kromatografi cair kinerja tinggi fase terbalik dengan fase gerak metanol : 0,01 M

(62) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 41 bufer fosfat pH 3,0 (40:60) dan kecepatan alir 1,0 mL/min. Berikut adalah hasil keseragaman volume sampel sirup merek “X”: Tabel 4. Data Keseragaman Volume Sampel Sirup merek “X” No 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Bobot kemasan dan isi (g) 224,4 225,2 226,4 224,7 225,6 225,9 226,2 225,4 225,7 226,1 Bobot kemasan kosong (g) 100,2 99,8 100,7 100,1 100,3 100,4 100,6 100,3 100,8 100,4 Rata-rata (×) SD RSD Bobot isi sampel (g) Volume isi sampel (mL) 124,2 125,4 125,7 124,6 125,3 125,5 125,6 125,1 124,8 125,7 98,807 99,761 100,000 99,125 99,682 99,841 99,920 99,523 99,284 100,000 99,594 0,405 0,41 % Uji keseragaman volume dilakukan pada 10 unit sampel sirup merek “X” dengan nomor batch yang sama. Volume sampel diperoleh dari konversi berat isi sampel dalam kemasan dengan menghitung berat jenis sampel menggunakan piknometer. Berat jenis sampel yang diperoleh adalah 1,257 g/mL. Sampel yang digunakan memiliki volume pada etiket 100 mL. Berdasarkan hasil yang diperoleh semua volume sampel masuk dalam rentang 90-110% (USP30-NF25, 2007) dan nilai RSD yang diperoleh ≤ 2% (Gonzalez dan Herrador, 2007), sehingga sampel yang digunakan dinyatakan memiliki volume yang sesuai dengan lebel kemasan dan memiliki volume yang seragam.

(63) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 42 F. Analisis Kualitatif Analisis kualitatif dilakukan dengan membandingkan waktu retensi salbutamol sulfat dan guaifenesin antara baku dan sampel. Berikut kromatogram baku dan sampel: Nama sampel Fase diam Fase gerak Kecepatan alir Volume injeksi Detektor : Baku salbutamol sulfat 1,2 µg/mL : C18 dimensi 250 x 4,6 mm, 5µm : metanol : bufer fosfat 0,01M pH 3 (40:60) : 1,0 mL/menit : 20 µL : UV-275 nm Gambar 16. Kromatogram Baku Salbutamol Sulfat Konsentrasi 1,2 µg/mL

(64) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI Nama sampel Fase diam Fase gerak Kecepatan alir Volume injeksi Detektor : Baku guaifenesin 54 µg/mL : C18 dimensi 250 x 4,6 mm, 5µm : metanol : bufer fosfat 0,01M pH 3 (40:60) : 1,0 mL/menit : 20 µL : UV-275 nm Gambar 17. Kromatogram Baku Guaifenesin Konsentrasi 54,0 µg/mL Nama sampel 43 : Sampel sirup merek “X”

(65) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI Fase diam Fase gerak Kecepatan alir Volume injeksi Detektor 44 : C18 dimensi 250 x 4,6 mm, 5µm : metanol : bufer fosfat 0,01M pH 3 (40:60) : 1,0 mL/menit : 20 µL : UV-275 nm Gambar 18. Kromatogram sampel Tabel 5. Data Waktu Retensi Baku Salbutamol Sulfat, Baku Guaifenesin dan Sampel Analit Salbutamol sulfat Guaifenesin Baku (menit) 2,907 8,089 Sampel (menit) 2,900 8,016 Perbedaan waktu retensi salbutamol sulfat dan guaifenesin terjadi karena adanya perbedaan interaksi yang terjadi antara masing-masing zat dengan fase diam dan fase gerak sesuai prinsip pemisahan dari kromatografi cair kinerja tinggi. Interaksi yang terjadi adalah: Gambar 19. Interaksi Salbutamol Sulfat dengan Fase diam

(66) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI Gambar 20. Interaksi Guaifenesin dengan Fase Diam Gambar 21. Interaksi Salbutamol Sulfat dengan Fase Gerak 45

(67) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 46 Gambar 22. Interaksi Guaifenesin dengan Fase Gerak Pada penelitian ini, sistem KCKT yang digunakan adalah fase terbalik dimana fase diam bersifat lebih non polar dibanding fase gerak. Analit yang bersifat polar akan terelusi lebih dahulu sedangkan yang bersifat non polar akan berinteraksi lebih oleh fase diam. Berdasarkan interaksi yang terjadi guaifenesin memiliki interaksi yang lebih banyak dengan fase diam sehingga waktu retensinya lebih lama dibandingkan sabutamol sulfat. Hal ini juga menunjukkan bahwa guaifenesin bersifat lebih non polar dari salbutamol sulfat. Hasil waktu retensi yang sama antara baku dengan sampel menyatakan bahwa dalam sampel sirup merek “X” mengandung salbutamol sulfat dan guaifenesin.

(68) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 47 G. Analisis Kuantitatif Analisis kuantitatif dilakukan dengan menghitung kadar guaifenesin dalam sampel yang mengandung 50 mg guaifenesin setiap 5 mL (1 %b/v). Sampel yang digunakan sejumlah 10 unit dengan nomor batch yang sama dan dilakukan replikasi sebanyak enam kali. Pada penelitian ini dilakukan 2 tahap preparasi sampel dengan faktor pengenceran 200 kali. Tahap pertama adalah pembuatan larutan stok sampel dengan konsentrasi guaifenesin 500,0 µg/mL. Tahap kedua adalah pembuatan larutan sampel dengan konsentrasi guaifenesin 50 µg/mL dari larutan stok sampel. Respon yang dihasilkan berupa nilai AUC yang kemudian disubtitusikan kedalam persamaan kurva baku guaifenesin = 13277,580 − 39082,532, sehingga diperoleh kadar guaifenesin sebagai berikut: Tabel 6. Hasil Pengukuran Kadar Sampel Sirup Merek “X” Replikasi 1 2 3 4 5 6 tR (menit) 8,016 8,029 8,017 8,020 7,990 8,016 Rata-rata (×) SD RSD AUC (mV) Kadar (µg/mL) 611026 606857 605170 603116 602166 611906 48,9628 48,6488 48,5218 48,3671 48,2955 49,0291 Kadar x Kadar faktor (% b/v) pengenceran (µg/mL) 9792,5600 0,9793 9729,7600 0,9730 9704,3600 0,9704 9673,4200 0,9637 9659,1000 0,9659 9805,8200 0,9806 48,44 mg/5mL 0,3406 0,70 % Kadar (mg/5mL) 48,965 48,650 48,520 48,185 48,295 48,030 Rentang kadar yang diperbolehkan untuk sediaan sirup yang mengandung guaifenesin adalah 90-110% dari kadar yang tertera pada lebel kemasan (USP30NF25,2007) , maka rentang kadar yang diperbolehkan untuk guaifenesin pada

(69) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 48 sampel sirup merek “X”penelitian ini adalah 45 – 55 mg/5ml. Berdasarkan hasil pengukuran diperoleh rentang kadar 48,03–48,97 mg/5mL, maka dapat diyatakan tidak ada satupun sampel yang berada diluar rentang yang dipersyaratkan. Nilai RSD yang diperoleh yaitu 0,70% memenuhi persyaratan yang ditentukan yaitu ≤ 4% (Gonzalez dan Herrador, 2007), sehingga dapat dinyatakan bahwa kadar guaifenesin terukur sesuai dengan kadar guaifenesin yang tertera pada label kemasan.

(70) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI BAB V KESIMPULAN DAN SARAN A. Kesimpulan 1. Kadar guaifenesin yang diperoleh adalah 48,44± 0,34 mg/5mL. 2. Kadar guaifenesin yang diperoleh sesuai dengan kadar yang tertera pada label kemasan sediaan sirup merek “X”. L. Saran Penetapan kadar salbutamol sulfat dalam sediaan sirup merek “X” menggunakan metode Kromatografi Cair Kinerja Tinggi fase terbalik menggunakan baku pembanding yang masih stabil (belum Kadaluwarsa), dan melakukan penetapan kadar salbutamol sulfat dan guaifenesin dalam sediaan merek lain. 49

(71) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI DAFTAR PUSTAKA Ahuja, S., and Dong, M. W., 2005, Handbook of Pharmaceutical Analysis by HPLC, Elsevier, Inc., USA, pp. 49, 98,102, 211. Ansel, H. C., and Popovich, N. G., 1990, Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery System,5th edition, Lea and Febiger, philadelphia, pp. 212. Ashari, H., 2006, Stoikiometri dan Larutan, Penerbit Erlangga, Jakarta, pp. 115. Dicpinigaitis, Peter V., 2014, Chronic Cough Due to Asthma, Chest Journal, USA Dirjen POM, 1979, Farmakope Indonesia, Edisi III, Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta, pp.31. Dirjen POM, 1995, Farmakope Indonesia, Edisi IV, Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta, pp. 751-752, 423, 1066. Djunarko, I., and Hendrawati, Y. D., 2011, Swamedikasi yang Baik dan Benar, Citra Aji Parama, Yogyakarta, pp. 34 – 35. Gandjar, I. G., and Rohman, A., 2007, Kimia Farmasis Analisis, Pustaka Pelajar, Yogyakarta, pp. 225, 343-345, 378-388. Gonzalez, A. G., and Herrador, M. A., 2007, A Prctical Guide to Analytical Method Validation, Including Measurement Uncertainty and Accuracy Profile, Spain. Harvey, D., 2000, Modern Analytical Chemistry, McGraw-Hill Companies, Inc., USA, pp. 372, 376, 385, 578. Jyothi, N., Venu, G. K., and Seshagiri, R. J. V. L. N., 2012, Development and Validation of an HPLC Method for the Simultaneous Estimation of the Salbutamol Sulphate and Ipratropium in Inhalation Dosage Forms, International Journal of Pharma Sciences, Volume 2, Jilid 4, Aize Publisher, India. Kazakevich, Y., and Lobrutto, R., 2007, HPLC for Pharmaceutical Scientist, Wiley and Sons inc.,USA, pp. 462. Korany, Mohamed A., Fahmy, O. T., Mahgoub, H., and Maher, H. M., 2010, High Performance Liquid Chromatographic Determination of some Guaiphenesin containing Cough Cold preparations, Journal of Advanced Reaserch, Egyp. Larsen, A. H., 2014, Validasi Metode Kromatografi Cair Kenerja Tinggi Fase Terbalik untuk Penetapan Kadar Salbutamol Sulfat dan Guaifenesin Pada Sediaan Sirup Merek “X”, Skripsi, Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta. 50

(72) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI Martis, E. A., and Gangrade, D. M., 2011, Reverse Phase Isocratic HPLC Methode for Simultaneous Estimation of Salbutamol Sulphate and Beclomethasone Dipropionate in Rotacaps Formulation Dosage Forms, International Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Science, India. Moffat, A.C., David, M.O. and Brian, W., (Ed.), 2011, Clarke’s Analysis of Drugs and Poisons, Pharmaceutical press, London, pp. 1523-1524, 2038-2039. Mulyawan, A., 2014, Optimasi Komposisi dan Kecepatan Alir Fase Gerak Sistem Kromatografi Cair Kinerja Tinggi Fase Terbalik Pada Pemisahan Salbutamol Sulfat dan Guaifenesin dalam Sediaan Obat Sirup “Merek X”, Skripsi, Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta. Muralidharan, S., and Kumar, J., 2012, High Performance Liquid Chromatographic Method Development and Its Validation for Salbutamol, British Journal of Pharmaceutical Research, Sciencedomain, Malaysia. Oemiati R., Sihombing, M., and Qomariah, 2010, Faktor-Faktor yang Berhubungan dengan Penyakit Asma di Indonesia, Media Litbang Kesehatan Volume XX Nomor 1, Puslitbang BMF, Jakarta. Puspitasari, I., 2010, Jadi Dokter untuk Diri Sendiri, B First, Yogyakarta, pp. 4344. Rohman, A., 2009, Kromatografi untuk Analisi Obat, Graha Ilmu, Yogyakarta, pp. 111-115, 232. Sastrohamidjojo, H., 2001, Dasar-Dasar Spektroskopi, Liberty, Yogyakarta, pp. 11, 39. Snyder, L. R., Kirkland, J. J., and Dolan, J. W., 2010, Introduction to Modern Liquid Chromatography, 3rd edition, John Wiley & Sons, Inc., USA, pp. 2123,208-209, 151-152. Sukandar E. Y., Andrajati, R., Sigit, J. I., Adnyana, K., Setiadi, A. P., and Kusnandar, 2009, ISO Farmakoterapi, PT. ISFI penerbitan, Jakarta, pp. 446-448, 451, 457. The Department of Health, 2009, British Pharmacopeia, Volume I and II, Council of Europe, London, pp. 2861,5345. The Official Compendia Standards, 2007, US Pharmacopeia 30-NF25, USA, pp. 1310. Walode, S. G., Deshpande, S. D., and Deshpande, A. V., 2013, Stability Indicating RP-HPLC Methode for Simultaneous Estimation of Salbutamol Sulphate and Guaifenesin, Department of Pharmaceutical Chemistry, Singhad Institute of Pharmaceutical Scienes, India. 51

(73) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI LAMPIRAN 52

(74) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI Lampiran 1. Certificate of Analysis (CoA) Baku Salbutamol Sulfat 53

(75) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 54

(76) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI Lampiran 2. Certificate of Analysis(CoA) Guaifenesin 55

(77) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 56

(78) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 57

(79) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 58 Lampiran 3. Spektra Panjang Gelombang Pengamatan 1. Salbutamol Sulfat Nama sampel Pelarut Detektor : Baku salbutamol sulfat 100,0 ; 300,0 ; dan 600,0 µg/mL : Metanol : UV-Vis 200-400nm

(80) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 2. Guaifenesin Nama sampel Pelarut Detektor : Baku guaifenesin 20,0 ; 60,0 ; dan 100,0 µg/mL : Metanol : UV-Vis 200-400nm 59

(81) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 3. OverlappingSalbutamol Sufat dan Guaifenesin Nama sampel Pelarut Detektor : Baku salbutamol sulfat 300,0 µg/mL dan guaifenesin 60,0 µg/mL : Metanol : UV-Vis 200-400nm 60

(82) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 61 Lampiran 4. Kromatogram Stabilitas Baku Pembanding Salbutamol Sulfat 5 Maret 2014 1. Konsentrasi 0,8 µg/mL Nama sampel Fase diam Fase gerak Kecepatan alir Volume injeksi Detektor : Baku salbutamol sulfat 0,8 µg/mL penginjekan ke-1 : C18 dimensi 250 x 4,6 mm, 5µm : metanol : bufer fosfat 0,01M pH 3 (40:60) : 1,0 mL/menit : 20 µL : UV-275 nm

(83) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 62 2. Konsentrasi 1,2 µg/mL Nama sampel Fase diam Fase gerak Kecepatan alir Volume injeksi Detektor : Baku salbutamol sulfat 1,2µg/mL penginjekan ke-1 : C18 dimensi 250 x 4,6 mm, 5µm : metanol : bufer fosfat 0,01M pH 3 (40:60) : 1,0 mL/menit : 20 µL : UV-275 nm

(84) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 63 3. Konsentrasi 1,6 µg/mL Nama sampel Fase diam Fase gerak Kecepatan alir Volume injeksi Detektor : Baku salbutamol sulfat 1,6 µg/mL penginjekan ke-1 : C18 dimensi 250 x 4,6 mm, 5µm : metanol : bufer fosfat 0,01M pH 3 (40:60) : 1,0 mL/menit : 20 µL : UV-275 nm

(85) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 64 Lampiran 5. Kromatogram Stabilitas Baku pembanding Salbutamol Sulfat 6 Maret 2014 1. Konsentrasi 0,8 µg/mL Nama sampel Fase diam Fase gerak Kecepatan alir Volume injeksi Detektor : Baku salbutamol sulfat 0,8 µg/mL penginjekan ke-2 : C18 dimensi 250 x 4,6 mm, 5µm : metanol : bufer fosfat 0,01M pH 3 (40:60) : 1,0 mL/menit : 20 µL : UV-275 nm

(86) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 65 2. Konsentrasi 1,2 µg/mL Nama sampel Fase diam Fase gerak Kecepatan alir Volume injeksi Detektor : Baku salbutamol sulfat 1,2 µg/mL pengiinjekan ke-2 : C18 dimensi 250 x 4,6 mm, 5µm : metanol : bufer fosfat 0,01M pH 3 (40:60) : 1,0 mL/menit : 20 µL : UV-275 nm

(87) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 66 3. Konsentrasi 1,6 µg/mL Nama sampel Fase diam Fase gerak Kecepatan alir Volume injeksi Detektor : Baku salbutamol sulfat 1,6 µg/mL penginjekan ke-2 : C18 dimensi 250 x 4,6 mm, 5µm : metanol : bufer fosfat 0,01M pH 3 (40:60) : 1,0 mL/menit : 20 µL : UV-275 nm

(88) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 67 Lampiran 6. Kromatogram Stabilitas Baku Pembanding Salbutamol Sulfat 7 Maret 2014 1. Konsentrasi 0,8 µg/mL Nama sampel Fase diam Fase gerak Kecepatan alir Volume injeksi Detektor : Baku salbutamol sulfat 0,8 µg/mL penginjekan ke-3 : C18 dimensi 250 x 4,6 mm, 5µm : metanol : bufer fosfat 0,01M pH 3 (40:60) : 1,0 mL/menit : 20 µL : UV-275 nm

(89) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 68 2. Konsentrasi 1,2 µg/mL Nama sampel Fase diam Fase gerak Kecepatan alir Volume injeksi Detektor : Baku salbutamol sulfat 1,2 µg/mL penginjekan ke-3 : C18 dimensi 250 x 4,6 mm, 5µm : metanol : bufer fosfat 0,01M pH 3 (40:60) : 1,0 mL/menit : 20 µL : UV-275 nm

(90) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 69 3. Konsentrasi 1,6 µg/mL Nama sampel Fase diam Fase gerak Kecepatan alir Volume injeksi Detektor : Baku salbutamol sulfat 1,6 µg/mL penginjekan ke-3 : C18 dimensi 250 x 4,6 mm, 5µm : metanol : bufer fosfat 0,01M pH 3 (40:60) : 1,0 mL/menit : 20 µL : UV-275 nm

(91) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 70 Lampiran 7. Kromatogram Stabilitas Baku PembandingGuaifenesin 6 Maret 2014 1. Konsentrasi 36 µg/mL Nama sampel Fase diam Fase gerak Kecepatan alir Volume injeksi Detektor : Baku guaifenesin 36 µg/mL penginjekan ke-1 : C18 dimensi 250 x 4,6 mm, 5µm : metanol : bufer fosfat 0,01M pH 3 (40:60) : 1,0 mL/menit : 20 µL : UV-275 nm

(92) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 71 2. Konsentrasi 54 µg/mL Nama sampel Fase diam Fase gerak Kecepatan alir Volume injeksi Detektor : Baku guaifenesin 54 µg/mL penginjekan ke-1 : C18 dimensi 250 x 4,6 mm, 5µm : metanol : bufer fosfat 0,01M pH 3 (40:60) : 1,0 mL/menit : 20 µL : UV-275 nm

(93) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 72 3. Konsentrasi 72 µg/mL Nama sampel Fase diam Fase gerak Kecepatan alir Volume injeksi Detektor : Baku guaifenesin 72 µg/mL penginjekan ke-1 : C18 dimensi 250 x 4,6 mm, 5µm : metanol : bufer fosfat 0,01M pH 3 (40:60) : 1,0 mL/menit : 20 µL : UV-275 nm

(94) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 73 Lampiran 8. Kromatogram Stabilitas Baku PembandingGuaifenesin 7 Maret 2014 1. Konsentrasi 36 µg/mL Nama sampel Fase diam Fase gerak Kecepatan alir Volume injeksi Detektor : Baku guaifenesin 36 µg/mL penginjekan ke-2 : C18 dimensi 250 x 4,6 mm, 5µm : metanol : bufer fosfat 0,01M pH 3 (40:60) : 1,0 mL/menit : 20 µL : UV-275 nm

(95) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 74 2. Konsentrasi 54 µg/mL Nama sampel Fase diam Fase gerak Kecepatan alir Volume injeksi Detektor : Baku guaifenesin 54 µg/mL penginjekan ke-2 : C18 dimensi 250 x 4,6 mm, 5µm : metanol : bufer fosfat 0,01M pH 3 (40:60) : 1,0 mL/menit : 20 µL : UV-275 nm

(96) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 75 3. Konsentrasi 72 µg/mL Nama sampel Fase diam Fase gerak Kecepatan alir Volume injeksi Detektor : Baku guaifenesin 72 µg/mL penginjekan ke-2 : C18 dimensi 250 x 4,6 mm, 5µm : metanol : bufer fosfat 0,01M pH 3 (40:60) : 1,0 mL/menit : 20 µL : UV-275 nm

(97) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 76 Lampiran 9. Kromatogram Stabilitas Baku PembandingGuaifenesin 8 Maret 2014 1. Konsentrasi 36 µg/mL Nama sampel Fase diam Fase gerak Kecepatan alir Volume injeksi Detektor : Baku guaifenesin 36 µg/mL penginjekan ke-3 : C18 dimensi 250 x 4,6 mm, 5µm : metanol : bufer fosfat 0,01M pH 3 (40:60) : 1,0 mL/menit : 20 µL : UV-275 nm

(98) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 77 2. Konsentrasi 54 µg/mL Nama sampel Fase diam Fase gerak Kecepatan alir Volume injeksi Detektor : Baku guaifenesin 54 µg/mL penginjekan ke-3 : C18 dimensi 250 x 4,6 mm, 5µm : metanol : bufer fosfat 0,01M pH 3 (40:60) : 1,0 mL/menit : 20 µL : UV-275 nm

(99) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 78 3. Konsentrasi 72 µg/mL Nama sampel Fase diam Fase gerak Kecepatan alir Volume injeksi Detektor : Baku guaifenesin 72 µg/mL penginjekan ke-3 : C18 dimensi 250 x 4,6 mm, 5µm : metanol : bufer fosfat 0,01M pH 3 (40:60) : 1,0 mL/menit : 20 µL : UV-275 nm Lampiran 10. Data Penimbangan Baku Guaifenesin Guaifenesin Replikasi 1 Replikasi 2 Replikasi 3 Berat wadah (g) 8,58440 8,58434 8,58421 Berat Zat (g) 0,02249 0,02250 0,02250

(100) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 79 Lampiran 11. Kromatogram Seri Larutan Baku Guaifenesin Replikasi 1 Seri 1 Nama sampel Fase diam Fase gerak Kecepatan alir Volume injeksi Detektor : Baku guaifenesin 36 µg/mL : C18 dimensi 250 x 4,6 mm, 5µm : metanol : bufer fosfat 0,01M pH 3 (40:60) : 1,0 mL/menit : 20 µL : UV-275 nm

(101) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 80 Seri 2 Nama sampel Fase diam Fase gerak Kecepatan alir Volume injeksi Detektor : Baku guaifenesin 45 µg/mL : C18 dimensi 250 x 4,6 mm, 5µm : metanol : bufer fosfat 0,01M pH 3 (40:60) : 1,0 mL/menit : 20 µL : UV-275 nm

(102) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 81 Seri 3 Nama sampel Fase diam Fase gerak Kecepatan alir Volume injeksi Detektor : Baku guaifenesin 54 µg/mL : C18 dimensi 250 x 4,6 mm, 5µm : metanol : bufer fosfat 0,01M pH 3 (40:60) : 1,0 mL/menit : 20 µL : UV-275 nm

(103) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 82 Seri 4 Nama sampel Fase diam Fase gerak Kecepatan alir Volume injeksi Detektor : Baku guaifenesin 63 µg/mL : C18 dimensi 250 x 4,6 mm, 5µm : metanol : bufer fosfat 0,01M pH 3 (40:60) : 1,0 mL/menit : 20 µL : UV-275 nm

(104) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 83 Seri 5 Nama sampel Fase diam Fase gerak Kecepatan alir Volume injeksi Detektor : Baku guaifenesin 72 µg/mL : C18 dimensi 250 x 4,6 mm, 5µm : metanol : bufer fosfat 0,01M pH 3 (40:60) : 1,0 mL/menit : 20 µL : UV-275 nm

(105) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 84 Lampiran 12. Kromatogram Seri Larutan Baku Guaifenesin Replikasi 2 Seri 1 Nama sampel Fase diam Fase gerak Kecepatan alir Volume injeksi Detektor : Baku guaifenesin 36 µg/mL : C18 dimensi 250 x 4,6 mm, 5µm : metanol : bufer fosfat 0,01M pH 3 (40:60) : 1,0 mL/menit : 20 µL : UV-275 nm

(106) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 85 Seri 2 Nama sampel Fase diam Fase gerak Kecepatan alir Volume injeksi Detektor : Baku guaifenesin 45 µg/mL : C18 dimensi 250 x 4,6 mm, 5µm : metanol : bufer fosfat 0,01M pH 3 (40:60) : 1,0 mL/menit : 20 µL : UV-275 nm

(107) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 86 Seri 3 Nama sampel Fase diam Fase gerak Kecepatan alir Volume injeksi Detektor : Baku guaifenesin 54 µg/mL : C18 dimensi 250 x 4,6 mm, 5µm : metanol : bufer fosfat 0,01M pH 3 (40:60) : 1,0 mL/menit : 20 µL : UV-275 nm

(108) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 87 Seri 4 Nama sampel Fase diam Fase gerak Kecepatan alir Volume injeksi Detektor : Baku guaifenesin 63 µg/mL : C18 dimensi 250 x 4,6 mm, 5µm : metanol : bufer fosfat 0,01M pH 3 (40:60) : 1,0 mL/menit : 20 µL : UV-275 nm

(109) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 88 Seri 5 Nama sampel Fase diam Fase gerak Kecepatan alir Volume injeksi Detektor : Baku guaifenesin 72 µg/mL : C18 dimensi 250 x 4,6 mm, 5µm : metanol : bufer fosfat 0,01M pH 3 (40:60) : 1,0 mL/menit : 20 µL : UV-275 nm

(110) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 89 Lampiran 13. Kromatogram Seri Larutan Baku Guaifenesin Replikasi 3 Seri 1 Nama sampel Fase diam Fase gerak Kecepatan alir Volume injeksi Detektor : Baku guaifenesin 36 µg/mL : C18 dimensi 250 x 4,6 mm, 5µm : metanol : bufer fosfat 0,01M pH 3 (40:60) : 1,0 mL/menit : 20 µL : UV-275 nm

(111) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 90 Seri 2 Nama sampel Fase diam Fase gerak Kecepatan alir Volume injeksi Detektor : Baku guaifenesin 45 µg/mL : C18 dimensi 250 x 4,6 mm, 5µm : metanol : bufer fosfat 0,01M pH 3 (40:60) : 1,0 mL/menit : 20 µL : UV-275 nm

(112) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 91 Seri 3 Nama sampel Fase diam Fase gerak Kecepatan alir Volume injeksi Detektor : Baku guaifenesin 54 µg/mL : C18 dimensi 250 x 4,6 mm, 5µm : metanol : bufer fosfat 0,01M pH 3 (40:60) : 1,0 mL/menit : 20 µL : UV-275 nm

(113) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 92 Seri 4 Nama sampel Fase diam Fase gerak Kecepatan alir Volume injeksi Detektor : Baku guaifenesin 63 µg/mL : C18 dimensi 250 x 4,6 mm, 5µm : metanol : bufer fosfat 0,01M pH 3 (40:60) : 1,0 mL/menit : 20 µL : UV-275 nm

(114) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 93 Seri 5 Nama sampel Fase diam Fase gerak Kecepatan alir Volume injeksi Detektor : Baku guaifenesin 72 µg/mL : C18 dimensi 250 x 4,6 mm, 5µm : metanol : bufer fosfat 0,01M pH 3 (40:60) : 1,0 mL/menit : 20 µL : UV-275 nm

(115) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI Lampiran 14. Perhitungan Kadar Teoritis Larutan Baku Guaifenesin Replikasi 1 Penimbangan baku guaifenesin = 0,02249 g Kadar guaifenesin dalam baku = 99,88% Guaifenesin = , × 99,88% = 0,02246 g , Konsentrasi stok guaifenesin = = 898,520 µg/mL Konsentrasi seri baku guaifenesin 1 × 1= 2× 2 Seri 1 (400µL) = 35,940 µg/mL Seri 2 (500µL) = 44,926 µg/mL Seri 3 (600µL) = 53,911 µg/mL Seri 4 (700µL) = 62,896 µg/mL Seri 5 (800µL) = 71,882 µg/mL Replikasi 2 Penimbangan baku guaifenesin = 0,02250 g Kadar guaifenesin dalam baku = 99,88% Guaifenesin = , × 99,88% = 0,02247 g Konsentrasi stok guaifenesin = , = 898,920 µg/mL Konsentrasi seri baku guaifenesin 1 × 1= 2× 2 94

(116) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI Seri 1 (400µL) = 35,967 µg/mL Seri 2 (500µL) = 44,946 µg/mL Seri 3 (600µL) = 53,935 µg/mL Seri 4 (700µL) = 62,924 µg/mL Seri 5 (800µL) = 71,914 µg/mL Replikasi 3 Penimbangan baku guaifenesin = 0,02250 g Kadar guaifenesin dalam baku = 99,88% Guaifenesin = , × 99,88% = 0,02247 g Konsentrasi stok guaifenesin = , = 898,920 µg/mL Konsentrasi seri baku guaifenesin 1 × 1= 2× 2 Seri 1 (400µL) = 35,967 µg/mL Seri 2 (500µL) = 44,946 µg/mL Seri 3 (600µL) = 53,935 µg/mL Seri 4 (700µL) = 62,924 µg/mL Seri 5 (800µL) = 71,914 µg/mL 95

(117) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 96 Lampiran 15. Data Persamaan Kurva Baku Guaifenesin Replikasi 1 Replikasi 2 Replikasi 3 Konsentrasi AUC Konsentrasi AUC Konsentrasi AUC (µg/mL) (mV) (µg/mL) (mV) (µg/mL) (mV) 35,940 416750 35,957 430299 35,957 434389 44,926 542221 44,946 563166 44,946 565020 53,911 690626 53,935 674301 53,935 676218 62,896 779459 62,924 790499 62,924 791864 71,882 903167 71,914 913892 71,914 917741 A -59598,246 A -42280,037 A -39082,532 B 13467,384 B 13288,380 B 13277,580 r 0,99746 r 0,99963 r 0,99967 Lampiran 16. Kurva Baku Guaifenesin Kurva Baku Replikasi 1 1000000 AUC (mV) 800000 600000 400000 200000 0 0 10 20 30 40 50 Konsentrasi Guaifenesin (µ g/ m L) 60 70 80

(118) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 97 Kurva Baku Replikasi 2 1000000 AUC (mV) 800000 600000 400000 200000 0 0 10 20 30 40 50 60 70 80 60 70 80 Konsentrasi Guaifenesin (µ g/ m L) Kurva Baku Replikasi 3 1000000 AUC (mV) 800000 600000 400000 200000 0 0 10 20 30 40 50 Konsentrasi Guaifenesin (µ g/ m L)

(119) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 98 Lampiran 17. Data Pengukuran Berat Jenis Sampel 1. Volume piknometer Replikasi 1 Replikasi 2 Replikasi 3 Berat pikno kosong (g) 24,334 23,854 23,724 Berat pikno + air (g) 34,361 33,873 33,763 Berat air (g) 10,027 10,019 10,039 10,057 10,049 10,069 Replikasi 1 Replikasi 2 Replikasi 3 Berat pikno kosong (g) 24,334 23,854 23,724 Berat pikno + sampel (g) 36,953 36,419 36,379 Berat sampel (g) 12,619 12,569 12,655 1,259 1,251 1,261 Volume(mL)= ( ) ° air pada suhu 250C = 0,997 g/mL 2. Berat jenis sampel (g/mL)= ( ) ( ) Rata-rata berat jenis sampel (g/mL) 1,25

(120) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI Lampiran 18. Data Hasil Keseragaman Volume No 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Bobot kemasan dan isi (g) 224,4 225,2 226,4 224,7 225,6 225,9 226,2 225,4 225,7 226,1 Bobot kemasan kosong (g) 100,2 99,8 100,7 100,1 100,3 100,4 100,6 100,3 100,8 100,4 Rata-rata (×) SD RSD Bobot isi sampel (g) Volume isi sampel (mL) 124,2 125,4 125,7 124,6 125,3 125,5 125,6 125,1 124,8 125,7 98,807 99,761 100,000 99,125 99,682 99,841 99,920 99,523 99,284 100,000 99,594 0,405 0,407 % Lampiran 19. Data Perhitungan Keseragaman Volume Volume sampel (mL) = 1. Volume sampel (mL) = 2. Volume sampel (mL) = 3. Volume sampel (mL) = 4. Volume sampel (mL) = 5. Volume sampel (mL) = 6. Volume sampel (mL) = , , / , , / , , / , , / , , / , , / = 98,807 mL = 99,761 mL = 100,000 mL = 99,125 mL = 99,682 mL = 99,841 mL 99

(121) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 7. Volume sampel (mL) = 8. Volume sampel (mL) = 9. Volume sampel (mL) = 10. Volume sampel (mL) = , , / , , / , , / , , / 100 = 99,920 mL = 99,532 mL = 99,284 mL = 100,000 mL Lampiran 20. Kromatogram Sampel Replikasi 1 Nama sampel Fase diam Fase gerak Kecepatan alir Volume injeksi Detektor : Sampel sirup merek “X” : C18 dimensi 250 x 4,6 mm, 5µm : metanol : bufer fosfat 0,01M pH 3 (40:60) : 1,0 mL/menit : 20 µL : UV-275 nm

(122) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 101 Lampiran 21. Kromatogram Sampel Replikasi 2 Nama sampel Fase diam Fase gerak Kecepatan alir Volume injeksi Detektor : Sampel sirup merek “X” : C18 dimensi 250 x 4,6 mm, 5µm : metanol : bufer fosfat 0,01M pH 3 (40:60) : 1,0 mL/menit : 20 µL : UV-275 nm

(123) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 102 Lampiran 22. Kromatogram Sampel Replikasi 3 Nama sampel Fase diam Fase gerak Kecepatan alir Volume injeksi Detektor : Sampel sirup merek “X” : C18 dimensi 250 x 4,6 mm, 5µm : metanol : bufer fosfat 0,01M pH 3 (40:60) : 1,0 mL/menit : 20 µL : UV-275 nm

(124) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 103 Lampiran 23. Kromatogram Sampel Replikasi 4 Nama sampel Fase diam Fase gerak Kecepatan alir Volume injeksi Detektor : Sampel sirup merek “X” : C18 dimensi 250 x 4,6 mm, 5µm : metanol : bufer fosfat 0,01M pH 3 (40:60) : 1,0 mL/menit : 20 µL : UV-275 nm

(125) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 104 Lampiran 24. Kromatogram Sampel Replikasi 5 Nama sampel Fase diam Fase gerak Kecepatan alir Volume injeksi Detektor : Sampel sirup merek “X” : C18 dimensi 250 x 4,6 mm, 5µm : metanol : bufer fosfat 0,01M pH 3 (40:60) : 1,0 mL/menit : 20 µL : UV-275 nm

(126) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 105 Lampiran 25. Kromatogram Sampel Replikasi 6 Nama sampel Fase diam Fase gerak Kecepatan alir Volume injeksi Detektor : Sampel sirup merek “X” : C18 dimensi 250 x 4,6 mm, 5µm : metanol : bufer fosfat 0,01M pH 3 (40:60) : 1,0 mL/menit : 20 µL : UV-275 nm

(127) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 106 Lampiran 26. Perhitungan Kadar Sampel dengan Persamaan Kurva Baku Replikasi 1 2 3 4 5 6 tR (menit) 8,016 8,029 8,017 8,020 7,990 8,016 Rata-rata (×) SD RSD AUC (mV) Kadar (µg/mL) 611026 606857 605170 603116 602166 611906 48,9628 48,6488 48,5218 48,3671 48,2955 49,0291 Kadar x Kadar faktor (% b/v) pengenceran (µg/mL) 9792,5600 0,9793 9729,7600 0,9730 9704,3600 0,9704 9673,4200 0,9637 9659,1000 0,9659 9805,8200 0,9806 48,44 mg/5mL 0,3406 0,70 % Lampiran 27. Data Perhitungan Penetapan Kadar = 13277,580 − 39082,532 Persamaan kurva baku = = ( 1. = 2. = 3. = 4. = 5. = 6. = / ) , , , 606857 , , 605170 , , 603116 , , 602166 , , 611906 , = 48,9628μg/mL = 48,6488μg/mL = 48,5218μg/mL = 48,3671μg/mL = 48,2955μg/mL = 49,0291μg/mL Kadar (mg/5mL) 48,965 48,650 48,520 48,185 48,295 48,030

(128) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI Kadar sampel yang tertera pada etiket adalah 50 mg/5mL =10000 µg/mL = 1 g/100mL = 1% b/v Kadar teoritis larutan sampel = 50,0 µg/mL Faktor pengenceran = 200x Kadar dalam 100mL 1. 200 x 48,9628 µg/mL = 9792,5600 µg/mL = 0,9793 g/100mL 2. 200 x 48,6488 µg/mL = 9729,7600µg/mL = 0,9730 g/100mL 3. 200 x 48,5218µg/mL = 9704,3600 µg/mL = 0,9704 g/100mL 4. 200 x48,3671µg/mL = 9673,4200 µg/mL = 0,9637 g/100mL 5. 200 x 48,2955µg/mL = 9659,1000 µg/mL = 0,9659 g/100mL 6. 200 x 49,0291µg/mL = 9805,8200 µg/mL = 0,9806 g/100mL Lampiran 28. Perhitungan RSD Guaifenesin dalam Sampel RSD = RSD = × 100% , , × 100% = 0,70 % 107

(129) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI Lampiran 29. Perhitungan Rentang Guaifenesin Kadar pada etiket = 50 mg/5mL Rentang kadar yang diperbolehkan = 90% - 110% × 50 = 45 mg/5mL × 50 = 55 mg/5mL Rata – rata kadar yang diperoleh = 48,44 mg/5mL Rentang kadar yang diperoleh = 48,03 – 48,97 mg/5mL SD = 0,3406 Kadar ± SD = 48,10– 48,78 mg/5mL 108

(130) PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 109 BIOGRAFI PENULIS Penulis skripsi dengan judul “Penetapan Kadar Salbutamol Sulfat dan Guaifenesin pada Sediaan Sirup Merek “X” menggunakan Kromatografi Cair Kinerja Tinggi Fase Terbalik” ini memiliki nama lengkap Priscilla Novelia Sari. Penulis adalah anak tunggal dari pasangan Tee Poo Hien dan Ayni Maria Setiawan yang lahir di Surakarta, 30 November 1991. Pendidikan formal yang pernah ditempuh oleh penulis meliputi: TK Kanisius Sangkrah Surakarta (199199), SD Negri 7 Tangerang (1998-2004), SMP Bina Pratama Poris Indah Tangerang (2004-2006), SMP Widya Wacana 2 Surakarta (2006-2007), SMA Panggudi Luhur St. Joseph Surakarta (2007-2010), dan melanjutkan kuliah di Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta pada tahun 2010. Selama menempuh pendidikan di Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma, penulis pernah menjadi asisten praktikum Farmasi Fisika, serta aktif dalam berbagai kegiatan kepanitiaan yaitu menjadi sie perlengkapan seminar kanker serviks (2010), sie perlengkapan acara hari anti tembakau (2013), sie kesekertariatan seminar nasional HIV AIDS (2012), dan Co. Sie kesekertariatan long march hari HIV AIDS (2012).

(131)

Dokumen baru

Tags

Dokumen yang terkait

Penetapan kadar asam askorbat dalam sediaan larutan injeksi pemutih kulit merek ``X`` secara kromatografi cair kinerja tinggi fase terbalik.
1
20
125
Validasi metode kromatografi cair kinerja tinggi fase terbalik untuk penetapan kadar asam askorbat dalam sediaan larutan injeksi obat pemutih kulit merek "X".
1
1
114
Pengaruh paparan radiasi sinar matahari terhadap kadar bisfenol A dalam botol plastik jenis polikarbonat yang ditetapkan menggunakan kromatografi cair kinerja tinggi fase terbalik
1
2
163
Optimasi pemisahan dan penetapan kadar campuran parasetamol dan natrium fenobartial dengan metode kromatografi cair kinerja tinggi fase terbalik - USD Repository
0
0
127
Optimasi pemisahan campuran hidrokortison asetat dan kloramfenikol dalam krim merek X menggunakan metode kromatografi cair kinerja tinggi fase terbalik - USD Repository
0
0
146
Penetapan kadar asam ursolat dalam ekstrak daun binahong (Anredera cordifolia (Ten.) Steenis dengan metode kromatografi cair kinerja tinggi fase terbalik - USD Repository
0
1
78
Penetapan kadar aspartam dalam minuman serbuk beraoma merek ``X`` secara kromatografi cair kinerja tinggi fase terbalik - USD Repository
0
0
83
Optimasi pemisahan campuran parasetamol dan ibuprofen dengan metode kromatografi cair kinerja tinggi fase terbalik - USD Repository
1
2
119
Validasi metode penetapan kadar kurkumin dalam sediaan cair obat herbal terstandar merk Kiranti secara kromatografi cair kinerja tinggi fase terbalik - USD Repository
0
0
118
Optimasi metode kromatografi cair kinerja tinggi fase terbalik pada pemisahan kloramfenikol dan lidokain hidroklorida dalam sediaan tetes telinga Colme - USD Repository
0
0
159
Validasi metode kromatografi cair kinerja tinggi terbalik pada penetapan kadar kloramfenikol dan lidokain hidroklorida dalam sediaan tetes telinga Colme - USD Repository
0
0
141
Penetapan kadar kloramfenikol dan lidokain hidroklorida dalam sediaan tetes telinga Colme dengan metode kromatografi cair kinerja tinggi fase terbalik - USD Repository
0
0
94
Penetapan kadar kurkumin dalam sediaan cair obat herbal terstandar merk Kiranti secara kromatografi cair kinerja tinggi fase terbalik - USD Repository
0
0
117
Penetapan kadar teobromin dan kafein dalam ekstrak serbuk cokelat merk ``X`` menggunakan metode kromatografi cair kinerja tinggi fase terbalik - USD Repository
0
1
119
Optimasi dan validasi metode penetapan kadar bisfenol A. dalam ekstrak air dan ekstrak botol air minum menggunakan kromatografi cair kinerja tinggi fase terbalik - USD Repository
0
0
196
Show more