Uji hepatoprotektif dekokta herba seledri terhadap aktivitas serum ALT pada tikus betina galur wistar terinduksi karbon tetraklorida - USD Repository

Gratis

0
0
62
2 weeks ago
Preview
Full text
(1)PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI UJI HEPATOPROTEKTIF DEKOKTA HERBA SELEDRI TERHADAP AKTIVITAS SERUM ALT PADA TIKUS BETINA GALUR WISTAR TERINDUKSI KARBON TETRAKLORIDA SKRIPSI Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.) Program Studi Farmasi Oleh: Paulina Dewi Rosari NIM : 158114100 FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS SANATA DHARMA YOGYAKARTA 2019 i

(2) PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI ii

(3) PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI iii

(4) PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI HALAMAN PERSEMBAHAN "Mintalah, maka akan diberikan kepadamu; carilah, maka kamu akan mendapat; ketoklah, maka pintu akan dibukakan bagimu.” (Matius 7:7) "Aku tahu, bahwa Engkau sanggup melakukan segala sesuatu, dan tidak ada rencana-Mu yang gagal.” (Ayub 42:2) "I never dreamed about success, I worked for it." (Estee Lauder) Karya ini kupersembahkan untuk 1. Tuhan Yesus dan Bunda Maria, sumber kekuatan dan harapanku. 2. Orangtuaku, Bapak Sutriyana dan Ibu Endang. 3. Saudaraku, Mas Resky dan keluarga kecilnya Mbak Regina dan Eizel. 4. Sahabat-sahabatku Alberta, Claresta, Retha, Inge, Krisna, Wisnu, dan Aldo. 5. serta Almamaterku, Universitas Sanata Dharma. iv

(5) PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI v

(6) PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI vi

(7) PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI PRAKATA Puji dan syukur penulis haturkan ke hadirat Tuhan Yang Maha Esa, atas limpahan rahmat, kasih, dan penyertaan-Nya, menyelesaikan skripsi dengan judul “Uji sehingga penulis dapat Hepatoprotektif Dekokta Herba Seledri Terhadap Aktivitas Serum ALT Pada Tikus Betina Galur Wistar Terinduksi Karbon Tetraklorida” ini dengan lancar. Skripsi ini dibuat sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.) di Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma. Skripsi ini tidak akan terselesaikan dengan baik tanpa bimbingan, dukungan dan bantuan dari banyak pihak. Oleh karena itu, pada kesempatan ini dengan hati yang tulus penulis ingin menyampaikan terimakasih kepada: 1. Ibu Dr. Yustina Sri Hartini, Apt. selaku Dekan Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma (USD). 2. Ibu Dr. Christine Patramurti, Apt. selaku Ketua Program Studi Fakultas Farmasi USD. 3. Ibu drh. Sitarina Widyarini, MP.Ph.D., selaku dosen pembimbing, atas perhatian, dukungan, bimbingan dan ilmu yang sangat berharga, serta atas waktu yang telah diluangkan untuk mendampingi penulis selama proses penelitian hingga penyusunan skripsi. 4. Ibu Phebe Hendra, M.Si., Ph.D., Apt., selaku dosen penguji, atas kritik dan saran serta arahan yang membangun, yang mendukung kelancaran penelitian ini. 5. Ibu Dr. Erna Tri Wulandari, M.Si., Apt., selaku dosen penguji, atas kritik dan saran serta arahan yang membangun, yang mendukung kelancaran penelitian ini. 6. Ibu Damiana Sapta Candrasari, S.Si., M.Sc., selaku Kepala Laboratorium Fakultas Farmasi USD, yang telah memberikan izin penggunaan dan fasilitas laboratorium. vii

(8) PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI 7. Bapak Christianus Heru Setiawan, M.Sc., Apt. selaku Dosen Pembimbing Akademik, atas bimbingan dan dukungan kepada penulis selama masa studi. 8. Bapak Heru Purwanto, Bapak Kayatno, Bapak Suparjiman, Bapak Yohanes Wagiran, Bapak Markus Suparlan, Bapak Bima Windura, dan Bapak Musrifin selaku laboran di laboratorium Fakultas Farmasi USD, serta Bapak Lilik selaku laboran di Patologi Fakultas Kedokteran Hewan UGM atas bantuannya selama proses penelitian berlangsung. 9. Lembaga-lembaga UGM yaitu LPPT unit I dan IV, Biologi Farmasi, Komisi Etik Fakultas Kedokteran, dan CEBU (Pusat Epidemiologi dan Biostatistik Unit), yang telah membantu dalam hal penyediaan hewan uji, pemeriksaan sampel darah, dan penerbitan dokumen-dokumen. 10. Keluargaku, Papa, Mama, Mas Resky, Mbak Regina dan Eizel yang selalu memberikan dukungan dan doa, sehingga aku selalu semangat dalam menyelesaikan skripsi ini. 11. Sahabatku, Indri, Erin, Aldha, Ratih, dan Rossi. Sahabat-sahabat di bangku kuliah, Alberta, Claresta, Retha, Inge, Krisna, Wisnu, dan Aldo. Teman KKN Hana, Mak Cik, Elva, Emma, Yansen, dan Adi, atas semangat, hiburan, dukungan, kenangan dan pengalaman yang berharga. 12. Teman FSM C 2015 atas semua kenangan dan dinamika selama ini. 13. Kakak-kakak tingkatku, kak Monica, kak Noni, dan kak Eustachia yang dengan sabar mengajariku dan menanggapi pertanyaan-pertanyaanku. 14. Semua pihak yang terlibat dan membantu penulis baik secara langsung maupun tidak langsung. Penulis menyadari bahwa skripsi ini memiliki banyak kelemahan dan kekurangan. Oleh karena itu, dengan segenap hati penulis memohon maaf atas segala kesalahan serta terbuka oleh adanya kritik dan saran yang membangun. Akhir kata, semoga skripsi ini dapat memberikan manfaat khususnya di bidang Farmasi, serta bagi semua pihak. Yogyakarta, 8 Januari 2019 Penulis viii

(9) PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI DAFTAR ISI HALAMAN JUDUL ................................................................................................i LEMBAR PERSETUJUAN PEMBIMBING ......................................................... ii HALAMAN PENGESAHAN .............................................................................. iii HALAMAN PERSEMBAHAN .............................................................................iv PERNYATAAN KEASLIAN KARYA .................................................................. v LEMBAR PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI KARYA ILMIAH UNTUK KEPENTINGAN AKADEMIS ...............................................................vi PRAKATA ............................................................................................................ vii DAFTAR ISI ...........................................................................................................ix DAFTAR TABEL ...................................................................................................xi DAFTAR GAMBAR ............................................................................................ xii DAFTAR LAMPIRAN ........................................................................................ xiii ABSTRAK ............................................................................................................xiv ABSTRACT ............................................................................................................. xv PENDAHULUAN .................................................................................................. 1 METODE PENELITIAN......................................................................................... 2 Bahan .............................................................................................................. 3 Alat ................................................................................................................. 3 Tahap Penelitian ............................................................................................. 3 Pengumpulan Tanaman ......................................................................... 3 Determinasi Tanaman ........................................................................... 4 Pembuatan Simplisia Herba Seledri ...................................................... 4 Pengayakan Serbuk Simplisia Herba Seledri ........................................ 4 Penetapan Kadar Air Serbuk Simplisia Herba Seledri .......................... 4 Pembuatan Dekokta Herba Seledri (DHS) ............................................ 5 Uji KLT Sampel DHS ........................................................................... 5 Pemeliharaan Hewan Uji....................................................................... 6 Uji Pendahuluan .................................................................................... 6 Penetapan Dosis DHS ............................................................... 7 ix

(10) PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI Pengelompokkan dan Perlakuan Hewan Uji ............................. 7 Pengukuran Aktivitas Serum ALT ........................................................ 7 Pengumpulan dan Analisis Data secara Statistik .................................. 8 Perhitungan Persen Hepatoprotektif ..................................................... 8 HASIL DAN PEMBAHASAN................................................................................ 8 Pengumpulan Tanaman .................................................................................. 8 Determinasi Tanaman ..................................................................................... 9 Penetapan Kadar Air ....................................................................................... 9 Hasil Uji KLT Sampel DHS ........................................................................... 9 Hasil Uji Pendahuluan ................................................................................... 11 Hasil Uji Pengaruh Pemberian DHS ............................................................ 14 Kontrol Negatif ................................................................................... 16 Kontrol Hepatotoksik .......................................................................... 17 Kontrol DHS ....................................................................................... 17 Kelompok Perlakuan Jangka Panjang DHS ........................................ 18 KESIMPULAN ...................................................................................................... 20 SARAN .................................................................................................................. 21 DAFTAR PUSTAKA ............................................................................................ 21 LAMPIRAN ........................................................................................................... 24 BIOGRAFI PENULIS ........................................................................................... 47 x

(11) PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI DAFTAR TABEL Tabel I. Harga Rf Bercak Hasil Elusi pada UV 365 nm .............................. 11 Tabel II. Purata Aktivitas Serum ALT Setelah Pemejanan Karbon Tetraklorida pada Jam ke-0, 24 dan 48 .......................................... 12 Tabel III. Hasil Uji T Berpasangan Terhadap Aktivitas Serum ALT Setelah Pemejanan Karbon Tetraklorida pada Jam ke-0, 24 dan 48 ........... 12 Tabel IV. Purata Aktivitas Serum ALT pada Kelompok Kontrol dan Kelompok Perlakuan Dosis DHS ................................................... 15 Tabel V. Persen Hepatoprotektif Kelompok Perlakuan DHS Dosis 0,5; 1; dan 2 g/kgBB .................................................................................. 15 Tabel VI. Hasil Uji Post Hoc Tukey pada Kelompok Kontrol dan Kelompok Perlakuan DHS. .............................................................................. 16 xi

(12) PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI DAFTAR GAMBAR Gambar 1. Hasil Elusi Sampel DHS pada UV 365 nm .................................... 11 Gambar 2. Histogram Purata Aktivitas Serum ALT Setelah Pemejanan Karbon Tetraklorida pada Jam ke-0, 24 dan 48 .......................................... 13 Gambar 3. Histogram Purata Aktivitas Serum ALT pada Kelompok Kontrol dan Kelompok Perlakuan Dosis DHS ............................................ 15 Gambar 4. Herba Seledri .................................................................................. 29 Gambar 5. Simplisia Herba Seledri .................................................................. 29 Gambar 6. Serbuk Simplisia Herba Seledri ..................................................... 29 Gambar 7. Pembuatan DHS ............................................................................. 31 Gambar 8. DHS ................................................................................................ 31 Gambar 9. Hasil Elusi Sampel DHS pada UV 365 nm .................................... 32 Gambar 10. Hasil Elusi dan Pengukuran Rf Sampel DHS pada Cahaya Ruang (tanpa UV) ...................................................................................... 32 Gambar 11. Pemeliharaan Hewan Uji ................................................................ 33 Gambar 12. Pemberian DHS secara Peroral ...................................................... 33 Gambar 13. Pemejanan Karbon Tetraklorida secara Intraperitoneal ................. 34 Gambar 14. Pengambilan Darah melalui Vena orbitalis Mata Tikus ................ 34 xii

(13) PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI DAFTAR LAMPIRAN Lampiran 1. Surat Ethical Clearance dari Komisi Etik Fakultas Kedokteran UGM ............................................................................................. 25 Lampiran 2. Surat Keterangan Pengambilan Herba Seledri dari CV. Merapi Farma Herbal .................................................................................. 26 Lampiran 3. Surat Determinasi Herba Seledrii dari Departemen Biologi Farmasi Fakultas Farmasi UGM .................................................................. 27 Lampiran 4. Surat Keterangan Analisa Data di CE&BU Fakultas Kedokteran UGM ............................................................................................... 28 Lampiran 5. Herba Seledri dan Simplisia Herba Seledri .................................... 29 Lampiran 6. Penetapan kadar air serbuk Simplisia Herba Seledri menggunakan Moisture balance ............................................................................ 30 Lampiran 7. Pembuatan DHS ............................................................................. 31 Lampiran 8. Uji KLT Sampel DHS .................................................................... 32 Lampiran 9. Prosedur Penelitian terhadap Hewan Uji........................................ 33 Lampiran 10. Hasil Analisis Statistik Aktivitas Serum ALT pada Uji Pendahuluan ................................................................................... 35 Lampiran 11. Hasil Analisis Statistik Aktivitas Serum ALT pada Kelompok Kontrol dan Perlakuan DHS ........................................................... 37 Lampiran 12. Hasil Uji T Berpasangan terhadap Aktivitas Serum ALT Setelah Pemejanan Karbon Tetraklorida pada jam ke 0, 24 dan 48............ 42 Lampiran 13. Hasil Uji Post Hoc Tukey pada Kelompok Kontrol dan Kelompok Perlakuan DHS ............................................................................... 43 Lampiran 14. Perhitungan Penetapan Peringkat Dosis DHS ................................ 44 Lampiran 15. Perhitungan Persen Efek Hepatoprotektif ...................................... 45 Lampiran 16. Perhitungan Konversi Dosis DHS untuk Manusia ......................... 46 xiii

(14) PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI ABSTRAK Tanaman seledri diketahui mengandung senyawa apiin yang merupakan flavonoid. Senyawa flavonoid termasuk ke dalam senyawa antioksidan yang dapat menangkal radikal bebas penyebab kerusakan hati. Tujuan penelitian ini adalah untuk membuktikan efek hepatoprotektif Dekokta Herba Seledri (DHS) dengan pemberian ekstrak secara jangka panjang yaitu 6 hari pada tikus betina galur Wistar terinduksi CCl4. Jenis penelitian ini merupakan penelitian eksperimental murni dengan rancangan acak lengkap pola searah. Hewan uji yang digunakan yaitu 30 tikus dibagi ke dalam 6 kelompok secara acak (n=5). Kelompok I (Kontrol Hepatotoksik), diberikan CCl4 dosis 2 ml/kgBB i.p. Kelompok II (Kontrol negatif) diberikan olive oil 2 ml/kgBB secara i.p. Kelompok III (Kontrol DHS), diberikan DHS dosis tertinggi yaitu 2 g/kgBB p.o. selama enam hari berturut-turut dan kelompok IV, V dan VI (kelompok perlakuan) diberikan DHS masing-masing dengan dosis 0,5;1; dan 2 g/kgBB selama enam hari berturut-turut dan pada hari ke tujuh dipejankan CCl4 2 ml/kgBB secara i.p. Kelompok I dan II dilakukan pencuplikan darah pada hari kedua; kelompok III pada hari ketujuh; kelompok IV, V dan VI pada hari ke delapan atau pada jam ke-24 setelah pemejanan CCl4. Kemudian dilakukan pula uji KLT untuk melihat apakah apiin dapat tersari pada dekokta. Hasil penelitian menunjukkan bahwa Dekokta Herba Seledri (DHS) dosis 0,5; 1 dan 2 g/kgBB memiliki efek hepatoprotektif dengan menurunkan aktivitas serum ALT pada tikus terinduksi karbon tetraklorida. Dosis efektif DHS sebagai hepatoprotektor adalah 1 g/kgBB. Kata Kunci : Jangka panjang, seledri, dekokta, CCl4, ALT, KLT seledri. xiv

(15) PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI ABSTRACT Celery plants are known that contain apiin compounds which are flavonoids. Flavonoid are included as antioxidant compounds that can scavenging free radicals that cause liver damage. The purpose of this study was to prove the hepatoprotective effect of Celery Herb Decoction (DHS) by administering a long-term extracts for 6 days to female Wistar rats induced by CCl4. This type of research was purely experimental study with randomized complete direct sampling design. The research use 30 rats that divided randomly into 6 groups (n = 5). Group I (Hepatotoxic Control), was given CCl4 dose of 2 ml/kgBW i.p. Group II (negative control) was given 2 ml/kgBW olive oil i.p.Group III (DHS Control), was given the highest dose of DHS that is 2 g/kgBW p.o. for six days. and groups IV, V and VI (treatment group) were given DHS each with a dose 0.5; 1; and 2 g/kgBW for six days and on the seventh day was given CCl4 2.0 ml/ kgBW i.p. Blood sample from group I and II were obtained on the second day; group III on the seventh day; groups IV, V and VI on the eighth day or at 24 hours after CCl4 treatment. TLC test was also carried out to see that apiin can be detected on the decoction or not. The results showed that Celery Herb Decoction (DHS) dose 0.5; 1 and 2 g /kgBB have a hepatoprotective effect by reducing activity of serum ALT in carbon tetrachloride-induced rats. The effective dose of DHS as a hepatoprotector is 1 g / kgBB. Keywords : Long term period, celery, decoction, CCl4, ALT, TLC of celery. xv

(16) PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI PENDAHULUAN Hati merupakan organ atau kelenjar terbesar pada tubuh (Wibowo dan Paryana, 2009). Hati memiliki fungsi sebagai agen pemetabolisme dan detoksifikasi xenobiotic dalam tubuh kita. Oleh karena fungsinya tersebut, organ hati memiliki potensi besar mengalami kerusakan (Hodgson, 2010). Radikal bebas adalah molekul yang kehilangan elektron, dan selalu berusaha mengambil elektron dari molekul atau sel lain (Ramadan, 2015). Bila radikal bebas jumlahnya berlebihan di dalam tubuh, maka akan menciptakan ketidakseimbangan antara molekul radikal bebas dan antioksidan endogen. Akibatnya tubuh tidak dapat menetralisirnya dan terbentuklah stres oksidatif yang dapat merusak struktur sel, jaringan dan organ (Musarofah, 2015). Penyakit hati masih menjadi masalah di negara-negara maju maupun berkembang seperti Indonesia. Gangguan kesehatan yang kini menjadi perhatian adalah perlemakan hati non alkoholik atau Non Alcoholic Fatty Liver Disease (NAFLD). Dilaporkan prevalensi NAFLD di ASIA mencapai 15% sampai 45%. (Farrel et al., 2013) dan ditemukan pada seperempat dari total populasi Asia (Fan et al., 2017). Penelitian mengenai epidemiologi penyakit NAFLD di kawasan Asia menunjukkan bahwa angka prevalensi NAFLD di Indonesia mencapai 30%, lebih tinggi bila dibandingkan dengan Korea Selatan (18%) dan Malaysia (17%) (Moghaddasifar et al., 2016). Karbon tetraklorida merupakan senyawa yang banyak digunakan sebagai model toksisitas kimia yang diinduksi oleh radikal bebas (Olson, 2018). Di dalam tubuh, Karbon tetraklorida akan diubah menjadi radikal triklorometil (CCl3•), dan radikal triklorometil peroksi (CCl3O2•) oleh enzim CYP (Cytocrome P450). Senyawa radikal ini dapat menginduksi terjadinya perokidasi lipid dan kerusakan sel sentrilobular hati (Hodgson, 2010). Enzim yang dihasilkan oleh hati umumnya digunakan sebagai penanda atau alat diagnosis terhadap adanya kerusakan dalam sel hati. Adanya akumulasi lemak atau cedera pada hati biasanya dapat menyebabkan perubahan biokimia darah diantaranya peningkatan kadar Alanine Aminotransferase ALT (Hodgson, 2010). 1

(17) PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI Kandungan flavonoid yang terdapat pada seledri, merupakan antioksidan yang berpotensi sebagai agen hepatoprotektor. Hal tersebut dibuktikan dari penelitian yang dilakukan oleh Abdou et al. (2012) dimana pemberian seledri mampu memberikan efek kuratif pada organ hati yang terinduksi hepatotoksin CCl4 secara oral, yang ditunjukkan dengan peningkatan kadar soluble protein, DNA, dan RNA sebanyak kurang lebih 2 kali lipat dibandingkan dengan kelompok CCl4 setelah pemberian CCl4 + ekstrak etanol seledri maupun CCl4 + tanaman seledri yang dikonsumsi secara langsung. Menurut Abdou et al. (2012) hal ini dikaitkan dengan kemungkinan aktivitas seledri untuk merangsang biosintesis antioksidan enzim. Dekokta dipilih sebagai metode ekstraksi karena dalam pengolahan obat herbal, masyarakat umumnya menggunakan teknik perasan, seduhan maupun perebusan (Haryono, 2009). Selain itu metode ini dipilih karena senyawa flavonoid sendiri merupakan senyawa yang mudah larut dalam air. Sifat kelarutan ini dipengaruhi oleh gugusan OH pada strukturnya yang menyebabkan flavonoid memiliki sifat polar dan dapat larut dalam pelarut polar (Nollet et al., 2018). Selain itu, berdasarkan penelitian Prichatin dan Widiyastuti (2010) didapatkan bahwa metode infusa berhasil menyari flavonoid total yang diukur dengan spektrofotometri UV-Vis. Hasil dari penelitian tersebut menunjukkan bahwa kadar flavonoid total infusa seledri pada organ daun yaitu sebesar 0,51% ± 0,063, pada organ batang yaitu sebesar 0,07 ± 0,015 dan pada organ bunga yaitu sebesar 0,14 ± 0,037. Penelitian ini menggunakan sediaan dekokta, dimana hal tersebut dimaksudkan untuk memperlama kontak antara serbuk simplisia dengan pelarut sehingga diharapkan senyawa flavonoid yang tersari lebih banyak dibandingkan dengan sediaan infusa. Berdasarkan uraian di atas, penelitian ini perlu dilakukan untuk mengetahui pengaruh pemberian jangka panjang DHS yaitu selama 6 hari terhadap aktivitas ALT pada tikus betina galur Wistar terinduksi CCl4. METODE PENELITIAN Penelitian yang dilakukan adalah penelitian eksperimental murni dengan rancangan acak lengkap pola searah. Pemberian tiga peringkat dosis DHS yaitu 2

(18) PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI (0,5 ; 1 ; dan 2 g/kgBB) dilakukan secara jangka panjang yaitu selama 6 hari berturut-turut untuk dilihat pengaruhnya terhadap aktifitas serum ALT pada tikus betina terinduksi karbon tetraklorida. Bahan Bahan yang digunakan pada penelitian ini adalah herba seledri (Apium graveolens L., dengan hewan uji yaitu tikus putih (Rattus novergicus) betina galur Wistar berumur 2-3 bulan dan bobot 150-250 gram, yang diperoleh dari Laboratorium Penelitian dan Pengujian Terpadu Unit Pengembangan Hewan Percobaan (LPPT UGM Unit 4). Bahan untuk uji KLT yaitu sitroborat, Toluene (Merck), 1-butanol (Merck), asam asetat (Merck), akuades, selulosa, serta bahan yang digunakan untuk uji hepatoprotektif yaitu karbon tetraklorida (Merck), olive oil (Bertolli), akuades, reagen ALT (Dyasis®) yang terdiri dari reagen 1 (Tris pH 7,5 ; L-alanine ; Lactat dehydrogenase (LDH)) reagen 2 (2-Oxoglutarate ; NADH). Alat Alat yang digunakan dalam preparasi DHS diantaranya yaitu timbangan analitik (Mettler Toledo), pisau, oven, mesin penyerbuk, ayakan nomor mesh 50, panci enamel, penangas air, termometer, corong, gelas ukur, gelas beaker, labu erlenmeyer, labu takar, batang pengaduk, pipet tetes, penangas, Moisture Balance (Mettler Toledo), kain flannel, kertas saring, stopwatch, sendok. Alat yang digunakan untuk uji KLT diantaranya yaitu chamber, oven, lampu UV 365 nm, kertas saring, pipet volume, penjepit, timbangan analitik (Mettler Toledo), gelas beaker, gelas ukur, labu takar, corong pisah, pipet tetes, batang pengaduk. Alat yang digunakan untuk uji hepatoprotektif diantaranya yaitu timbangan analitik (Mettler Toledo), gelas beaker, gelas ukur, pipet volume 10 ml dan 5 ml, pipet tetes, spuit injeksi oral, spuit injeksi intraperitoneal, syringe 1 dan 5 cc (Terumo), pipa kapiler hematokrit (Brand), tabung eppendorf. TAHAPAN PENELITIAN Pengumpulan Tanaman 3

(19) PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI Pada penelitian ini, tanaman yang digunakan untuk pengujian efek hepatoprotektif adalah herba seledri. Herba seledri dikumpulkan dari perkebunan di Magelang Jawa Tengah dan diperoleh melalui CV. Merapi Farma Herbal Kaliurang, Yogyakarta. Determinasi Tanaman Herba seledri yang sudah dikumpulkan kemudian dilakukan determinasi oleh determinator di Departemen Biologi Farmasi, Fakultas Farmasi Universitas Gadjah Mada Yogyakarta. Pembuatan Simplisia Herba Seledri Pertama, dilakukan penimbangan herba seledri kemudian dilakukan sortasi basah pada tanaman herba seledri dengan cara menghilangkan pengotor dan bagian lain yang tidak diinginkan, seperti menghilangkan daun yang busuk, kuning atau kering. Selanjutnya dilakukan perajangan dan pemisahan bagian daun, batang dan akar untuk mempermudah pengeringan. Setelah itu dilakukan pencucian sesingkat mungkin dengan menggunakan air bersih yang mengalir, untuk menghilangkan pengotor yang ada. Setelah dicuci, daun seledri ditiriskan dalam wadah yang berlubang. Setelah itu dilakukan penimbangan. Selanjutnya dilakukan pengeringan herba seledri dengan menggunakan oven pada suhu 400C selama 14 x24 jam. Kemudian dilakukan sortasi kering dengan cara memisahkan benda-benda asing (bagian tanaman atau pengotor yang tidak diinginkan). Setelah itu dilakukan penyerbukan dengan menggunakan blender. Pengayakan Serbuk Simplisia Herba Seledri Dilakukan pengayakan dengan ayakan nomor mesh 50, mengacu pada penelitian Majidah et al. (2014). Penetapan Kadar Air Serbuk Simplisia Herba Seledri Tujuan dari penetapan kadar air adalah untuk memenuhi persyaratan serbuk simplisia yang baik, dimana kadar air yang baik menurut Depkes RI (2008) adalah tidak lebih dari 10%. Dengan kadar air kurang dari 10% diharapkan dapat mencegah kontaminasi mikroba sehingga kualitas serbuk 4

(20) PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI simplisia dapat terjaga. Penetapan kadar air dilakukan dengan menggunakan alat moisture balance, dengan suhu pengeringan yang digunakan yaitu 1200C. Cara mengukur kadar air dengan moisture balance adalah dengan meletakkan sejumlah 5 gram sampel pada pan, kemudian tutup moisture balance dan tunggu hingga alat berbunyi yang menandakan bahwa proses pengukuran kadar air telah selesai. Selanjutnya dilakukan pencatatan kadar air yang terukur pada alat dan replikasi sebanyak tiga kali. Pembuatan Dekokta Herba Seledri (DHS) DHS dibuat dengan cara menimbang sebanyak 10 gram serbuk kering herba seledri dan dimasukkan ke dalam panci enamel kemudian dibasahi dengan pelarut akuades sebanyak dua kali bobot serbuk yang digunakan yaitu 20 mL. Serbuk yang sudah dibasahi dengan 20 mL akuades di dalam panci enamel kemudian ditambahkan akuades sebanyak 100 mL. Setelah itu dipanaskan selama 30 menit terhitung pada saat suhu mencapai 900C. Setelah 30 menit, campuran diambil dan diperas menggunakan kain flannel, untuk mendapatkan hasil perasan 100 mL dapat ditambahkan akuades panas melalui ampas hingga diperoleh volume DHS yang dikehendaki yaitu 100 mL (BPOM RI, 2012). Uji KLT Sampel DHS Prosedur ini mengacu pada Depkes RI (2010). Pertama-tama dicampurkan fase gerak yang digunakan yaitu Toluene : 1-butanol : asam asetat : akuades (2:2:1:5 v/v) dibuat dalam 100 mL sehingga didapatkan volume Toluene : 1-butanol : asam asetat : akuades (20 mL:20 mL:10 mL:50mL) di dalam labu ukur kemudian dituangkan ke corong pisah. Setelah itu, campuran didiamkan selama semalam, kemudian diambil lapisan atasnya. Setelah itu masukkan lapisan atas fase gerak tadi ke dalam chamber. Setelah itu masukkan kertas saring hingga menyelimuti seluruh dinding chamber, kemudian tutup chamber. Tunggu hingga kertas saring terbasahi secara menyeluruh yang menandakan bahwa chamber sudah dalam kondisi jenuh. Sambil menunggu chamber jenuh, dilakukan aktivasi plat KLT untuk mengurangi kadar air yang terdapat pada plat yaitu dengan memanaskan plat pada suhu 1000C sekitar 30 menit (Rubiyanto, 2017). Setelah 30 5

(21) PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI menit plat diangin-anginkan selama kurang lebih 2 menit, selanjutnya dilakukan penotolan larutan dekokta secara langsung ke plat KLT yang sudah dibuat, kemudian plat dimasukkan dalam chamber yang sudah jenuh, ditunggu hingga elusi selesai. Setelah itu plat dikeluarkan dari chamber dan diangin-anginkan hingga agak mengering, kemudian dilakukan penyemprotan dengan pereaksi sitroborat dan dilakukan pengeringan dengan menggunakan oven pada suhu 1000 C selama 5-10 menit. Dilihat bercak yang terbentuk di bawah sinar UV 365 nm, kemudian dilakukan penghitungan Rf dengan pembanding Rf teoritis standar apiin yaitu 0,30 (Depkes RI, 2010). Pemeliharaan Hewan Uji Hewan uji yang digunakan pada penelitian ini yaitu tikus putih (Rattus norvegicus) betina galur Wistar usia 2-3 bulan dan bobot 150-250 gram. Tikus diperoleh dari Laboratorium Penelitian dan Pengujian Terpadu Unit Pengembangan Hewan Percobaan (LPPT UGM Unit 4). Dipilih sejumlah 30 ekor tikus dengan kriteria sebagai berikut yaitu, bergerak aktif, tidak terlihat sakit dan tidak cacat secara fisik. Sejumlah 30 ekor tikus tersebut kemudian diaklimatisasi di Laboratorium Farmakologi dan Toksikologi Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma, selama kurang lebih satu minggu. Aklimatisasi ini bertujuan agar tikus uji yang digunakan pada penelitian dapat menyesuaikan diri dengan lingkungan barunya. Ruangan dikondisikan dengan suhu 22±30C dengan siklus penerangan 12 jam terang 12 jam gelap, serta selalu dijaga kebersihannya. Hewan uji ditempatkan di dalam kandang plastik berukuran kurang lebih 30 x 20 x 10 cm, dengan alas berupa sekam dan penutup berupa kawat strimin. Dalam satu kandang berisi 2-3 ekor tikus. Tikus diberi pakan pelet dan air minum secara ad libitum. Prosedur pengujian pada hewan uji telah mendapatkan persetujuan dari Komisi Etik Fakultas Kedokteran Universitas Gadjah Mada dengan nomor kelaikan etik KE/FK/1295/EC/2018. Surat tersebut dapat dlihat pada Lampiran 1. Uji Pendahuluan Dosis hepatotoksik pada penelitian ini mengacu pada penelitian yang dilakukan oleh Janakat and Al-Merie (2002), yaitu 2 ml/kgBB dalam olive oil 6

(22) PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI (1:1) secara i.p sehingga didapatkan konsentasi larutan 50 %. Waktu pencuplikan darah dilakukan melalui orientasi dengan 5 ekor tikus dan 3 selang waktu pencuplikan yaitu jam ke-0, 24, dan 48 setelah pemejanan karbon tetraklorida. Darah tikus diambil melalui pembuluh sinus orbitalis mata. Waktu dimana ALT menunjukkan aktivitas tertinggi, ditetapkan sebagai waktu pencuplikan darah tikus. - Penetapan dosis DHS Tiga peringkat dosis didapatkan berdasarkan volume maksimal pemberian yang dapat diberikan pada lambung tikus sehingga didapatkan dosis maksimal yaitu 2 g/kgBB. Dua peringkat dosis lainnya diperoleh dengan menurunkan dua kali dari dosis awal, sehingga didapatkan dosis 0,5; 1 dan 2 g/kgBB. Perhitungan penetapan dosis DHS dapat dilihat pada Lampiran 14. - Pengelompokkan dan perlakuan hewan uji Sejumlah 30 ekor tikus dibagi secara acak ke dalam 6 kelompok perlakuan. Masing-masing kelompok terdiri dari 5 ekor tikus. Kelompok I (Kontrol hepatotoksik), diberikan CCl4 dosis 2 ml/kgBB secara i.p. Kelompok II (Kontrol negatif), diberikan pelarut CCl4 yaitu olive oil 2ml/kgBB sebanyak 1 kali secara i.p. Kelompok III (Kontrol DHS), diberikan DHS dosis tertinggi yaitu 2 g/kgBB secara p.o. selama 6 hari berturut-turut. Kelompok IV, V dan VI (Kelompok perlakuan) diberikan DHS masing-masing dengan dosis 0,5;1; dan 2 g/kgBB diberikan secara p.o. selama 6 hari berturut-turut kemudian pada hari ketujuh dipejankan CCl4 dosis 2 ml/kgBB secara i.p. Darah diambil dari sinus orbitalis mata tikus. Kelompok I dan II dilakukan pencuplikan darah pada hari kedua; kelompok III pada hari ketujuh; kelompok IV, V dan VI pada hari ke delapan atau pada jam ke-24 setelah pemejanan karbon tetraklorida Pengukuran Aktivitas Serum ALT Pengukuran aktivitas serum ALT dilakukan di Laboratorium Penelitian dan Pengujian Terpadu Universitas Gadjah Mada. Pengukuran dilakukan dengan metode fotometrik enzimatik menggunakan alat Spectrophotometer Microlab-300. Serum yang didapat dari hasil sentrifugasi darah selama 2 menit dengan putaran 7

(23) PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI 12.000 rpm akan diambil sebanyak 100 μl, kemudian ditambahkan dengan reagen mix sebanyak 1000 μl (campuran reagen 1 dan reagen 2 dengan perbandingan 4 : 1, sehingga didapatkan reagen 1 sebanyak 800 μL dan reagen 2 sebanyak 200 μL) kemudian dicampur hingga homogen dan didiamkan selama 1 menit, setelah itu dilakukan pengukuran absorbansi la rutan pada panjang gelombang 340 nm. Pengumpulan dan Analisis Data secara Statistik Data yang dikumpulkan dalam penelitian ini adalah kadar ALT tikus betina galur Wistar. Data kemudian dianalisis oleh Pusat Kajian CE&BU Yogyakarta, dengan menggunakan IBM SPSS Statistics 22 Lisensi UGM. Untuk data pendahuluan dilakukan analisisis statistic berupa Uji T Berpasangan karena sampel uji berasal dari subjek yang sama yang dilakukan beberapa kali pengujian kadar ALT yaitu pada jam ke-0, 24 dan 48. Untuk data kontrol dan perlakuan DHS, data dianalisis menggunakan Shapiro-Wilk untuk mengetahui normalitas pada masing-masing kelompok. Jika nilai (p>0,05) maka sebaran data dikatakan normal. Apabila data terdistribusi normal dan variasinya sama, dilanjutkan dengan analisis ANOVA satu arah dengan taraf kepercayaan 95% untuk mengetahui perbedaan dari masing-masing kelompok. Kemudian dilanjutkan uji Scheffe untuk melihat perbedaan masing-masing kelompok apakah bermakna (p<0,05) atau tidak bermakna (p>0,05). Bila sebaran tidak normal, dilakukan uji Kruskal-Wallis dengan Post Hoc Mann-Whitney untuk mengetahui kebermaknaan perbedaan antar kelompok. - Perhitungan persen hepatoprotektif diperoleh berdasarkan rumus: } x 100% {1- HASIL DAN PEMBAHASAN Pengumpulan Tanaman Pada penelitian ini, tanaman yang digunakan untuk pengujian efek hepatoprotektif adalah herba seledri. Herba seledri diperoleh melalui CV. Merapi Farma Herbal Kaliurang, Yogyakarta, dengan kriteria diantaranya berwarna hijau segar, tidak berlubang, tidak busuk, dan berusia sekitar 3-4 bulan. 8

(24) PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI Determinasi Tanaman Determinasi tanaman dilakukan di Fakultas Biologi Universitas Gadjah Mada Yogyakarta. Determinasi bertujuan untuk memastikan kebenaran identitas tanaman yang digunakan pada penelitian. Hasil determinasi menunjukkan bahwa tanaman yang digunakan dalam penelitian ini benar merupakan herba seledri yang termasuk ke dalam suku Apiaceae dengan nama ilmiah Apium graveolens L. Surat hasil determinasi herba seledri dapat dilihat pada Lampiran 2. Penetapan Kadar Air Penetapan kadar air dilakukan dengan menggunakan alat moisture balance. Alat ini bekerja dengan prinsip gravimetri yaitu dengan menghitung selisih antara bobot serbuk sesudah tahap akhir pengeringan pada Moisture balance dengan yang belum dikeringkan. Tahap akhir pengeringan adalah ketika sampel sudah tidak menunjukkan adanya fluktuasi berat. Setelah dilakukan tiga kali replikasi diperoleh rata-rata kadar air simplisa herba seledri yaitu sebesar 6,62% sehingga serbuk simplisia herba seledri yang dibuat dapat dikatakan sudah memenuhi syarat serbuk simplisia yang baik yaitu memiliki kadar air <10%. Penetapan kadar air serbuk simplisia herba seledri dapat dilihat pada Lampiran 8. Hasil Uji KLT Sampel DHS Analisis kualitatif dan identifikasi senyawa dalam DHS dilakukan dengan menggunakan metode KLT (Kromatografi Lapis Tipis). Analisis ini dilakukan untuk melihat apakah apiin dapat tersari dalam sediaan dekokta. Prosedur KLT pada penelitian ini mengacu pada Depkes RI (2010). Fase diam yang digunakan yaitu plat selulosa, fase gerak yang digunakan yaitu Toluene : 1butanol : asam asetat : akuades (2:2:1:5 v/v), dengan Rf pembanding menggunakan Rf teoritis apiin yaitu 0,30 (Depkes RI, 2010) deteksi menggunakan sitroborat dan lampu UV 365 nm. Apiin yang memiliki kepolaran mendekati fase gerak nantinya akan mengikuti fase gerak yang merambat sehingga senyawa apiin dapat terelusi. Pada uji KLT dilakukan lima kali penotolan, dimana pada totolan 1,2, dan 3 ditotolkan sampel DHS secara langsung sedangkan pada totolan 4 dan 5 9

(25) PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI ditotolkan sampel DHS yang sudah diencerkan terlebih dahulu. Kelima totolan tersebut ditotolkan pada satu plat yang sama dan dielusi secara bersamaan. Pengenceran sendiri dilakukan karena pada percobaan-percobaan sebelumnya didapatkan tailing yang cukup kuat pada bercak sampel DHS tanpa pengenceran. Tailing sendiri terjadi bisa disebabkan karena dalam ekstrak DHS yang dibuat mungkin mengandung beberapa senyawa lain atau bisa disebabkan pula karena DHS yang terlalu pekat. Hal tersebut cukup menyulitkan dalam penghitungan Rf, sehingga pada totolan ke 4 dan 5 dilakukan penotolan sampel DHS dengan pengenceran. Pengenceran dilakukan untuk mengurangi kepekatan larutan sampel DHS sehingga dapat mengurangi tailing yang terjadi. Berdasarkan hasil uji KLT yang dilakukan, didapatkan pada totolan 1,2, dan 3 terdapat bercak yang cukup jelas meskipun terjadi tailing namun bentuk bercak masih cukup terlihat sehingga masih dapat dilakukan penghitungan Rf. Sedangkan pada totolan ke-4 dan ke-5 didapatkan bercak yang lebih jelas. Setelah itu dilakukan penghitungan Rf pada bercak yang terbentuk. Rf dihitung dengan cara membagi antara jarak yang ditempuh oleh senyawa dengan jarak yang ditempuh pelarut. Pada KLT ini jarak yang ditempuh oleh pelarut adalah 10 cm. Berdasarkan penghitungan nilai Rf didapatkan Rf berturut-turut dari totolan 1,2, 3, 4 dan 5 yaitu 0,29; 0,28; 0,29; 0,30 dan 0,30. Sehingga berdasarkan hasil yang diperoleh, dapat disimpulkan bahwa sampel DHS mengandung senyawa flavonoid apiin. Hasil Elusi Sampel DHS pada UV 365 nm ditampilkan pada Gambar 1. Harga Rf Bercak Hasil Elusi pada UV 365 nm ditampilkan pada Tabel I. 10

(26) PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI 1 2 3 4 5 Gambar 1. Hasil Elusi Sampel DHS pada UV 365 nm Keterangan : 1= totolan 1; 2= totolan 2; 3= totolan 3; 4= totolan 4; 5= totolan 5. Fase diam = seluloa, Fase gerak = Toluene : 1-butanol : asam asetat : akuades (2:2:1:5 v/v), Deteksi = pereaksi sitroborat, UV 365 nm, sampel = Dekokta Herba Seledri, Rf teoritis apiin= 0,30 (Depkes RI, 2010). Tabel I. Harga Rf Bercak Hasil Elusi pada UV 365 nm Nomor Totolan Fase Diam Fase Gerak Deteksi 1 2 3 4 Seluloa Toluene : Pereaksi 1-butanol : Sitroborat asam asetat : dan UV akuades 365 nm (2:2:1:5 v/v) 5 Warna yang Terlihat Hijau kekuningan Hijau kekuningan Hijau kekuningan Hijau kekuningan Hijau kekuningan Rf sampel Rf Pembanding Teoritis Apiin (Depkes RI, 2010) 0,29 0,28 0,29 0,30 0,30 0,30 Hasil Uji Pendahuluan Uji pendahuluan bertujuan untuk menentukan waktu pencuplikan darah yang tepat, yaitu ketika ALT menunjukkan aktivitas tertinggi. Pada uji ini tikus dipejankan CCl4 sebanyak 2ml/kgBB dalam olive oil dengan perbandingan 1:1 secara i.p. mengacu pada penelitian Janakat and Al-Merie (2002). Berdasarkan penelitian tersebut dosis 2ml/kgBB merupakan dosis optimum yang dapat meningkatkan enzim ALT tanpa menyebabkan kematian pada tikus. Pemejanan 11

(27) PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI CCl4 dilakukan secara i.p. karena senyawa akan terabsorbsi dengan cepat melalui mesenteric vessels, kemudian ditransfer oleh vena porta ke hati. Di hati, CCl4 akan dimetabolisme terlebih dahulu sebelum kemudian didistribusikan ke sirkulasi sistemik (Turner et al., 2011). Pada uji pendahuluan, dilakukan pencuplikan darah tikus pada jam ke-0, 24 dan 48 setelah pemejanan CCl4 pada tikus. Pengukuran jam ke-0 bertujuan untuk melihat aktivitas serum ALT pada keadaan normal. Menurut Dongare et al. (2013) peningkatan aktivitas serum ALT tertinggi terjadi pada 24 jam setelah injeksi CCl4 dan mulai kembali ke keadaan normal pada jam ke-48. Purata aktivitas serum ALT pada jam ke-0, 24 dan 48 dapat dilihat pada Tabel II. Hasil dari uji T berpasangan dapat dilihat pada Tabel III, dan histogram uji pendahuluan dapat dilihat pada Gambar II. Tabel II. Purata Aktivitas Serum ALT Setelah Pemejanan Karbon Tetraklorida pada Jam ke-0, 24 dan 48. Waktu Pencuplikan Darah Purata Kadar ALT ± SE (U/L) Jam ke-0 42,30 ± 1,76 Jam ke-24 96,50 ± 14,03 Jam ke-48 39,52 ± 5,44 Tabel III. Hasil Uji T Berpasangan Terhadap Aktivitas Serum ALT Setelah Pemejanan Karbon Tetraklorida pada Jam ke-0, 24 dan 48. Waktu Pencuplikan Darah Jam ke-0 Jam ke-0 Jam ke-24 BB (p= 0,022) Jam ke-48 BTB (p= 0,675) Jam ke-24 Jam ke-48 BB (p= 0,022) BTB (p= 0,675) BB (p= 0,004) BB (p= 0,004) Keterangan : BB = Berbeda Bermakna (p<0,05); BTB = Berbeda Tidak Bermakna (p>0,05). 12

(28) PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI 120 Purata ALT (U/L) 100 80 60 96.5 40 20 42.3 39.52 0 Jam ke-0 Jam ke-24 Jam ke-48 Gambar II. Histogram Purata Aktivitas Serum ALT Setelah Pemejanan Karbon Tetraklorida pada Jam ke-0, 24 dan 48. Karbon tetraklorida atau CCl4 merupakan senyawa kimia yang dapat membentuk radikal bebas di dalam tubuh. CCl4 akan dimetabolisme oleh enzim CYP2E1 dan membentuk senyawa radikal triklorometil dan triklorometil peroksi. Senyawa radikal tersebut memiliki kereaktifan yang tinggi, namun radius aksinya kecil. Oleh karena radius aksinya yang kecil, mengakibatkan nekrosis yang diinduksi oleh CCl4 keparahannya lebih tinggi pada sel sentrilobular hati yang memiliki isoenzim CYP dengan konsentrasi tertinggi (Hodgson, 2010). Namun kerusakan ini bersifat reversibel karena hati dapat meregenerasi sel kembali (Udayan, 2015). Adanya akumulasi lemak atau cedera pada hati biasanya dapat menyebabkan perubahan biokimia darah diantaranya peningkatan kadar Alanine Aminotransferase (ALT) (Hodgson, 2010). ALT dianggap sebagai indikator hepatoselular yang spesifik karena merupakan enzim dengan konsentrasi terbesar di hati (Weibrecht et al., 2010). ALT adalah enzim yang berfungsi untuk mengkatalisis transfer gugus amino dari alanin ke alfa-ketoglutarat untuk menghasilkan glutamat dan piruvat sebagai bagian dari metabolisme asam amino dan glukoneogenesis. Kerusakan sel hepatosit akan menyebabkan bocornya ALT ke ruang ekstraseluler dan plasma darah, sehingga kadarnya di darah akan meningkat (Aulbach and Amuzie, 2017). 13

(29) PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI Pada Tabel II terlihat bahwa pada jam ke-24 terjadi peningkatan aktivitas serum ALT sebesar 2,28 kali dibandingkan dengan jam ke-0. Pada Tabel III ditunjukkan bahwa terdapat perbedaan yang bermakna (p= 0,002) antara aktivitas ALT pada jam ke-0 (42,30 ± 1,76 U/L) dengan jam ke-24 (96,50 ± 14,03 U/L). Kenaikan aktivitas serum ALT tersebut mengindikasikan adanya gangguan pada fungsi hati. Untuk memastikan apakah pada jam ke-24 merupakan puncak aktivitas serum ALT, maka dilakukan pengukuran pada jam ke-48. Hasil uji T berpasangan menunjukkan perbedaan yang bermakna (p= 0,004) yang terjadi antara jam ke-24 (96,50 ± 14,03 U/L) dan jam ke-48 (39,52 ± 5,44 U/L), sedangkan perbedaan yang tidak bermakna (p= 0,675) terjadi antara jam ke 48 (39,52 ± 5,44 U/L) dan jam ke-0 (42,30 ± 1,76 U/L). Hal tersebut membuktikan bahwa puncak kenaikan aktivitas serum ALT terjadi pada jam ke-24 dan pada jam ke 48 aktivitas serum ALT sudah kembali normal. Berdasarkan hasil analisis statistik yang diperoleh tersebut, ditetapkan waktu pencuplikan darah dari sinus orbitalis mata tikus yaitu 24 jam setelah pemejanan CCl4 secara i.p. Hasil Uji Pengaruh Pemberian DHS Pada penelitian ini terdapat 3 kelompok kontrol yaitu Kontrol Hepatotoksik, Kontrol Negatif, Kontrol DHS dan 3 kelompok perlakuan yaitu DHS dosis 0,5 ; 1 dan 2 g/kgBB. Potensi hepatoprotektif dari DHS diketahui dengan membandingkan ketiga dosis DHS tersebut. Parameter yang diukur untuk melihat potensi hepatoprotektif adalah penurunan aktivitas serum ALT dari 3 kelompok perlakuan, yang berbeda bermakna dengan kontrol hepatotoksik. Purata aktivitas serum ALT dapat dilihat pada Tabel IV. Histogram purata aktivitas serum ALT dapat dilihat pada Gambar III. dan Persen hepatoprotektif kelompok perlakuan DHS dosis 0,5; 1: dan 2 g/kgBB dapat dilihat pada Tabel V. 14

(30) PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI Tabel IV. Purata Aktivitas Serum ALT pada Kelompok Kontrol dan Kelompok Perlakuan Dosis DHS. Kelompok Purata Aktivitas Serum ALT ± SE (U/L) Kontrol Negatif 40,04 ± 2,28 Kontrol Hepatotoksik 86,72 ± 8,70 Kontrol DHS (6 hari) 38,34 ± 2,21 DHS dosis 0,5 g/kgBB (6 hari + CCl4) 54,58 ± 2,01 DHS dosis 1 g/kgBB (6 hari + CCl4) 46,92 ± 1,67 DHS dosis 2 g/kgBB (6 hari + CCl4) 50,98 ± 2,96 120 Purata ALT (U/L) 100 80 60 86.72 40 20 54.58 40.04 38.34 46.92 50.98 0 Kontrol Negatif Kontrol Kontrol DHS DHS Dosis DHS Dosis 1 DHS Dosis 2 Hepatotoksik 0,5 g/kgBB g/kgBB g/kgBB Gambar III. Histogram Purata Aktivitas Serum ALT pada Kelompok Kontrol dan Kelompok Perlakuan Dosis DHS. Tabel V. Persen Hepatoprotektif Kelompok Perlakuan DHS Dosis 0,5; 1; dan 2 g/kgBB. Kelompok Perlakuan DHS DHS dosis 0,5 g/kgBB DHS dosis 1 g/kgBB DHS dosis 2 g/kgBB Persen Hepatoprotektif 69 % 85 % 77 % 15

(31) PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI Kadar ALT yaang didapat kemudian dianalisis menggunakan Saphiro Wilk didapatkan bahwa data terdistribusi normal (p>0,05), selanjutnya dianalisis menggunakan Levene Test menunjukkan variasi homogen (p>0,05). Kemudian dilanjutkan dengan uji One Way ANOVA dan Post Hoc Tukey. Hasil uji statistik post hoc Tukey dapat dilihat pada Tabel VI. Tabel VI. Hasil Uji Post Hoc Tukey pada Kelompok Kontrol dan Kelompok Perlakuan DHS. Kelompok Kontrol Negatif Kontrol Negatif Kontrol Hepatotoksik Kontrol Hepatotoksik BB (p= 0,000) Kontrol DHS BTB (p= 1,000) BB (p= 0,000) DHS 0,5 g/kgBB BTB (p= 0,164) BB (p= 0,000) BTB (p= 0,093) DHS 1 g/kgBB BTB (p= 0,841) BB (p= 0,000) BTB (p= 0,683) BTB (p= 0,773) DHS 2 g/kgBB BTB (p= 0,437) BB (p= 0,000) BTB (p= 0,286) BTB (p= 0,989) BTB (p= 0,980) BB (p= 0,000) BTB BB Kontrol DHS (p= 1,000) (p= 0,000) BTB BB BTB DHS 0,5 (p= 0,164) (p= 0,000) (p= 0,093) g/kgBB BTB BB BTB BTB DHS 1 (p= 0,841) (p= 0,000) (p= 0,683) (p= 0,773) g/kgBB BTB BB BTB BTB BTB DHS 2 (p= 0,437) (p= 0,000) (p= 0,286) (p= 0,989) (p= 0,980) g/kgBB Keterangan : BB = Berbeda Bermakna (p<0,05); BTB = Berbeda Tidak Bermakna (p>0,05). Kontrol Negatif Pada kelompok kontrol negatif, hewan uji diberikan pelarut karbon tetraklorida yaitu olive oil dengan dosis 2ml/kgBB secara i.p. Tujuan dari perlakuan ini adalah untuk memberikan gambaran terkait kondisi normal hati tikus. Pemberian olive oil diharapkan tidak berpengaruh terhadap kenaikan aktivitas serum ALT, sehingga apabila terjadi peningkatan aktivitas serum ALT adalah dikarenakan efek dari CCl4. Berdasarkan hasil pengukuran serum ALT pada kelompok kontrol negatif didapatkan aktivitas serum ALT sebesar 40,04 ± 2,28 U/L. Gomes (2015) melaporkan bahwa pemberian olive oil 2ml/kgBB pada jam ke-0 dan 24 menunjukkan hasil yang tidak berbeda bermakna, hal ini menujukkan bahwa olive oil sebagai pelarut tidak memberikan pengaruh terhadap kenaikan aktivitas serum ALT. Pelaporan tersebut juga didukung oleh penelitian Feng et al. (2010) dimana pemberian olive oil tidak menyebabkan kenaikan aktivitas serum ALT serta tidak menunjukkan adanya perubahan histopatologi hati. 16

(32) PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI Kontrol Hepatotoksik Pada kelompok kontrol hepatotoksik, hewan uji dipejankan CCl4 2ml/kgBB dalam olive oil dengan perbandingan 1:1 secara i.p. Kemudian pencuplikan darah dilakukan 24 jam setelah pemejanan. Tujuan dari perlakuan ini adalah untuk memberikan gambaran aktivitas enzim ALT saat terjadi kerusakan hati. Berdasarkan analisis statistik ditunjukkan bahwa terdapat perbedaan yang bermakna (p= 0,000) antara aktivitas serum ALT kontrol hepatotoksik (86,72 ± 8,70 U/L) dengan kontrol negatif (40,04 ± 2,28 U/L). Terjadi peningkatan aktivitas serum ALT pada kelompok kontrol hepatotoksik sebanyak 2,2 kali dari kontrol negatif. Hal tersebut kurang sesuai dengan penelitian yang dilakukan oleh Zimmerman (1999), dimana steatosis atau nekrosis yang diakibatkan oleh karbon tetraklorida ditandai dengan naiknya kadar ALT sebanyak 3 kali lipat dari nilai normal. Oleh karena itu untuk melihat apakah hati tikus sudah mengalami tanda steatosis atau kerusakan, diperlukan uji pendukung yaitu uji histopatologi yang merupakan uji standar untuk melihat apakah sudah terjadi kerusakan pada hati (Wu et al., 2018). Karbon tetraklorida atau CCl4 merupakan senyawa kimia yang dapat membentuk radikal bebas di dalam tubuh. CCl4 akan dimetabolisme oleh enzim CYP2E1 dan membentuk senyawa radikal triklorometil dan triklorometil peroksi (Hodgson, 2010). Senyawa hasil metabolisme inilah yang menyebabkan kerusakan pada sel hati melalui inisiasi peroksidasi lipid, yang diikuti dengan kenaikan Ca2+ intraseluler, deplesi GSH, dan pelepasan ion besi. (Halliwell and Gutteridge, 2015). Adanya kerusakan pada sel hati, dapat menyebabkan bocornya ALT ke ruang ekstraseluler dan plasma darah, sehingga kadarnya di darah akan meningkat (Aulbach and Amuzie, 2017). Kontrol DHS Pada kelompok kontrol DHS, hewan uji diberikan DHS dosis tertinggi yaitu 2 g/kgBB selama 6 hari berturut-turut. Tujuan dari perlakuan ini adalah untuk mengetahui pengaruh pemberian DHS terhadap aktivitas serum ALT. Berdasarkan analisis statistik pengukuran serum ALT pada kelompok kontrol DHS (38,34 ± 2,21 U/L) didapatkan hasil yang berbeda tidak bermakna (p= 17

(33) PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI 1,000) dengan kontrol negatif (40,04 ± 2,28 U/L) dan menunjukkan hasil yang berbeda bermakna (p= 0,000) dengan kontrol hepatotoksik (86,72 ± 8,70 U/L). Hal tersebut menjelaskan bahwa pemberian DHS selama 6 hari tidak memberikan pengaruh terhadap kenaikan aktivitas serum ALT. Kelompok Perlakuan Jangka Panjang DHS Pada kelompok perlakuan DHS, hewan uji diberikan DHS dosis 0,5;1 dan 2 g/kgBB selama 6 hari berturut-turut kemudian pada hari ke 7 dipejankan karbon tetraklorida dan pada hari kedelapan dilakukan pencuplikan darah. Hasil yang diperoleh dari pengukuran aktivitas serum ALT pada DHS dosis 0,5g/kgBB yaitu sebesar 54,58 ± 2,01 U/L. Berdasarkan analisis statistik didapatkan bahwa DHS dosis 0,5 g/kgBB memiliki efek hepatoprotektif yang ditunjukkan dengan hasil aktivitas serum ALT yang berbeda bermakna (p= 0,000) dengan kelompok kontrol hepatotoksik (86,72 ± 8,70 U/L), dan sudah mampu mengembalikan fungsi hati ke keadaan normal yang ditunjukkan dengan hasil aktivitas serum ALT yang berbeda tidak bermakna (p= 0,164) dengan kelompok kontrol negatif (40,04 ± 2,28 U/L). Hasil perhitungan persen hepatoprotektif yang didapat pada dosis 0,5 g/kgBB adalah sebesar 69 %. Pada pemberian DHS dosis 1 g/kgBB didapatkan hasil aktivitas serum ALT sebesar 46,92 ± 1,67 U/L. Berdasarkan analisis statistik didapatkan bahwa DHS dosis 1 g/kgBB memiliki efek hepatoprotektif yang ditunjukkan dengan hasil aktivitas serum ALT yang berbeda bermakna (p= 0,000) terhadap kelompok kontrol hepatotoksik (86,72 ± 8,70 U/L) , dan sudah mampu mengembalikan fungsi hati ke keadaan normal yang ditunjukkan dengan hasil aktivitas serum ALT yang berbeda tidak bermakna (p= 0,841) terhadap kelompok kontrol negatif (40,04 ± 2,28 U/L). Hasil perhitungan persen hepatoprotektif yang didapat pada dosis 1 g/kgBB adalah sebesar 85 %. Pada pemberian DHS dosis 2 g/kgBB didapatkan hasil aktivitas serum ALT sebesar 50,98 ± 2,96 U/L. Berdasarkan analisis statistik didapatkan bahwa DHS dosis 2 g/kgBB memiliki efek hepatoprotektif yang ditunjukkan dengan hasil aktivitas serum ALT yang berbeda bermakna (p= 0,000) terhadap kelompok kontrol hepatotoksik (86,72 ± 8,70 U/L), dan sudah mampu mengembalikan 18

(34) PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI fungsi hati ke keadaan normal yang ditunjukkan dengan hasil aktivitas serum ALT yang berbeda tidak bermakna (p= 0,437) terhadap kelompok kontrol negatif (40,04 ± 2,28 U/L). Hasil perhitungan persen hepatoprotektif yang didapat pada dosis 2 g/kgBB adalah sebesar 77 %. Berdasarkan hasil analisis tersebut dapat disimpulkan bahwa ketiga peringkat dosis DHS memiliki efek pencegahan kenaikan aktivitas serum ALT dan sudah mampu mengembalikan fungsi hati ke keadaan normal. DHS Dosis 0,5 g/kgBB (54,58 ± 2,01 U/L) memiliki hasil aktivitas serum ALT yang berbeda tidak bermakna (p= 0,773) terhadap DHS dosis 1 g/kgBB (46,92 ± 1,67 U/L) dan berbeda tidak bermakna (p= 0,989) terhadap DHS dosis 2 g/kgBB (50,98 ± 2,96 U/L). Begitu pula dengan dosis 1 g/kgBB (46,92 ± 1,67 U/L) yang memiliki hasil aktivitas serum ALT yang berbeda tidak bermakna (p=0,980) dengan dosis 2 g/kgBB (50,98 ± 2,96 U/L). Berdasarkan hasil tersebut, dapat diketahui bahwa tidak terdapat kekerabatan antara dosis pemberian DHS dengan efek pencegahan kenaikan aktivitas serum ALT, dimana peningkatan dosis tidak memberikan perbedaan bermakna terhadap peningkatan efek. Pada penelitian ini efek hepatoprotektif dari tinggi ke rendah didapatkan pada pemberian DHS dosis 1; 2 dan 0,5 g/kgBB, dengan persen efek 85%, 77%, dan 69%. Dosis menengah atau dosis 1 g/kgBB memiliki efek yang lebih tinggi dibandingkan dengan dua peringkat dosis lainnya. Pada dosis tertinggi yaitu dosis 2 g/kgBB justru terjadi penurunan efek, hal ini mungkin terjadi karena flavonoid dalam konsentrasi yang tinggi dapat memicu terbentuknya senyawa pro-oxidant (Ling et al. 2010). Senyawa pro-oxidant dapat terbentuk dari flavonoid yang teroksidasi setelah menangkap radikal bebas. Senyawa tersebut dapat memicu terjadinya oksidasi dan kerusakan sel (Halliwell and Gutteridge 2015), yang dalam hal ini adalah sel hati. Diduga hal tersebut yang menyebabkan terjadinya penurunan efek hepatoprotektif DHS pada dosis tertinggi yang diberikan. Senyawa tetraklorida adalah senyawa yang dapat menyebabkan kerusakan hati. Mekanisme perusakan oleh CCl4 diawali dari perubahan CCl4 menjadi radikal triklorometil (CCl3•), kemudian melalui reaksi dengan oksigen akan terbentuk senyawa radikal triklorometil peroksi (CCl3O2•). (Hodgson, 2010). 19

(35) PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI Senyawa hasil metabolisme inilah yang menyebabkan kerusakan pada hati melalui inisiasi peroksidasi lipid, yang diikuti dengan kenaikan Ca2+ intraseluler, deplesi GSH, dan pelepasan ion besi (Halliwell and Gutteridge 2015) Flavonoid merupakan salah satu senyawa yang memiliki aktivitas sebagai antioksidan (Musarofah, 2015) Sifat antioksidan yang dimiliki oleh flavonoid disebabkan oleh adanya gugus fenolik hidroksil yang melekat pada struktur cincin, gugus ini memiliki beberapa mekanisme diantaranya dapat bertindak sebagai agen pereduksi, donator hidrogen, penstabil oksigen singlet, penangkap radikal superoksida, pengkelat logam dan pengaktif enzim antioksidan (Carocho and Ferreira, 2013). Salah satu contoh senyawa flavonoid yang ditemukan dalan tanaman seledri adalah apiin (Al-snafi, 2017; Kooti et al., 2014). Efek apiin sebagai antioksidan secara in vivo sebelumnya pernah diteliti oleh Li et al. (2013), pada penelitian tersebut dilakukan perlakuan dan pengukuran terhadap kadar MDA, SOD, GSH-Px dan CAT. MDA merupakan salah satu indikator terjadinya lipid peroksidasi dan kerusakan membran sel, sedangkan SOD, GSH-Px dan CAT adalah antioksidan enzimatis yang dimiliki oleh tubuh untuk menangkal radikal bebas. Berdasarkan uji tersebut didapatkan bahwa pemberian apiin pada tikus mampu menurunkan konsentrasi MDA 24% dibandingkan dengan kontrol. Selain itu apiin juga terbukti mampu meningkatkan aktivitas dari antioksidan enzimatis SOD, GSH-Px dan CAT secara signifikan dibandingkan dengan kontrol. Beberapa mekanisme tersebut yang kemudian diduga sebagai mekanisme apiin dalam menurunkan aktivitas triklorometil yang dapat menyebabkan steatosis dan kerusakan pada hati. KESIMPULAN Dekokta Herba Seledri (DHS) dosis 0,5; 1 dan 2 g/kgBB memiliki efek hepatoprotektif dengan menurunkan aktivitas serum ALT pada tikus terinduksi karbon tetraklorida. Dosis efektif DHS sebagai hepatoprotektor adalah 1 g/kgBB. 20

(36) PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI SARAN Perlu dilakukan uji pendukung yaitu uji histopatologi hati untuk melihat perubahan serta kerusakan hati yang terjadi. DAFTAR PUSTAKA Abdou., S.H Salah, H. Booles, E.A Abdul Rahim., 2012. Antioxidant effect of celery against carbontetrachloride induced hepatic damage in rats. African Journal of Microbiology Research. Vol. 6(27), 5657-5667. Al-snafi, A.E., 2017. The Pharmacology of Apium graveolens. IJPRS, 1 (3), 671677. BPOM RI., 2012. Acuan Sediaan Herbal, Vol. 7 Edisi I. Jakarta, Direktorat Obat Asli Indonesia, 7-8 Carocho, M. and Ferreira., 2013. A review on antioxidants , prooxidants and related controversy, Food and Chemical Toxicology, 51, 15–25. Depkes RI., 2008. Farmakope Herbal Indonesia, edisi I, Jakarta, Departemen Kesehatan Republik Indonesia, 25-28, 150-155. Depkes RI., 2010. Suplemen I Farmakope Herbal Indonesia. Jakarta, Departemen Kesehatan Republik Indonesia, 93-95. Fan, J., Kim, S., and Wong, V.W., 2017. Public Health New trends on obesity and NAFLD in Asia. Journal of Hepatology, 67 (4), 862–873. Farrell, G.C., Wong, V.W., Chitturi S., 2013. NAFLD in Asia: as common and important as in the West. Nat Rev Gastroenterol Hepatol, (10), 307-18. Feng, Y., Siu, K., Ye, X., Wang, N., Yuen, M., Leung, C., and Tong, Y., 2010. Hepatoprotective effects of berberine on carbon tetrachloride-induced acute hepatotoxicity in rats, Chinese Medicine Journal, 0–6. Gomes, A., 2015, Efek Hepatoprotektif Pemberian Jangka Panjang Dekok Herba Bidens pilosa L. Terhadap Aktivitas ALT-AST Serum pada Tikus Betina Terinduksi Karbon Tetraklorida, Skripsi, Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta. 21

(37) PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI Halliwell, B., and Gutteridge, J.M.C., 2015. Free Radicals in Biology and Medicine Fifth Edition. New York, Oxford University Press, 160-208, 468-470, 528-530, 551. Haryono., 2009. Ayo mengenal tanaman obat. Jakarta, Badan Penelitian dan Pengembangan Pertanian Kementrian Pertanian, 325-326. Hodgson, E., 2010. A textbook of modern toxicology 4th ed. Hoboken, New Jersey, John Wiley & Sons Inc. 279-283. Janakat, S. and Al-Merie, H., 2002. Optimization of The Dose and Route of Injection, and Characterisation of The Time Course of Carbon Tetrachloride-Induced Hepatotoxicity in The Rat. Journal of Pharmacological and Toxicological Methods, 48, 41–44. Kooti, Wesam., Akbari, Sara Ali, Samani, Majid Asadi, Ghadery, Hosna., Larky, Damoon Ashtary., 2014. A review on medicinal plant of Apium graveolens. Advanced Herbal Medicine, 1 (1), 48-59. Ling, L.T., Palanisamy, U.D., and Cheng, H.M., 2010. Prooxidant/Antioxidant Ratio (ProAntidex) as a Better Index of Net Free Radical Scavenging Potential, 7884–7892. Moghaddasifar, I., Lankarani, K. B., Moosazadeh, M., Afshari, M., Ghaemi, A., Alimeramezany, M., Gharebagh, R. A., Malary, M., 2016. Prevalence of Non-alcoholic Fatty Liver Disease and Its Related Factors in Iran. International Journal of Organ Transplantation Medicine. 7 (3), 150-153. Musarofah., 2015. Tumbuhan Antioksidan. Bandung, Remaja Rosdakarya. 4-7, 13-15 Nollet, L.M.L and Gutierrez-Uribe, J.A., 2018. Phenolic Compounds in Food: Characterization and Analysis. USA, CRC Press. Olson, K R., 2018. Poisoning & Drug Overdose 7th edition, United States McGraw-Hill Education, 184-185. Ramadhan, P., 2015. Mengenal Antioksidan. Yogyakarta, Graha Ilmu. 9-12. Rubiyanto, D., 2017. Metode Kromatografi: Prinsip Dasar, Praktikum dan Pendekatan Pembelajaran Kromatografi. Yogyakarta, Deepublish. 28 22

(38) PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI Turner, P. V, Brabb, T., Pekow, C., and Vasbinder, M.A., 2011. Administration of Substances to Laboratory Animals : Routes of Administration and Factors to Consider, 50 (5). Udayan, A., 2015.Liver regeneration : basic mechanisms, relevant models and clinical applications, London , Elsevier Academic Press, 18,19. Weibrecht, K., Dayno, M., Darling, C., Bid, S.B., 2010. Liver Aminotransferases Are Elevated with Rhabdomyolysisin the Absence of Significant Liver Injury J. Med. Toxicol. 6:294–300. Wibowo, D dan Paryana, W., 2009. Anatomi Tubuh Manusia, Yogyakarta, Graha Ilmu Publishing, 353-356. Wu, J., Pan, L., Jin, X., Li, W., Li, H., Chen, J., and Yang, W., n.d. The role of oxymatrine in regulating TGF-β1 in rats with, 33 (3), 207–215. Zimmerman, H.J., 1999. Hepatotoxicity: The Adverse Effects of Drugs and Other Chemicals on The Liver 2nd Edition. Philadhelpia, Lippincott Williams & Wilkins. 23

(39) PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI LAMPIRAN 24

(40) PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI Lampiran 1. Surat Ethical Clearance Kedokteran UGM 25 dari Komisi Etik Fakultas

(41) PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI Lampiran 2. Surat Keterangan Pengambilan Herba Seledri dari CV. Merapi Farma Herbal 26

(42) PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI Lampiran 3. Surat Determinasi Herba Seledri dari Departemen Biologi Farmasi Fakultas Farmasi UGM 27

(43) PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI Lampiran 4. Surat Keterangan Analisa Data di CE&BU Fakultas Kedokteran UGM 28

(44) PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI Lampiran 5. Herba Seledri dan Simplisia Herba Seledri Gambar 4. Herba Seledri Gambar 5. Simplisia Herba Seledri Gambar 6. Serbuk Simplisia Herba Seledri. 29

(45) PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI Lampiran 6. Penetapan Kadar Air Serbuk Simplisia Herba Seledri menggunakan Moisture Balance Hasil rata-rata replikasi = = 6,62 % 30

(46) PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI Lampiran 7. Pembuatan DHS Gambar 7. Pembuatan DHS Gambar 8. DHS 31

(47) PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI Lampiran 8. Uji KLT Sampel DHS Gambar 9. Hasil Elusi Sampel DHS pada UV 365 nm Gambar 10. Hasil Elusi dan Pengukuran Rf Sampel DHS pada Cahaya Ruang (tanpa UV) 32

(48) PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI Lampiran 9. Prosedur Penelitian Terhadap Hewan Uji Gambar 11. Pemeliharaan Hewan Uji Gambar 12. Pemberian DHS secara Peroral 33

(49) PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI Gambar 13. Pemejanan Karbon Tetraklorida secara Intraperitoneal Gambar 14. Pengambilan darah melalui vena orbitalis mata tikus 34

(50) PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI Lampiran 10. Hasil analisis statistik aktivitas serum ALT pada uji pendahuluan Case Processing Summary ALT KELOMPOK JAM KE-0 JAM KE-24 JAM KE-48 Cases Missing Valid N Percent 5 100,0% 5 100,0% 5 100,0% N 0 0 0 Percent 0,0% 0,0% 0,0% N Total Percent 5 100,0% 5 100,0% 5 100,0% Descriptives Alt_0 Alt_24 Alt_48 Mean 95% Confidence Interval for Mean 5% Trimmed Mean Median Variance Std. Deviation Minimum Maximum Range Interquartile Range Skewness Kurtosis Mean 95% Confidence Interval for Mean 5% Trimmed Mean Median Variance Std. Deviation Minimum Maximum Range Interquartile Range Skewness Kurtosis Mean 95% Confidence Interval for Mean Lower Bound Upper Bound Lower Bound Upper Bound Lower Bound Upper Bound 5% Trimmed Mean Median Variance Std. Deviation Minimum Maximum Range Interquartile Range Skewness Kurtosis 35 Statistic 42.3000 37.4179 47.1821 42.3278 42.4000 15.460 3.93192 37.20 46.90 9.70 7.55 -.182 -1.546 96.5000 57.5551 135.4449 95.5500 83.8000 983.770 31.36511 69.60 140.50 70.90 58.95 .761 -1.620 39.5200 24.4210 54.6190 39.6833 37.9000 147.872 12.16026 24.30 51.80 27.50 23.65 -.073 -2.181 Std. Error 1.75841 .913 2.000 14.02690 .913 2.000 5.43824 .913 2.000

(51) PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI Tests of Normality a Kolmogorov-Smirnov KELOMPOK Statistic Df Sig. * ALT JAM KE-0 ,170 5 ,200 * JAM KE-24 ,257 5 ,200 * JAM KE-48 ,242 5 ,200 *. This is a lower bound of the true significance. a. Lilliefors Significance Correction Shapiro-Wilk Statistic df ,971 5 ,869 5 ,899 5 Sig. ,884 ,261 ,403 T-TEST PAIRS=Alt_0 Alt_0 Alt_24 WITH Alt_24 Alt_48 Alt_48 (PAIRED) /CRITERIA=CI(.9500) /MISSING=ANALYSIS. T-Test Pair 1 Pair 2 Pair 3 Pair 1 Pair 2 Pair 3 Alt_0 Alt_24 Alt_0 Alt_48 Alt_24 Alt_48 Paired Samples Statistics Mean N Std. Deviation Std. Error Mean 42.3000 5 3.93192 1.75841 96.5000 5 31.36511 14.02690 42.3000 5 3.93192 1.75841 39.5200 5 12.16026 5.43824 96.5000 5 31.36511 14.02690 39.5200 5 12.16026 5.43824 Paired Samples Correlations N Correlation Alt_0 & Alt_24 5 -.389 Alt_0 & Alt_48 5 -.277 Alt_24 & Alt_48 5 .882 Sig. .517 .652 .048 Paired Samples Test Paired Differences Mean Pair 1 Pair 2 Pair 3 Alt_0 Alt_24 Alt_0 Alt_48 Alt_24 Alt_48 Std. Deviation Std. Error Mean 95% Confidence Interval of the Difference Lower Upper -54.20000 33.09449 14.80030 -95.29223 -13.10777 2.78000 13.77632 6.16096 -14.32556 19.88556 56.98000 21.42398 9.58110 30.37861 83.58139 Paired Samples Test Kelompok Pair 1 Pair 2 Pair 3 T Alt_0 - Alt_24 Alt_0 - Alt_48 Alt_24 - Alt_48 df -3.662 .451 5.947 36 4 4 4 Sig. (2-tailed) .022 .675 .004

(52) PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI Lampiran 11. Hasil analisis statistik aktivitas serum ALT pada kelompok kontrol dan perlakuan DHS Case Processing Summary Cases Valid Missing Total N Percent N Percent N ALT Kontrol Negatif 5 100,0% 0 0,0% 5 Kontrol Hepatotoksik 5 100,0% 0 0,0% 5 Kontrol DHS 5 100,0% 0 0,0% 5 DHS dosis 0,5 5 100,0% 0 0,0% 5 g/kgBB DHS dosis 1 g/kgBB 5 100,0% 0 0,0% 5 DHS dosis 2 g/kgBB 5 100,0% 0 0,0% 5 Explore Kelompok 1 Descriptives Kelompok 1 ALT Kontrol Mean 95% Confidence Interval for Lower Bound Negatif Mean Upper Bound 5% Trimmed Mean Median Variance Std. Deviation Minimum Maximum Range Interquartile Range Skewness Kurtosis Kelompok Kontrol Hepatotoksik Mean 95% Confidence Interval for Mean Lower Bound Upper Bound 5% Trimmed Mean Median Variance Std. Deviation Minimum Maximum Range Interquartile Range Skewness Kurtosis Kontrol DHS Mean 95% Confidence Interval for Mean 5% Trimmed Mean Median Lower Bound Upper Bound Percent 100,0% 100,0% 100,0% 100,0% 100,0% 100,0% Statistic 40,0400 33,7023 46,3777 40,1056 42,6000 26,053 5,10421 33,50 45,40 11,90 9,50 -,507 -2,313 2,28267 86,7200 62,5551 110,884 9 85,9056 83,8000 378,757 19,4616 8 70,30 117,80 47,50 33,80 1,221 1,327 8,70353 38,3400 32,1956 44,4844 2,21305 38,2778 37,7000 37 Std. Error ,913 2,000 ,913 2,000

(53) PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI Variance Std. Deviation Minimum Maximum Range Interquartile Range Skewness Kurtosis 24,488 4,94854 32,30 45,50 13,20 8,80 ,479 ,358 DHS dosis 0,5 Mean 95% Confidence Interval for g/kgBB Mean Lower Bound Upper Bound 5% Trimmed Mean Median Variance Std. Deviation Minimum Maximum Range Interquartile Range Skewness Kurtosis DHS dosis 1 g/kgBB 54,8278 55,8000 20,302 4,50577 46,90 57,80 10,90 7,05 -1,751 3,209 Mean 95% Confidence Interval for Mean Lower Bound Upper Bound 5% Trimmed Mean Median Variance Std. Deviation Minimum Maximum Range Interquartile Range Skewness Kurtosis DHS dosis 2 g/kgBB 54,5800 48,9853 60,1747 46,9200 42,2696 51,5704 46,8389 47,8000 14,027 3,74526 43,10 52,20 9,10 6,80 ,423 -,828 Mean 95% Confidence Interval for Mean 5% Trimmed Mean Median Variance Std. Deviation Minimum Maximum Range Interquartile Range Skewness Kurtosis Lower Bound Upper Bound 50,9800 42,7543 59,2057 50,8611 47,5000 43,887 6,62473 44,80 59,30 14,50 12,50 ,586 -2,766 38 ,913 2,000 2,01504 ,913 2,000 1,67493 ,913 2,000 2,96267 ,913 2,000

(54) PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI ALT Tests of Normality a Kolmogorov-Smirnov Statistic df Sig. ,292 5 ,189 * ,215 5 ,200 * ,151 5 ,200 ,302 5 ,154 Kelompok 1 kontrol Negatif kontrol Hepatotoksik kontrol DHS DHS dosis 0,5 g/kgBB DHS dosis 1 g/kgBB DHS dosis 2 g/kgBB ,219 ,300 5 5 Shapiro-Wilk Statistic df ,889 5 ,876 5 ,988 5 ,791 5 * ,200 ,160 ,907 ,844 Sig. ,350 ,290 ,970 ,069 ,451 ,176 5 5 *. This is a lower bound of the true significance. a. Lilliefors Significance Correction ONEWAY Alt1 BY Kelompok_1 /STATISTICS DESCRIPTIVES HOMOGENEITY /MISSING ANALYSIS /POSTHOC=TUKEY LSD GH ALPHA(0.05). Oneway Descriptives ALT N kontrol Negatif kontrol Hepatotoksik kontrol DHS DHS dosis 0,5 g/kgBB DHS dosis 1 g/kgBB DHS dosis 2 g/kgBB Total 5 5 5 5 5 5 30 Mean Std. Deviation Std. Error 40,0400 5,10421 2,28267 86,7200 19,46168 8,70353 38,3400 4,94854 2,21305 54,5800 4,50577 2,01504 46,9200 3,74526 1,67493 50,9800 6,62473 2,96267 52,9300 18,42712 3,36432 95% Confidence Interval for Mean Lower Bound 33,7023 62,5551 32,1956 48,9853 42,2696 42,7543 46,0492 Descriptives ALT 95% Confidence Interval for Mean Upper Bound 46,3777 110,8849 44,4844 60,1747 51,5704 59,2057 Kontrol Negatif Kontrol Hepatotoksik Kontrol DHS DHS dosis 0,5 g/kgBB DHS dosis 1 g/kgBB DHS dosis 2 g/kgBB Minimum 33,50 70,30 32,30 46,90 43,10 44,80 Maximum 45,40 117,80 45,50 57,80 52,20 59,30 Test of Homogeneity of Variances Levene Statistic 3,516 ALT df1 df2 5 24 Sig. ,054 ANOVA ALT Between Groups Within Groups Total Sum of Squares 7817,147 2030,056 9847,203 df 5 24 29 39 Mean Square 1563,429 84,586 F 18,483 Sig. ,000

(55) PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI Post Hoc Tests Multiple Comparisons Dependent Variable: ALT Tukey HSD (I) Kelompok 1 Kontrol Negatif (J) Kelompok 1 kontrol hepatotoksik kontrol DHS DHS dosis 0,5 g/kgBB DHS dosis 1 g/kgBB DHS dosis 2 g/kgBB Kontrol kontrol negatif Hepatotoksik kontrol DHS DHS dosis 0,5 g/kgBB DHS dosis 1 g/kgBB DHS dosis 2 g/kgBB Kontrol DHS kontrol negatif kontrol hepatotoksik DHS dosis 0,5 g/kgBB DHS dosis 1 g/kgBB DHS dosis 2 g/kgBB DHS dosis 0,5 kontrol negatif g/kgBB kontrol hepatotoksik kontrol DHS DHS dosis 1 g/kgBB DHS dosis 2 g/kgBB DHS dosis 1 kontrol negatif g/kgBB kontrol hepatotoksik kontrol DHS DHS dosis 0,5 g/kgBB DHS dosis 2 g/kgBB DHS dosis 2 kontrol negatif g/kgBB kontrol hepatotoksik kontrol DHS DHS dosis 0,5 g/kgBB Mean Difference (I-J) * 46,68000 1,70000 -14,54000 95% Confidence Interval Lower Upper Bound Bound -64,6649 28,6951 -16,2849 19,6849 -32,5249 3,4449 Std. Error 5,81672 Sig. ,000 5,81672 5,81672 1,000 ,164 -6,88000 5,81672 ,841 -24,8649 11,1049 -10,94000 5,81672 ,437 -28,9249 7,0449 46,68000 * 48,38000 * 32,14000 * 5,81672 5,81672 5,81672 ,000 ,000 ,000 28,6951 30,3951 14,1551 64,6649 66,3649 50,1249 39,80000 * 5,81672 ,000 21,8151 57,7849 35,74000 * 5,81672 ,000 17,7551 53,7249 -1,70000 * 48,38000 -16,24000 5,81672 5,81672 1,000 ,000 -19,6849 -66,3649 5,81672 ,093 -34,2249 16,2849 30,3951 1,7449 -8,58000 5,81672 ,683 -26,5649 9,4049 -12,64000 5,81672 ,286 -30,6249 5,3449 14,54000 * 32,14000 16,24000 7,66000 5,81672 5,81672 ,164 ,000 -3,4449 -50,1249 5,81672 5,81672 ,093 ,773 -1,7449 -10,3249 32,5249 14,1551 34,2249 25,6449 3,60000 5,81672 ,989 -14,3849 21,5849 6,88000 * 39,80000 8,58000 -7,66000 5,81672 5,81672 ,841 ,000 -11,1049 -57,7849 5,81672 5,81672 ,683 ,773 -9,4049 -25,6449 24,8649 21,8151 26,5649 10,3249 -4,06000 5,81672 ,980 -22,0449 13,9249 10,94000 * 35,74000 12,64000 -3,60000 5,81672 5,81672 ,437 ,000 -7,0449 -53,7249 5,81672 5,81672 ,286 ,989 -5,3449 -21,5849 28,9249 17,7551 30,6249 14,3849 40

(56) PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI DHS dosis 1 g/kgBB 4,06000 *. The mean difference is significant at the 0.05 level. 41 5,81672 ,980 -13,9249 22,0449

(57) PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI Lampiran 12. Hasil Uji T Berpasangan Terhadap Aktivitas Serum ALT Setelah Pemejanan Karbon Tetraklorida pada Jam ke-0, 24 dan 48. Waktu Pencuplikan Darah Jam ke-0 Jam ke-24 Jam ke-0 Jam ke-24 Jam ke-48 Jam ke-48 BB BTB (p= 0,022) (p= 0,675) BB (p= 0,004) BB (p= 0,022) BTB BB (p= 0,675) (p= 0,004) Keterangan : BB = Berbeda Bermakna (p<0,05); BTB = Berbeda Tidak Bermakna (p>0,05). 42

(58) PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI Lampiran 13. Hasil Uji Post Hoc Tukey pada Kelompok Kontrol dan Kelompok Perlakuan DHS. Kelompok Kontrol Negatif Kontrol Hepatotoksik Kontrol DHS DHS 0,5 g/kgBB DHS 1 g/kgBB DHS 2 g/kgBB Kontrol BB BTB BTB BTB BTB Negatif (p= 0,000) (p= 1,000) (p= 0,164) (p= 0,841) (p= 0,437) Kontrol BB BB BB BB BB Hepatotok(p= 0,000) (p= 0,000) (p= 0,000) (p= 0,000) (p= 0,000) sik Kontrol BTB BB BTB BTB BTB DHS (p= 1,000) (p= 0,000) (p= 0,093) (p= 0,683) (p= 0,286) DHS dosis BTB BB BTB BTB BTB 0,5 g/kgBB (p= 0,164) (p= 0,000) (p= 0,093) (p= 0,773) (p= 0,989) DHS dosis 1 BTB BB BTB BTB BTB g/kgBB (p= 0,841) (p= 0,000) (p= 0,683) (p= 0,773) (p= 0,980) DHS dosis 2 BTB BB BTB BTB BTB g/kgBB (p= 0,437) (p= 0,000) (p= 0,286) (p= 0,989) (p= 0,980) Keterangan : BB = Berbeda Bermakna (p<0,05); BTB = Berbeda Tidak Bermakna (p>0,05). 43

(59) PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI Lampiran 14. Perhitungan Peringkat Dosis DHS Rumus: D x BB = C x V D x BB =CxV D x 0,25kg = 0,1 g/ml x 5ml D = D = 2 g/kgBB Dosis tersebut kemudian ditetapkan sebagai dosis tertinggi DHS. Dua peringkat dosis lainnya didapatkan dengan menurunkan dua kali dari dosis tertinggi, sehingga didapatkan peringkat dosis dari terkecil ke terbesar yaitu dosis 0,5;1 dan 2 g/kgBB. 44

(60) PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI Lampiran 15. Perhitungan Persen Efek Hepatoprotektif Rumus: X 100 % DHS 0,5 g/kgBB= X100% = = X 100 % X 100 % = (1- 0,31 ) X 100 % = 0,69 X 100 % = 69 % DHS 1g/kgBB = X100% = = X 100 % = (1- 0,15) X 100 % = 0,85 X 100 % = 85 % DHS 2g/kgBB = X100% = = X 100 % X 100 % = (1- 0,23) X 100 % = 0,77 X 100 % = 77 % 45

(61) PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI Lampiran 16. Perhitungan Konversi Dosis DHS untuk Manusia Faktor konversi tikus 200 g ke manusia 70 kg adalah 56,0 Dosis untuk manusia 70 kg = dosis tikus 200 g x faktor konversi 1. DHS 0,5 g/kgBB tikus = 0,5 g/1000gBB tikus = 0,1 g/200gBB tikus = 0,1 g/200gBB tikus x 56,0 = 5,6 g/70 kg manusia = 0,08 g/kgBB manusia = 80 mg/kgBB manusia 2. DHS 1 g/kgBB tikus = 1 g/1000gBB tikus = 0,2 g/200gBB tikus = 0,2 g/200gBB tikus x 56,0 = 11,2 g/70 kg manusia = 0,16 g/kgBB manusia = 160 mg/kgBB manusia 3. DHS 2 g/kgBB tikus = 2 g/1000gBB tikus = 0,4 g/200gBB tikus = 0,4 g/200gBB tikus x 56,0 = 22,4 g/70 kg manusia = 0,32 g/kgBB manusia = 320 mg/kgBB manusia 46

(62) PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI BIOGRAFI PENULIS Penulis skripsi dengan judul “Uji Hepatoprotektif Dekokta Herba Seledri Terhadap Aktivitas Serum ALT Pada Tikus Betina Galur Wistar Terinduksi Karbon Tetraklorida” dengan nama lengkap Paulina Dewi Rosari, lahir di Ngawi, 26 Juni 1996. Penulis merupakan anak bungsu dari dua bersaudara pasangan Stephanus Sutriyana dan Endang Padmikasih. Penulis telah menempuh pendidikan formal di TK Dharma Wanita Karanggupito (2002-2003), SD Negeri 2 Karanggupito (2003-2009), SMP Negeri 1 Magetan (2009-2012), dan SMA Negeri 1 Magetan (2012-2015). Pada tahun 2015, penulis melanjutkan pendidikan sarjana di Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta. Selama menempuh pendidikan sarjana, penulis aktif mengikuti kegiatan kepanitiaan, diantaranya menjadi anggota divisi Kesekretariatan panitia Pelepasan Wisuda II (2015), koordinator divisi Kesekretariatan panitia Pelepasan Wisuda I (2016), dan menjadi anggota divisi PDD (Publikasi, Dekorasi, dan Dokumetasi) pada kegiatan eksternal Color Zumba Party Osteoporosis Day bekerjasama dengan Farmasi UGM dan UAD (2016). Selain itu penulis juga aktif dalam organisasi diantaranya yaitu tergabung dalam Cosmetics Student Club Fakultas Farmasi sebagai anggota, serta UKM Pengabdian Masyarakat Universitas Sanata Dharma sebagai pengajar di kali code. 47

(63)

Dokumen baru

Download (62 Halaman)
Gratis

Tags

Dokumen yang terkait

Efek hepatoprotektif pemberian jangka pendek dekok herba Bidens pilosa L. terhadap aktivitas ALT-AST serum pada tikus betina terinduksi karbon tertraklorida.
1
1
112
Efek hepatoprotektif pemberian jangka panjang dekok herba Bidens pilosa L. terhadap aktivitas ALT-AST serum pada tikus betina terinduksi karbon tetraklorida.
1
2
99
Efek hepatoprotektif pemberian jangka pendek infusa herba Bidens pilosa L. terhadap aktivitas ALT-AST serum pada tikus betina terinduksi karbon tetraklorida.
1
4
113
Efek hepatoprotektif jangka panjang dekokta kulit buah persea americana Mill. terhadap aktivitas ALT-AST pada tikus jantan galur wistar terinduksi karbon tetraklorida.
0
2
8
Pengaruh waktu pemberian infusa herba Bidens pilosa L. jangka pendek sebagai hepatoprotektif terhadap aktivitas ALT-AST serum pada tikus betina terinduksi karbon tetraklorida.
3
8
115
Efek hepatoprotektif pemberian jangka panjang infusa herba Bidens pilosa L. terhadap aktivitas ALT-AST serum pada tikus betina terinduksi karbon tetraklorida.
1
1
94
Efek hepatoprotektif jangka pendek infusa biji atung (Parinarium glaberimum Hassk) pada tikus jantan galur wistar terinduksi karbon tetraklorida
0
2
66
Uji efek hepatoprotektif jangka pendek sediaan dekokta kulit Persea americana Mill. terhadap aktivitas alt ast pada tikus terinduksi karbon tetraklorida
0
1
6
Efek hepatoprotektif ekstrak metanol:air (50:50) daun macaranga tanarius L. terhadap kadar ALT-AST serum pada tikus terinduksi karbon tetraklorida - USD Repository
0
0
121
Efek antihepatotoksik infusa herba mimosa pigra L. terhadap tikus putih jantan galur wistar terinduksi karbon tetraklorida - USD Repository
0
0
143
Efek hepatoprotektif jangka pendek dekok biji persea americana mill. terhadap aktivitas ALT-AST pada tikus terinduksi karbon tetraklorida - USD Repository
0
0
113
Efek hepatoprotektif jangka panjang ekstrak metanol-air biji persea americana mill. terhadap aktivitas alt-ast serum pada tikus jantan wistar terinduksi karbon tetraklorida - USD Repository
0
0
153
Efek hepatoprotektif infusa daun macaranga tanarius L. pada tikus jantan galur wistar terinduksi karbon tetraklorida - USD Repository
0
0
106
Efek hepatoprotektif ekstrak etanol daun swietenia mahagoni (l.) jacq. pada tikus jantan galur wistar terinduksi karbon tetraklorida - USD Repository
0
0
112
Efek hepatoprotektif ekstrak metanol herba seledri (Apium graveolens L.) pada tikus betina galur wistar terinduksi karbon tetraklorida - USD Repository
0
0
63
Show more